牛結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范

六、牛結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范牛結(jié)核?。˙ovineTuberculosis）是由牛型結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumbovis）引發(fā)的一種人獸共患的慢性傳染病，我國將其列為二類動物疫病。為了防止、控制和凈化牛結(jié)核病，根據(jù)《中華人民共和國動物防疫法》及有關(guān)的法律法規(guī)，特制訂本規(guī)范。1合用范疇本規(guī)范規(guī)定了牛結(jié)核病的診療、疫情報告、疫情解決、防治方法、控制和凈化原則。本規(guī)范合用于中華人民共和國境內(nèi)從事喂養(yǎng)、生產(chǎn)、經(jīng)營牛及其產(chǎn)品，以及從事有關(guān)動物防疫活動的單位和個人。2診療2.1流行特點本病奶牛最易感，另首先為水牛、黃牛、牦牛。人也可被感染。結(jié)核病病牛是本病的重要傳染源。牛型結(jié)核分枝桿菌隨鼻汁、痰液、糞便和乳汁等排出體外，健康?？赏ㄟ^被污染的空氣、飼料、飲水等經(jīng)呼吸道、消化道等途徑感染。2.2臨床特性：潛伏期普通為3～6周，有的可長達(dá)數(shù)月或數(shù)年。臨床普通呈慢性通過，以肺結(jié)核、乳房結(jié)核和腸結(jié)核最為常見。肺結(jié)核：以長久頑固性干咳為特性，且以清晨最為明顯?；夹笕菀灼冢鸩较?，病情嚴(yán)重者可見呼吸困難。乳房結(jié)核：普通先是乳房淋巴結(jié)腫大，繼而后方乳腺區(qū)發(fā)生局限性或彌漫性硬結(jié)，硬結(jié)無熱無痛，表面凹凸不平。泌乳量下降，乳汁變稀，嚴(yán)重時乳腺萎縮，泌乳停止。腸結(jié)核：消瘦,持續(xù)下痢與便秘交替出現(xiàn)，糞便常帶血或膿汁。2.3病理變化：在肺臟、乳房和胃腸粘膜等處形成特異性白色或黃白色結(jié)節(jié)。結(jié)節(jié)大小不一，切面干酪樣壞死或鈣化，有時壞死組織溶解和軟化，排出后形成空洞。胸膜和肺膜可發(fā)生密集的結(jié)核結(jié)節(jié)，形如珍珠狀。2.4實驗室診療2.4.1病原學(xué)診療采集病牛的病灶、痰、尿、糞便、乳及其它分泌物樣品，作抹片或集菌解決（見附件）后抹片，用抗酸染色法染色鏡檢，并進(jìn)行病原分離培養(yǎng)和動物接種等實驗。2.4.2免疫學(xué)實驗牛型結(jié)核分枝桿菌PPD（提純蛋白衍生物）皮內(nèi)變態(tài)反映實驗（即牛提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反映實驗）（見GB/T18646）。2.5成果鑒定本病根據(jù)流行病學(xué)特點、臨床特性、病理變化可做出初步診療。確診需進(jìn)一步做病原學(xué)診療或免疫學(xué)診療。2.5.1分離出結(jié)核分枝桿菌（涉及牛結(jié)核分枝桿菌、結(jié)核分枝桿菌）判為結(jié)核病牛。2.5.2牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反映實驗陽性的牛，判為結(jié)核病牛。3疫情報告3.1任何單位和個人發(fā)現(xiàn)疑似病牛，應(yīng)當(dāng)及時向本地動物防疫監(jiān)督機構(gòu)報告。3.2動物防疫監(jiān)督機構(gòu)接到疫情報告并確認(rèn)后，按《動物疫情報告管理方法》及有關(guān)規(guī)定及時上報。4疫情解決4.1發(fā)現(xiàn)疑似疫情，畜主應(yīng)限制動物移動；對疑似患病動物應(yīng)立刻隔離。4.2動物防疫監(jiān)督機構(gòu)要及時派員到現(xiàn)場進(jìn)行調(diào)查核算，開展實驗室診療。確診后，本地人民政府組織有關(guān)部門按下列規(guī)定解決：4.2.1撲殺對患病動物全部撲殺。4.2.2隔離對受威脅的畜群（病畜的同群畜）實施隔離，可采用圈養(yǎng)和固定草場放牧兩種方式隔離。隔離喂養(yǎng)用草場，不要靠近交通要道，居民點或人畜密集的地區(qū)。場地周邊最佳有自然屏障或人工柵欄。對隔離畜群的結(jié)核病凈化，按本規(guī)范5.5規(guī)定進(jìn)行。4.2.3無害化解決病死和撲殺的病畜，要按照GB16548-1996《畜禽病害肉尸及其產(chǎn)品無害化解決規(guī)程》進(jìn)行無害化解決。4.2.4流行病學(xué)調(diào)查及檢測開展流行病學(xué)調(diào)查和疫源追蹤；對同群動物進(jìn)行檢測。4.2.5消毒對病畜和陽性畜污染的場合、用品、物品進(jìn)行嚴(yán)格消毒。喂養(yǎng)場的金屬設(shè)施、設(shè)備可采用火焰、熏蒸等方式消毒；養(yǎng)畜場的圈舍、場地、車輛等，可選用2%燒堿等有效消毒藥消毒；喂養(yǎng)場的飼料、墊料可采用深埋發(fā)酵解決或焚燒解決；糞便采用堆積密封發(fā)酵方式，以及其它對應(yīng)的有效消毒方式。4.2.6發(fā)生重大牛結(jié)核病疫情時，本地縣級以上人民政府應(yīng)按照《重大動物疫情應(yīng)急條例》有關(guān)規(guī)定，采用對應(yīng)的疫情撲滅方法。5防止與控制采用以“監(jiān)測、檢疫、撲殺和消毒”相結(jié)合的綜合性防治方法。5.1監(jiān)測監(jiān)測對象：牛監(jiān)測比例為：種牛、奶牛100%，規(guī)模場肉牛10%，其它牛5%，疑似病牛100%。如在牛結(jié)核病凈化群中（涉及犢牛群）檢出陽性牛時，應(yīng)及時撲殺陽性牛，其它牛按假定健康群解決。成年牛凈化群每年春秋兩季用牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反映實驗各進(jìn)行一次監(jiān)測。初生犢牛，應(yīng)于20日齡時進(jìn)行第一次監(jiān)測。并按規(guī)定使用和填寫監(jiān)測成果報告，及時上報。5.2檢疫異地調(diào)運的動物，必須來自于非疫區(qū)，憑本地動物防疫監(jiān)督機構(gòu)出具的檢疫合格證明調(diào)運。動物防疫監(jiān)督機構(gòu)應(yīng)對調(diào)運的種用、乳用、役用動物進(jìn)行實驗室檢測。檢測合格后，方可出具檢疫合格證明。調(diào)入后應(yīng)隔離喂養(yǎng)30天，經(jīng)本地動物防疫監(jiān)督機構(gòu)檢疫合格后，方可解除隔離。5.3人員防護(hù)喂養(yǎng)人員每年要定時進(jìn)行健康檢查。發(fā)現(xiàn)患有結(jié)核病的應(yīng)調(diào)離崗位，及時治療。5.4防疫監(jiān)督結(jié)核病監(jiān)測合格應(yīng)為奶牛場、種畜場《動物防疫合格證》發(fā)放或?qū)忩灥谋貍錀l件。動物防疫監(jiān)督機構(gòu)要對轄區(qū)內(nèi)奶牛場、種畜場的檢疫凈化狀況監(jiān)督檢查。鮮奶收購點（站）必須憑奶牛健康證明收購鮮奶。5.5凈化方法被確診為結(jié)核病牛的牛群（場）為牛結(jié)核病污染群（場），應(yīng)全部實施牛結(jié)核病凈化。5.5.1牛結(jié)核病凈化群（場）的建立5.5.1.1污染牛群的解決：應(yīng)用牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反映實驗對該牛群進(jìn)行重復(fù)監(jiān)測，每次間隔3個月，發(fā)現(xiàn)陽性牛及時撲殺，并按照本規(guī)范4規(guī)定解決。5.5.1.2犢牛應(yīng)于20日齡時進(jìn)行第一次監(jiān)測，100～120日齡時，進(jìn)行第二次監(jiān)測。凡持續(xù)兩次以上監(jiān)測成果均為陰性者，可認(rèn)為是牛結(jié)核病凈化群。5.5.1.3凡牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反映實驗疑似反映者，于42天后進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢成果為陽性，則按陽性牛解決;若仍呈疑似反映則間隔42天再復(fù)檢一次，成果仍為可疑反映者，視同陽性牛解決。5.5.2隔離疑似結(jié)核病?；蚺Ｐ徒Y(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反映實驗可疑畜須隔離復(fù)檢。5.5.3消毒5.5.3.1臨時消毒：奶牛群中檢出并剔出結(jié)核病牛后，牛舍、用品及運動場合等按照4.2.5規(guī)定進(jìn)行緊急解決。5.5.3.2經(jīng)常性消毒：喂養(yǎng)場及牛舍出入口處，應(yīng)設(shè)立消毒池，內(nèi)置有效消毒劑，如3～5%來蘇爾溶液或20％石灰乳等。消毒藥要定時更換，以確保一定的藥效。牛舍內(nèi)的一切用品應(yīng)定時消毒;產(chǎn)房每七天進(jìn)行一次大消毒，分娩室在臨產(chǎn)牛生產(chǎn)前及分娩后各進(jìn)行一次消毒。

附件樣品集菌方法痰液或乳汁等樣品，由于含菌量較少，如直接涂片鏡檢往往是陰性成果。另外，在培養(yǎng)或作動物實驗時，常因污染雜菌生長較快，使病原結(jié)核分枝桿菌被克制。下列幾個消化濃縮辦法可使檢查標(biāo)本中蛋白質(zhì)溶解、殺滅污染雜菌，而結(jié)核分枝桿菌因有蠟質(zhì)外膜而不死亡，并得到濃縮。1硫酸消化法用4－6％硫酸溶液將痰、尿、糞或病灶組織等按1:5之比例加入混合，然后置37℃作用1－2小時，經(jīng)3000－4000rpm離心30分鐘，棄上清，取沉淀物涂片鏡檢、培養(yǎng)和接種動物。也可用硫酸消化濃縮后，在沉淀物中加入3％氫氧化鈉中和，然后抹片鏡檢、培養(yǎng)和接種動物。2氫氧化鈉消化法取氫氧化鈉35－40g，鉀明礬2g，溴麝香草酚蘭20mg（預(yù)先用60％酒精配制成0.4％濃度，應(yīng)用時按比例加入），蒸餾水1000mL混合，即為氫氧化鈉消化液。將被檢的痰、尿、糞便或病灶組織按1:5的比例加入氫氧化鈉消化液中，混勻后，37℃作用2－3小時，然后無菌滴加5－10％鹽酸溶液進(jìn)行中和，使標(biāo)本的pH調(diào)到6.8左右（此時顯淡黃綠色），以3000－4000rpm離心15－20分鐘，棄上清，取沉淀物涂片鏡檢、培養(yǎng)和接種動物。在病料中加入等量的4％氫氧化鈉溶液，充足振搖5－10分鐘，然后用3000rpm離心15－20分鐘，棄上清，加1滴酚紅批示劑于沉淀物中，用2N鹽酸中和至淡紅色，然后取沉淀物涂片鏡檢、培養(yǎng)和接種動物。在痰液或小膿塊中加入等量的1％氫氧化鈉溶液，充足振搖15分鐘，然后用3000rpm離心30分鐘，取沉淀物涂片鏡檢、培養(yǎng)和接種動物。對痰液的消化濃縮也可采用下列較溫和的解決辦法：取1N（或4％）氫氧化鈉水溶液50mL，0.1mol/L檸檬酸鈉50mL，N－乙酰－L－半胱氨酸0.5g，混合。取痰一份，加上述溶液2份，作用24－48小時，以3000rpm離心15分鐘，取沉淀物涂片鏡檢、培養(yǎng)和接種動物。3安替福民（Antiformin）沉淀濃縮法溶液A：碳酸鈉12g、漂白粉8g、蒸餾水80mL。溶液B