補(bǔ)體CC檢測免疫比濁法

補(bǔ)體C3&C4檢測（免疫比濁法）一、用途體外定量測定血清、血漿樣品中補(bǔ)體C3&C4（C3&C4）的含量。二、臨床意義（一）概述補(bǔ)體(complement)是存在于正常人和脊椎動物血清及組織液中一種含有酶原活性的蛋白質(zhì)，是機(jī)體免疫防御系統(tǒng)的重要構(gòu)成成分。它涉及約30中可溶性蛋白及膜結(jié)合蛋白，統(tǒng)稱為補(bǔ)體系統(tǒng)。生理狀況下，血清中大多數(shù)補(bǔ)體成分均以無活性的腳前體形式存在，只有在某歧活化物的作用下補(bǔ)體各成分才依次活化，發(fā)生連鎖的酶促反映，體現(xiàn)出多個生物學(xué)活性。（二）臨床意義C3:減少：重要見于免疫復(fù)合物引發(fā)的腎炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、重復(fù)性感染、皮疹、肝炎、肝硬化、關(guān)節(jié)疼痛等。增高：見于多個傳染病及組織損傷和急性炎癥，肝癌等C4:減少：見于免疫復(fù)合物引發(fā)的腎炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、病毒性感染、狼瘡性癥侯群、肝硬化、肝炎等。在SLE，C4的減少常早于其它補(bǔ)體成分，且緩和時較其它成分回升遲。狼瘡性腎炎較非狼瘡性腎炎C4值明顯低下增高：見于多個傳染病、急性炎癥、組織損傷、多發(fā)性骨髓瘤等。

C4含量升高常見于風(fēng)濕熱的急性期、結(jié)節(jié)性動脈周邊炎、皮肌炎、心肌梗塞、Reiter綜合征和多個類型的多關(guān)節(jié)炎等；減少則常見于本身免疫性慢性活動性肝炎、SLE、多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、IgA腎病、亞急性硬化性全腦炎等。三、檢查原理樣品中補(bǔ)體C3&C4（C3&C4）與抗補(bǔ)體C3&C4抗體在液相中相遇，立刻形成不溶性抗原－抗體復(fù)合物，并產(chǎn)生一定濁度。濁度高低反映樣品中C3&C4的含量。通過與同樣解決的補(bǔ)體C3&C4校準(zhǔn)品比較，即可計算出樣品中C3&C4的含量。四、樣品血液樣品原則上采集空腹血（禁食12小時）；患者處在安靜、休息狀態(tài)，減少患者由于運(yùn)動、飲食帶來的影響；靜脈采血時患者應(yīng)取坐位或臥位；止血帶使用后1分鐘內(nèi)采血，回血后立刻松開；對的使用抗凝劑；避免溶血；避免過失性采樣。樣品運(yùn)輸過程中應(yīng)避免過分振蕩、避免樣品容器的破損、避免樣品被污染、避免樣品及唯一性標(biāo)志的丟失和混淆，避免樣品對環(huán)境的污染、水分蒸發(fā)。C3&C4測定樣品為空腹不溶血的血清、血漿（肝素或EDTA抗凝）樣品應(yīng)在低溫條件下運(yùn)輸保存，樣品中C3&C4在2～8℃保存可穩(wěn)定1天，-20℃保存可穩(wěn)定1個月。五、試劑（一）試劑構(gòu)成R1：試劑1緩沖液50mmol/LR2：試劑2抗補(bǔ)體C3&C4抗體500ml/L補(bǔ)體C3&C4多點校準(zhǔn)品另購不同批號試劑中各組份不能交換。（二）試劑準(zhǔn)備R1和R2試劑為即用型液體試劑，開瓶裝載即可使用，用后應(yīng)及時冷藏保存。（三）試劑的保存及穩(wěn)定性1.不能冰凍試劑。2.未開瓶的R1和R2試劑應(yīng)在2～8℃密閉避光貯存，穩(wěn)定時為瓶簽標(biāo)示的使用期。開瓶后的試劑應(yīng)在2～8℃保存，穩(wěn)定時為30天。（四）試劑性能可接受的指標(biāo)空白吸光度：試劑空白在主波長340nm、副波長700nm處，10mm光徑下，吸光度值≤0.500。（五）試劑使用中的注意事項1.嚴(yán)格按照試劑闡明書的規(guī)定使用試劑。2.試劑2～8℃密閉避光貯存可穩(wěn)定至瓶簽標(biāo)示的使用期。對超出使用期的試劑不能使用。3.嚴(yán)禁放置0℃下列保存。4.試劑開瓶后，如果長久放置，會吸取空氣中的二氧化碳，造成pH值下降，造成測定值不精確，因此請盡快使用。5.當(dāng)試劑變混濁或被污染或空白吸光度值＞0.500時，表明試劑已失效，應(yīng)棄去。6.裝載試劑時避免產(chǎn)憤怒泡，否則成果無法確保。7.不同批號的試劑之間盡管批間差很小，但仍然不能混用，否則試劑的穩(wěn)定性將無法確保。（六）防止危險發(fā)生的注意事項使用時應(yīng)避免與人體接觸，當(dāng)試劑誤入口中或眼中，或者附著到皮膚上的時候，請立刻用大量清水沖洗，如有必要，請接受醫(yī)生的治療。（七）解決廢棄物時的注意事項試劑反映后所產(chǎn)生的廢液及使用后的包裝材料應(yīng)集中收集后按照有關(guān)法規(guī)進(jìn)行廢物解決。六、操作環(huán)節(jié)1.基本參數(shù)方法：終點法樣品/試劑：1/84（C3）、1/42（C4）主波長：340nm反映溫度：37℃副波長：700nm反映時間：10min2.操作（1）工作曲線繪制將校準(zhǔn)品濃度由低到高次序排列后，按下表操作：加入物C1C2C3C4C5加入物校準(zhǔn)品（μl）5/10*5/10*5/10*5/10*5/10*校準(zhǔn)品（μl）試劑R1（μl）350350350350350試劑R1（μl）加入物C1C2C3C4C5加入物混勻，37℃恒溫2～5分鐘，340nm波優(yōu)點以空白管調(diào)零測定吸光度A1。試劑R2（μl）707070707070混勻，37℃恒溫5分鐘，340nm波優(yōu)點測定吸光度A2，計算△A=A2-A1，繪制校準(zhǔn)曲線圖。（2）樣品測定加入物空白（B）測定（U）樣品（μl）--5/10*（μl）5/10*--試劑R1（μl）350350混勻，37℃恒溫2～5分鐘，340nm波優(yōu)點以空白管調(diào)零測定吸光度A1。試劑R2（μl）7070混勻，37℃恒溫5分鐘，340nm波優(yōu)點測定吸光度A2，計算△A=A2-A1。注：*表達(dá)C3測定時樣品或校準(zhǔn)品用量為5μl；C4測定時樣品或校準(zhǔn)品用量為10μl。3.操作流程圖空白讀數(shù)R2:70μl5分鐘主波長:340nm副波長:700nm測定讀數(shù)空白調(diào)零溫度:37℃時間:空白讀數(shù)R2:70μl5分鐘主波長:340nm副波長:700nm測定讀數(shù)空白調(diào)零溫度:37℃時間:5分鐘5分鐘RR1:350μl樣品:5μl（C3）10μl（C4）4.計算使用多點非線性/半對數(shù)校準(zhǔn)模式，以樣條函數(shù)為計算模式，根據(jù)校準(zhǔn)品的值與吸光度變化值作劑量/響應(yīng)曲線，樣品中C3&C4的含量可根據(jù)其吸光度變化值在劑量/響應(yīng)曲線上計算出。七、參考值范疇C3：0.79～1.80g/LC4：0.10～0.40g/L八、注意事項（一）本試劑盡管含有較好的抗交叉污染能力，但仍應(yīng)根據(jù)儀器性能及實驗室條件做好避免交叉污染的工作。（二）試劑與樣品用量可根據(jù)不同儀器的需要，在試劑樣品體積比例不變的條件下，適宜增加或減少試劑與樣品的用量。（三）采用必要的防止方法使用試劑，試劑使用后應(yīng)立刻蓋緊瓶蓋，避免污染。（四）精確的成果取決于精確校正的儀器、溫度及時間的控制。（五）藥品、抗凝劑、促凝劑、分離膠等其它物質(zhì)都可能對測定值造成無法預(yù)知