博士答辯幻燈(機(jī)制研究)-大學(xué)課件-在線文檔投稿賺錢網(wǎng)

*****機(jī)制研究研究生：**導(dǎo)

師：***

教授導(dǎo)師組：***

教授等研究背景N缺血性腦血管疾病是引起人類死亡和長(zhǎng)期癱瘓的主要原因之一，目前其發(fā)病率逐年上升，給社會(huì)經(jīng)濟(jì)帶來(lái)了極大的負(fù)擔(dān)。N近年來(lái)，美國(guó)將銀杏葉用作保健食品，歐洲一些國(guó)家將其作為植物藥，廣泛用于防治心腦血管疾病、記憶力下降及癡呆。N我國(guó)的銀杏資源居世界首位，應(yīng)加大力度開(kāi)發(fā)，造福人民。實(shí)驗(yàn)總體設(shè)計(jì)離體NOS、[Ca2+]iPGI2、TXA2iv.兔EGB整體EGB銀杏葉提取物對(duì)兔腦血流量的影響第一部分實(shí)驗(yàn)方法健康新西蘭兔，雌性4只，雄性4只體重2.6±0.2kg靜脈注射3%戊巴比妥鈉溶液（30

mg/kg）麻 醉氣管插管術(shù)、單側(cè)股動(dòng)脈和股靜脈插管分離一側(cè)頸內(nèi)、外動(dòng)脈，結(jié)扎頸外動(dòng)脈，在頸 內(nèi)動(dòng)脈上套電磁流量機(jī)探頭待呼吸、血壓穩(wěn)定后，給0.1ml/kg生理鹽水， 測(cè)量兔腦血流量、收縮壓、舒張壓，作為對(duì)照靜脈注射EGB

2.5、5.0、10.0

mg/kg，在給藥 后1，3，5，10，15，20，30min記錄上述指標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果*p<0.05，**p<0.01

vs

administration

before實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)論靜注EGB注射液能明顯增加兔腦血流量， 其劑量為10.0mg/kg時(shí)對(duì)兔腦血流量增

加作用大于劑量為2.5、5.0mg/kg時(shí)的作 用。在給藥1～5min內(nèi)收縮壓、舒張壓略微升 高，5～20min收縮壓、舒張壓略微下降， 以后逐漸恢復(fù)正常。變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第二部分以小鼠大腦皮層血管內(nèi)皮細(xì)胞研究EGB舒張血管機(jī)制實(shí)驗(yàn)方法L-Arg+O2

NO+親核性物質(zhì) 有色化合物 530nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。根據(jù)吸光度大小可計(jì)算出NOS活力。培養(yǎng)的細(xì)胞以1×106個(gè)細(xì)胞·L-1密度種植于6孔板中，24h后換液，后每3d半量換液。至d6分別加入EGB

0、25、50、100、200mg·L-1。37℃培養(yǎng)8h，將細(xì)胞消化，制成10％的細(xì)胞懸液，進(jìn)行測(cè)定。NOS測(cè)定方法NOS6-酮-前列腺素F1a和血栓素B2含量測(cè)定方法培養(yǎng)的細(xì)胞以1×106個(gè)細(xì)胞·L-1密度種植于6孔板中，24h后換液，后每3d半量換

液。至d6分別加入EGB

0、25、50、100、200mg·L-1及陽(yáng)性對(duì)照藥阿司匹林1g·L-1。37℃培養(yǎng)8h，取上清，用放射性熒光免疫法進(jìn)行測(cè)定。細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量測(cè)定方法1）培養(yǎng)的bEnd3細(xì)胞以1×109個(gè)細(xì)胞·L-1密度種植于6孔板中，24h后換液，并加入EGB

0、25、50、100、200mg·L-1。2）37℃培養(yǎng)24

h，用0.25％胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞，用HEPES-Hank’s液（不含Mg2+）重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為

2×109

個(gè)細(xì)胞·L-1，制成細(xì)胞懸液。用臺(tái)酚藍(lán)染色檢查細(xì)胞的存活率，要求存活率不低于95％者進(jìn)入下一步實(shí)驗(yàn)。將制備好的細(xì)胞懸液37℃預(yù)溫5min，加入Fura2-AM，使其終濃度為5umol·L-1,混勻，放入CO2培養(yǎng)箱中，37℃避光孵育45min，之后以1000r·min-1離心5min,棄上清。沉淀細(xì)胞用含0.2％牛血清白蛋白的HEPES-Hank’s液（不含Mg2+）洗2次，最后用HEPES-Hank’s液（不含Mg2+）調(diào)整細(xì)胞懸液為2×109個(gè)細(xì)胞·L-1。避光放置，用熒光分光光度計(jì)30min內(nèi)測(cè)完。實(shí)驗(yàn)結(jié)果*P<0.01

vs

control

group;**P<0.05,

***P<0.01

vs

previous

groups實(shí)驗(yàn)結(jié)果*P<0.01

vs

control

groups;**P<0.05,

***P<0.01

vs

previous

groups實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果**P<0.01,

*P<0.05

vs

control

groups討論與血管舒張反應(yīng)最為密切的物質(zhì)是NO。EGB能顯著上調(diào)NOS的活性，說(shuō)明其舒張血管作用部分與上調(diào)NOS的活性有關(guān)。討論本實(shí)驗(yàn)研究所用細(xì)胞為小鼠大腦皮層血 管內(nèi)皮細(xì)胞，其一氧化氮合酶為內(nèi)皮型（eNOS），eNOS的激活需要Ca2+及CaM的參與。EGB能顯著升高[Ca2+]i，提示其上調(diào)

NOS活性可能與其升高[Ca2+]i相關(guān)。討論EGB對(duì)6-Keto-PGF1a和TXB2的水平均有 一定影響（分別導(dǎo)致它們輕微升高和下 降）。這些結(jié)果提示EGB擴(kuò)血管作用機(jī)制還包 括其對(duì)PGI2和TXA2的作用，即增加PGI2 水平和降低TXA2水平。結(jié)論EGB可上調(diào)eNOS活