DB1509T 0002-2023奶綿羊超數(shù)排卵-胚胎移植技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.30CCSB431509IDB1509/T0002—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由烏蘭察布市農(nóng)牧局提出并歸口。本文件起草單位：內(nèi)蒙古大學、烏蘭察布市畜牧工作站、蒙天然牧業(yè)科技發(fā)展有限公司、烏蘭察布市市場監(jiān)督管理局、內(nèi)蒙古豐東知盈牧業(yè)科技有限公司、察右中旗市場監(jiān)督管理局。本文件主要起草人：王申元、張立、張立果、鄭重、蘇小虎、孟根、寇慧娟、李光鵬、朱怡靜、薩仁格勒、楊磊、于濤、竇紅艷、魏潤元、蘇廣華、劉建寧、劉信、劉權(quán)、楊柳、郝佳惠、王秀蓮、孫慶俊、鄭少華、張莉、王春偉、徐全忠。1DB1509/T0002—2023奶綿羊超數(shù)排卵-胚胎移植技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了奶綿羊超數(shù)排卵及胚胎移植技術(shù)的術(shù)語和定義、方法及技術(shù)處理流程。本文件適用于規(guī)?；叹d羊胚胎生產(chǎn)及胚胎移植。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T1571羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程NY5027無公害食品畜禽飲用水水質(zhì)DB15/T2042肉羊同期發(fā)情與人工授精技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1奶綿羊dairysheep以產(chǎn)奶為主的綿羊。3.2供體羊donor提供胚胎的母羊3.3受體羊recipient接受胚胎的母羊。3.4同期發(fā)情estroussynchronization2DB1509/T0002—2023用激素制劑或其它方法控制并調(diào)整群體母畜發(fā)情周期,使其在預定的時間內(nèi)集中發(fā)情的技術(shù)，也稱同步發(fā)情。3.5發(fā)情周期estrouscycle在生理周期或非妊娠條件下，母羊每間隔一定的時期均會出現(xiàn)一次發(fā)情，通常將這次發(fā)情開始至下次發(fā)情開始、或這次發(fā)情結(jié)束至下次發(fā)情結(jié)束所間隔的時間，稱為發(fā)情周期。奶綿羊發(fā)情周期15d~18d，平均為16.5d。3.6超數(shù)排卵multipleovulation以外源性促性腺激素誘發(fā)動物卵巢的卵泡發(fā)育，并排出超出自然幾倍到幾十倍具有受精能力的卵子的過程。3.7胚胎移植embryotransfer將良種母畜體內(nèi)早期胚胎或體外受精及其他方式獲得的早期胚胎，移植到同種生理狀態(tài)相同的受體母畜體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育成個體的技術(shù)。4供體羊的選擇與飼養(yǎng)管理4.1供體羊的選擇供體羊應(yīng)符合以下條件：a）產(chǎn)奶性能穩(wěn)定，繁殖性能好，遺傳性能穩(wěn)定，譜系清楚；b）體質(zhì)健壯，結(jié)構(gòu)勻稱，生殖器官正常，無遺傳和傳染性疾??；c）無流產(chǎn)史，無陰道炎、子宮內(nèi)膜炎、卵巢囊腫等疾?。籨）年齡宜在8月齡到5周歲之間；e）繁殖母羊產(chǎn)羔后有兩次以上正常發(fā)情記錄。4.2供體羊的飼養(yǎng)管理按照如下步驟進行：a）飼養(yǎng)環(huán)境良好，避免應(yīng)激反應(yīng)；b）制定合理的日糧配方；c）滿足供體清潔飲水的需要（水質(zhì)應(yīng)符合NY5027的要求d）超排前8周開始補充青綠飼料、維生素A和微量元素等；3DB1509/T0002—2023e）超排前1個月進行相關(guān)傳染病的檢疫，疫苗注射和體內(nèi)外驅(qū)蟲；f）適當運動，每天自由運動1h以上。5種公羊的選擇與飼養(yǎng)管理5.1種公羊的選擇符合以下條件：a）遺傳性能穩(wěn)定、系譜完整清楚；b）符合該品種種公羊的體型外貌，具有明顯的品種特征，應(yīng)為特級或一級；c）體質(zhì)健壯、生殖器官正常、無遺傳和傳染性疾病；d）年齡在12月齡到6周歲之間；e）提前調(diào)教好。5.2種公羊飼養(yǎng)管理按照如下方法：a）增加優(yōu)質(zhì)蛋白飼料，每只日給專用精料0.75kg～1.5kg，胡蘿卜0.5kg，足量優(yōu)質(zhì)青干草及苜蓿；b）加強運動，每天早晚驅(qū)趕運動不應(yīng)少于2h，按慢→快→慢的方式運動；c）在配種前兩周排精，第一周排兩次，第二周排一次。6供體羊的同期、超數(shù)排卵及人工授精6.1藥品PG（氯前列烯醇）、CIDR(EAZI-BREED?,含孕激素的陰道裝置，一般含0.3g)、PMSG（孕馬血清）、FSH（促濾泡素）、LH（促黃體生成素）、GnRH（促性腺激素釋放激素）。6.2供體同期6.2.1自然同期以自然發(fā)情當日為0d。6.2.2PG同期任意一天注射PG，以注射PG后發(fā)情日為0d。6.2.3CIDR同期任意一天放入CIDR，記為0d。4DB1509/T0002—20236.3超數(shù)排卵6.3.1激素劑量6.3.1.1FSH劑量按照產(chǎn)品說明，使用劑量。6.3.1.2LH/GnRH劑量按照產(chǎn)品說明，使用劑量。6.3.1.3PG劑量肌注0.12mg/次～0.15mg/次。6.3.1.4PMSG劑量肌注200IU/次～300IU/次。6.3.2超數(shù)排卵方法6.3.2.1自然發(fā)情或PG同期法奶綿羊以母羊發(fā)情之日做為發(fā)情周期的0d，在母羊發(fā)情周期的第12d～13d開始，每天早晚各注射1次FSH，中間間隔時間12h，連續(xù)3d，遞減注射，在注射第六針FSH時同時注射PG0.15mg6.3.2.2孕激素CIDR法奶綿羊在放入CIDR之日計為0d，在放入CIDR的第10d開始超排（見附錄A在注射第1針FSH時，注射PMSG200IU～300IU；在注射第五針FSH時，注射PG1.5mg；在注射第六針FSH時，取出6.3.3供體羊發(fā)情鑒定應(yīng)符合NY/T1571的要求。6.4配種6.4.1采精6.4.1.1常規(guī)采精5DB1509/T0002—2023應(yīng)符合DB15/T2042的要求。6.4.1.2電采精對品質(zhì)優(yōu)良種公羊但無法正常采精的采用電采精技術(shù)。6.4.1.3精液檢測應(yīng)符合DB15/T2042的要求。6.4.2輸精6.4.2.1常規(guī)人工輸精應(yīng)符合NY/T1571的要求。6.4.2.2腹腔內(nèi)窺鏡輸精輸精前24h禁食空腹；內(nèi)窺鏡輸精器械等提前用0.1%新潔爾滅液浸泡消毒。將待輸精羊麻醉保定。移植部位剪毛、剃毛、常規(guī)消毒，移植時呈仰臥斜倒立保定，角度為40°~60°。腹腔鏡的套管穿刺針在母羊腹部乳房下腹中線兩側(cè)5cm～8cm處的位置分別插入套管針，然后通過套管分別放入腹腔鏡冷光源和輸精槍，在卵巢有濾泡側(cè)子宮角進行輸精。輸精時間及劑量如下：a）輸精時間：選擇在出現(xiàn)發(fā)情征兆后的12h～18h，一次適時輸精；b）輸精劑量：每只羊輸1支0.25mL細管凍精（或鮮精）。7奶綿羊手術(shù)沖胚及胚胎質(zhì)量鑒定7.1沖胚應(yīng)符合NY/T1571的要求。7.2檢胚應(yīng)符合NY/T1571的要求。7.3胚胎等級鑒定應(yīng)符合NY/T1571的要求。不同發(fā)育時期及不同等級胚胎形態(tài)見附錄B。7.4胚胎記錄按附錄C做好采胚記錄。在細管塞上，標記好胚胎信息，包括胚胎的供體號、發(fā)育期、數(shù)量、質(zhì)量6DB1509/T0002—2023以及生產(chǎn)日期。8胚胎移植8.1受體羊的選擇及飼養(yǎng)管理8.1.1受體羊的選擇應(yīng)符合NY/T1571的要求。8.1.2受體羊的飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)管理按照如下步驟進行：a）單獨組群、編號、飼養(yǎng)，保持環(huán)境相對穩(wěn)定，避免應(yīng)激反應(yīng)；b）移植前5周，注射VA、VD、VE針劑，在移植前8周開始補飼，補充微量元素，如硒、鋅等；c)移植前8周開始補飼，使其保持中等體況，以滿足妊娠需要，防止流產(chǎn)；d）移植前1個月受體羊進行檢疫、防疫和驅(qū)蟲；8.1.3受體同期發(fā)情及鑒定應(yīng)符合NY/T1571的要求。8.1.4胚胎發(fā)育期與受體移植時間的對應(yīng)關(guān)系胚胎發(fā)育期與受體移植時間的對應(yīng)關(guān)系見附錄D。8.1.5手術(shù)法移植應(yīng)符合NY/T1571的要求。8.1.6腹腔內(nèi)窺鏡移植在卵巢有黃體側(cè)子宮角進行移植，移植方法同5.4.2.2。DB1509/T0002—2023（資料性）奶綿羊FSH3天注射法超數(shù)排卵奶綿羊FSH3天注射法超數(shù)排卵見表A.1。表A.1奶綿羊FSH3天注射法超數(shù)排卵早晚8DB1509/T0002—2023（資料性）不同發(fā)育階段的桑椹胚與囊胚形態(tài)B.1不同發(fā)育階段的桑椹胚與囊胚見圖B.1。自左至右依次為桑椹胚(a)、致密桑椹胚(b)、早期囊胚(c)、囊胚(d)和擴展囊胚(e)。圖B.1不同發(fā)育階段的桑椹胚與囊胚B.2A級胚胎見圖B.2。A.A級晚期桑葚胚（CM1B.A級早期囊胚（EB1C.A級囊胚（B1）。圖B.2A級胚胎B.3B級胚胎見圖B.3。A.B級早期桑葚胚（M2B.B級晚期桑葚胚（CM2）。圖B.3B級胚胎B.4C級、D級胚胎見圖B.4。A.C級早期