玉龍美腮丹對家蠶壽命的影響

玉龍美腮丹對家蠶壽命的影響

七寶美贊丹是著名的抗老將領。原方為明·李時珍《本草綱目》引自明·萬密齋《積善堂方》,功用為:“補腎元,烏須發(fā),延年益壽。治血氣不足,贏峋周痹,腎虛無子,消渴,淋瀝,遺精,崩帶,癰瘡,痔腫”等。為探討本方的衰老生物學干預作用,多年來,我們以動物和人胚肺二倍體細胞等為研究對象,先后從生物壽命、衰老生化與生理,以及神經(jīng)生物學(另文報道)等多方面對本方進行了實驗觀察。本研究主要為該方對生物壽命、衰老生化、抗應激能力以及微量元素等方面的實驗干預作用,現(xiàn)報道如下:1實驗材料1.1專家門診量、布濾液、水從量、過濾①七寶美髯丹,藥物與用藥比例為:何首烏3、茯苓、牛膝、當歸、枸杞子、菟絲子、補骨脂各1,藥材由湖北中醫(yī)學院專家門診部提供。水煎3次,紗布過濾,濃縮為100%濃度。②維生素E(VE),油劑,由湖北中醫(yī)學院附屬醫(yī)院藥劑科提供,加蒸餾水以超聲震蕩儀制為1%濃度混懸液。其中用以細胞培養(yǎng)的藥物處理:七寶美髯丹藥液進一步以乙醇提取法制備,含生藥濃度為10%,與VE混懸液均各以安瓿封裝,流動蒸氣滅菌,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?.2實驗動物和儀器家蠶,黃鶴種,由湖北省農(nóng)科院蠶種場提供。Vistar大白鼠,♂,18月齡、4月齡,體重分別為500g±15g、200g±10g;昆明種小白鼠,♂、♀,體重20±2g,均由武漢同濟醫(yī)科大學動物實驗中心提供。MRC-5人胚肺二倍體細胞,引進于美國,由中國典型物培養(yǎng)中心提供。1.3試劑和儀器桑葉,由湖北省農(nóng)科院蠶種場提供,每日采摘新鮮桑葉。1640細胞培養(yǎng)液,1640粉(美國產(chǎn)),無菌三蒸水配制,加小牛血清(湖北老年病研究提供)為細胞培養(yǎng)液濃度的10%,青、鏈霉素各10萬u/1000ml。SOD(超氧化物歧化酶)標準品,由湖北省老年病研究所提供。MDA(丙二醛),瑞典產(chǎn)。TC、TG、LDL-c、HDL-c試劑盒,由上海長征醫(yī)學科學有限公司提供。胰島素放免試劑盒,北京北方免疫試劑研究所提供。SHEL-LAB二氧化碳培養(yǎng)箱,美國產(chǎn)。FT-632生物-化學光度計,北京核儀器廠產(chǎn)。930熒光計,江西醫(yī)療器械廠產(chǎn)。CPS-A超聲粉碎儀,上海超聲波儀器廠產(chǎn)。GDHP-81電熱恒溫培養(yǎng)箱,上海躍進醫(yī)療器械廠產(chǎn)。H600電子顯微鏡,日本產(chǎn)。WFX-1F原子吸收分光光度計,北京第二光學儀器廠產(chǎn)。氣態(tài)化原子裝置,同濟醫(yī)科大學制。自動生化分析儀,美國Bncore公司產(chǎn)。FH-2008γ-免疫計數(shù)器,國營二六二廠產(chǎn)。Y型水迷路水槽,湖北中醫(yī)學院綜合實驗室提供。2方法和結果2.1大鼠細胞生存檢測①預實驗:取第25代細胞,作七寶美髯丹細胞培養(yǎng)用藥適宜濃度實驗,分別設培養(yǎng)液藥物濃度為100、200、400、800、1600ppm共5個組,續(xù)傳10代左右,結果以400ppm藥物濃度的細胞生長繁殖最好。②正式實驗:取第25代細胞,分為3組及用藥濃度:七寶美髯丹組(400ppm)、VE(100ppm)組、空白對照組,每組6瓶細胞。細胞培養(yǎng)方法:常規(guī)1∶2傳代法。二氧化碳培養(yǎng)濃度5%。直至細胞傳代自然衰亡結束,統(tǒng)計學處理細胞生存的傳代次數(shù)。以老齡大白鼠隨機分為3組:七寶美髯丹組、VE組、空白對照組,另取青齡大白鼠為青年空白對照組,共4組,每組10只大鼠。給藥:劑量按大鼠與人體表面積計算等效給藥,老、青空白組給予生理鹽水,灌胃容量為10ml/kg,1次/天,連續(xù)3個月。檢測:①脂褐素:取大腦組織,硫酸奎寧熒光法測定含量。②淋巴細胞轉換率:無菌斷尾取血,以PHA為刺激原,細胞培養(yǎng),T淋巴細胞計數(shù)法統(tǒng)計。其余5個實驗均頸動脈插管取血,③全血SOD:化學發(fā)光法測定。④血清LPO:熒光MDA法測定。⑤微量元素:血清硒(Se)以氣態(tài)發(fā)生法測定,鋅(Zn)、銅(Cu)為火焰法測定,錳(Mn)、鎘(Cd)為石墨爐法測定。⑥血脂:血清總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-c)、高密度脂蛋白(HDL-c)均為酶法測定。⑦血漿胰島素:放免法測定。各取小白鼠30只,隨機分為3組:七寶美髯丹組、VE組、空白對照組,每組10只。給藥:劑量按小鼠與人體表面積計算等效量給藥,空白組給生理鹽水。灌胃容量為20ml/kg。連續(xù)10d。檢測:①記憶力(♂):Y型水迷路法測定。②抗疲勞(♀):鼠尾負重10%游泳法測定。③耐缺氧(♀):250ml玻璃瓶密閉法測定。2.5統(tǒng)計方法3腎組織中抗衰老藥物的應用我國運用中藥抗老延年歷史悠久,自二千多年前《內經(jīng)》提出腎氣盛衰決定著人的“生、長、壯、老、已”理論以來,歷代至今,大多均以腎虛致衰老立論,并且傳統(tǒng)的抗老延年方,其中以補腎為主的方約達總延緩衰老方的80%,七寶美髯丹即是其中著名抗老延年名方之一。生物衰老(Senescence)是一個組織與機能全面退化的進程,由于很多非衰老性原因也可以導致某些組織與生理生化的改變,因此,國際公認在抗衰老藥物作用研究中,必須進行以生物壽命實驗為主,并進行衰老組織形態(tài)、生理、生化等多方面的綜合實驗,才能比較可靠地評價藥物的抗衰老作用。在抗衰老西藥方面,迄今雖提出公認有效的VE(在抗自由基氧化等方面具有突出作用)等藥物,但也認為其作用十分有限。3.1不同種類家蠶壽命的比較能否延長生物的整體壽命,是國際衡量抗衰老藥物作用的首要實驗方法。為此,我們進行了動物家蠶壽命和人胚肺二倍體細胞傳代的2項實驗,結果表明,七寶美髯丹與VE均有非常顯著性延長家蠶壽命和細胞繁殖傳代的存活壽命的作用,但七寶美髯丹在延長整體生物家蠶的平均壽命、最高壽命、次高壽命和半數(shù)死亡壽命方面,能夠非常顯著性優(yōu)于VE;而VE在單純延長細胞傳代方面,則非常顯著性優(yōu)于七寶美髯丹。但結合其他多方面的實驗結果,表明七寶美髯丹比VE具有更為良好的抗生物整體衰老的作用。3.2血sod、ve含量主要包括SOD和LPO實驗,本實驗結果顯示,七寶美髯丹和VE均能顯著性降低血漿LPO含量;但七寶美髯丹還能顯著性升高血SOD水平,而VE對此則沒有顯著性作用。提示VE雖具有清除自由基而抗強氧化的作用,但可能并沒有升高體內抗氧化酶水平的作用,實驗符合并支持了VE為一種強抗氧化劑的認識。而七寶美髯丹除了可通過升高體內抗氧化酶水平,間接以發(fā)揮抗強氧化作用而降低LPO,是否還具有類似VE的直接清除自由基作用,則有待進一步研究。3.3對腦脂褐素的影響動物在初生時,雖然一些細胞內即已有一定的脂褐素,但數(shù)量很少且體積小,但隨著年齡增長直至老年,尤其在大腦、腦干、脊髓、心臟、肝臟等細胞內脂褐素累積量多,體積大,因而又稱之為老年色素,起著擾亂細胞空間、影響細胞功能甚至導致細胞萎縮和死亡等的危害作用。實驗表明七寶美髯丹具有顯著性減少大腦脂褐素含量的作用;VE雖對大腦脂褐素含量有一定減少,但統(tǒng)計無顯著性意義。此與我們在對老年大鼠大腦前額皮質、老年小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元超微結構的組織形態(tài)觀察中(另文報道),對大腦脂褐素形態(tài)影響的結果基本一致。3.4美評論員ve對美評論員糖作用的影響對于PHA刺激的T淋巴細胞轉換率,七寶美髯丹具有非常顯著性升高的作用,VE對其具有顯著性升高作用,表明二藥均有增強細胞免疫功能的作用,而以七寶美髯丹作用更強。3.5應激能力的降低包括記憶力(Memory)、抗疲勞與耐缺氧實驗,老年具有應激能力的明顯降低。實驗表明,七寶美髯丹具有非常顯著的增強抗疲勞能力,顯著性增強記憶力和耐缺氧能力的作用,而VE對此3方面均無顯著性作用。3.6不同壽命美石丹對血清mn、cd、cu和cd比值的影響現(xiàn)有不少研究發(fā)現(xiàn),Se是體內另一種抗氧化酶GSH-Px(谷胱甘肽氧化酶)的必需組成成分;而Zn與Cu均是人體必需微量元素之一;并有調查表明長壽地區(qū)的頭發(fā)中的Mn含量顯著高于非長壽地區(qū)者;Cd則是人體有害元素之一;一些長壽地區(qū)的Zn/Cd比值高于非長壽地區(qū)等。七寶美髯丹有顯著性升高Se、降低Cd和升高Zn/Cd比值的作用,對Mn、Cu和Zn的絕對含量則無顯著性影響;而VE對各微量元素均無顯著性影響,其有關作用機理尚不清楚,或許與中藥本身含有多種微量元素,及其成分和作用機理復雜等原因有關。3.7對血脂作用的影響老年大多有TG、TC、LDL-c升高,而HDL-c降低的高脂血癥(Hyperlipemia),是導致許多心腦血管疾病的重要原因之一,并在一定程度上與衰老相關。實驗表明,七寶美髯丹對TC、TG無改善作用,但具有顯著性降低LDL-c、升高HDL-c以及升高HDL-c/LDL-c比值的作用,說明該方具有較好抗血脂作用。VE也有一定升高HDL-c的作用,但對其它3項均無顯著改善作用。老年糖尿病也是老年高發(fā)性疾病之一,實驗表明七寶美髯丹與VE,均能使老年動物過高的胰島素(Insulin)水平下降,并接近青年對照組水平,但其機理尚不清楚。3.8抗生物體老作用數(shù)年來,我們對傳統(tǒng)中醫(yī)藥延緩衰老進行了大量理論與實驗研究,通過本實驗,我們可進一步認為,衰老生物具有廣泛的生化與生理退行性改變,而七寶美髯丹對衰老生物具有廣泛改善生化及生理功能方面的作用,并可能是其具有較好的抗生物整體衰老作用的生物藥理學基礎。相對VE也具有一定的抗衰老作用,但或許由于其主要為抗氧化劑,突出體現(xiàn)為抗氧化作用強,但對衰老生物的廣泛生化與生理退行改變以及對生物整體衰老的改善作用有限,而不及七寶美髯丹。從而也表明,傳統(tǒng)以補腎抗老延年,仍不失為行之有效的重要方法之一。但七寶美髯丹雖為有效延緩衰老方之一,由于其藥物組成較多,有效成分以及作用機理