替米考星對(duì)雞慢性呼吸道病的防治試驗(yàn)

替米考星對(duì)雞慢性呼吸道病的防治試驗(yàn)

近年來，由雞毒霉感染的呼吸道感染不斷增加。臨床常用的藥物已經(jīng)使用多年，但它們逐漸表現(xiàn)出服用藥物的副作用。因此,開發(fā)新型高效的動(dòng)物專用抗霉形體感染藥物勢(shì)在必行。替米考星(Tilmicosin)是一種半合成的大環(huán)內(nèi)酯類畜禽專用抗生素,為泰樂菌素(Tylosin)的衍生物,具有同泰樂菌素相似的抗菌譜,對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和部分革蘭氏陰性菌、霉形體、螺旋體等均有抑制作用,尤其對(duì)胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌及畜禽霉形體具有比泰樂菌素更強(qiáng)的抗菌活性,與臨床常用的其他抗生素之間無(wú)交叉耐藥性。另外,藥代動(dòng)力學(xué)研究表明,無(wú)論內(nèi)服還是皮下注射,該藥在畜禽體內(nèi)吸收快,血中藥物半衰期長(zhǎng),藥物組織穿透力強(qiáng),體內(nèi)分布容積大,尤其在肺組織、乳中的藥物濃度高。由于其特殊的抗菌活性和藥代動(dòng)力學(xué)特征,進(jìn)口替米考星已被批準(zhǔn)用于山羊、綿羊、乳牛、豬、雞等動(dòng)物感染性疾病的治療,特別是用于泌乳動(dòng)物乳腺炎疾病和一些呼吸道疾病如家畜放線桿菌胸膜肺炎、巴氏桿菌病和雞慢性呼吸道病等的治療。該藥于20世紀(jì)80年代由英國(guó)Elanco動(dòng)物保健品公司開發(fā)成功,1990年上市,現(xiàn)國(guó)內(nèi)廠家也有生產(chǎn)。為了解替米考星的體外抗菌活性和其磷酸鹽預(yù)混劑對(duì)人工感染的雞慢性呼吸道病的療效,特進(jìn)行以下試驗(yàn)。1材料和方法1.1酸泰樂菌素替米考星:含量970g/kg,湖北武穴市龍翔藥業(yè)有限公司中試生產(chǎn),批號(hào)2002060015。磷酸泰樂菌素:效價(jià)909U/mg,批號(hào)0206082,由山東魯抗獸藥研發(fā)中心提供。磷酸替米考星預(yù)混劑:每1000g預(yù)混劑中含替米考星200g,由湖北武穴市龍翔藥業(yè)有限公司中試生產(chǎn)。1.2年—菌種大腸埃希氏菌CMCC44103:浙江升華拜克有限公司惠贈(zèng)。大腸埃希氏菌O8:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)藥理教研組惠贈(zèng)。大腸埃希氏菌O2、雞毒霉形體MGS6:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所惠贈(zèng)。豬、鴨大腸埃希氏菌地方分離株和禽巴氏桿菌:本校微生物教研組提供。金黃色葡萄球菌CMCC26112:東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物教研組惠贈(zèng)。1.3日本組成KM2培養(yǎng)基:用于MGS6的培養(yǎng),江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所提供。普通肉湯培養(yǎng)基、血平板、M-H肉湯、M-H瓊脂:均按常規(guī)方法制備。1.4試驗(yàn)動(dòng)物AA肉雞購(gòu)自南京邁皋橋雞場(chǎng),試驗(yàn)前經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)雞毒霉形體血清學(xué)陰性反應(yīng)。1.5外抗菌活性測(cè)定1.5.1mic的測(cè)定將培養(yǎng)好的各菌液稀釋為1×105~1×106/mL,按常規(guī)2倍稀釋法測(cè)定MIC。藥物臨用前配制成一定濃度。替米考星水溶性差,可用恒溫震蕩器30℃震蕩15min,以助于溶解。每菌重復(fù)3次。1.5.2磷酸泰樂菌素檢測(cè)細(xì)胞試驗(yàn)前將藥物配成一定濃度,過濾除菌后備用。取24h能在KM2培養(yǎng)基中達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的霉形體培養(yǎng)物作為本試驗(yàn)用菌液(CFU為1×105/mL)。取15支無(wú)菌試管,第1管中加入KM2培養(yǎng)基0.9mL,其余各管加0.5mL。將0.1mL藥物加入第1管,按2倍稀釋法稀釋至最后一管。然后在各管中加入等量的0.5mL菌液,37℃培養(yǎng)。重復(fù)3次,每次同時(shí)設(shè)培養(yǎng)物、培養(yǎng)基和磷酸泰樂菌素對(duì)照。當(dāng)培養(yǎng)物對(duì)照管培養(yǎng)基由紅色變?yōu)殚冱S色時(shí)(pH由7.5變到6.8以下)判定一次結(jié)果;3~5d后,待所有試管的培養(yǎng)基顏色不再發(fā)生變化時(shí),再判定一次結(jié)果。1.6磷酸預(yù)混合對(duì)雞慢性呼吸道疾病的治療效果是人工的1.6.1動(dòng)物的集體處理從沒有受雞毒霉形體感染的15日齡雞群中隨機(jī)抽取180只健康雛雞,試驗(yàn)雛雞隨機(jī)分為6組,分組情況及處理方式詳見表1。1.6.2感染和治療1.6.2.雞分組及感染情況所選用AA肉雞經(jīng)2周適應(yīng)后,于第15d進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)前每只雞進(jìn)行雞毒霉形體血清學(xué)檢測(cè),陰性者作為試驗(yàn)雞,并對(duì)雞進(jìn)行稱重。試驗(yàn)雞的分組情況見表1。制備MGS6菌液,經(jīng)測(cè)定菌液CFU為3.5×109/mL。除健康對(duì)照組外,各感染組(見表1)雞左右胸氣囊各注射MGS6培養(yǎng)物0.4mL,滴鼻0.5mL。疾病模型指征如下:①臨床癥狀;②氣囊、氣管、肺的病理變化情況;③平均增重;④死亡率;⑤病原分離、鑒定。1.6.2.觀察指標(biāo)及方法接種后24h按表1方式給藥,連續(xù)給藥7d,每日換料1次。觀察期為初次給藥后20d,每日觀察雞的各種臨床表現(xiàn)并記錄雞發(fā)病死亡情況;對(duì)死雞剖檢,觀察氣囊、氣管及肺的病理變化。試驗(yàn)結(jié)束時(shí),分別對(duì)雞稱重、氣囊病變記分和血清抗體檢測(cè)。1.6.3療效評(píng)估指標(biāo)1.6.3.1死亡率凡在試驗(yàn)期間試驗(yàn)雞出現(xiàn)雞慢性呼吸道病癥狀并死亡,剖檢時(shí)氣囊和肺有典型的病變特征,則判斷為感染死亡,計(jì)算死亡率。1.6.3.2相對(duì)沉降率根據(jù)試驗(yàn)開始及結(jié)束時(shí)每只雞的體重,計(jì)算每組雞的平均增重,并計(jì)算相對(duì)增重率。1.6.3.根據(jù)每側(cè)氮?dú)獠∽冊(cè)u(píng)分剖檢后凡出現(xiàn)氣囊膜增厚、渾濁,內(nèi)有奶酪樣分泌物者均屬氣囊病變,按病變輕重對(duì)其評(píng)分。每側(cè)氣囊病變分為4級(jí),損傷越重則分值越高。按下列公式計(jì)算氣囊損傷減少率:氣囊損傷減少率=(對(duì)照雞平均氣囊損傷分值-試驗(yàn)雞平均氣囊損傷分值)÷對(duì)照雞平均氣囊損傷分值。1.6.3.4.抗蟲試驗(yàn)的陽(yáng)性率測(cè)定雞血清中雞毒霉形體抗體,計(jì)算抗體反應(yīng)陽(yáng)性率。1.6.4數(shù)據(jù)分析所得試驗(yàn)數(shù)據(jù)中,對(duì)增重指標(biāo)進(jìn)行t檢驗(yàn),其余指標(biāo)均進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。2結(jié)果與分析2.1磷酸泰樂菌素替米考星和磷酸泰樂菌素的體外抗菌活性結(jié)果見表2。磷酸泰樂菌素對(duì)大腸埃希氏菌不十分敏感,對(duì)雞毒霉形體、金黃色葡萄球菌及巴氏桿菌雖有一定作用,但效果較替米考星差。2.2死亡雞剖檢變化雞群接種24h后普遍精神不振,呆臥不動(dòng),48h后少數(shù)雞有羅音,張口呼吸,流鼻液,開始出現(xiàn)死亡;死亡雞剖檢時(shí)可見氣囊膜增厚、渾濁,大部分氣囊內(nèi)有奶酪樣分泌物,部分雞的肺壞死、出血或淤血,氣管壁有不同程度的充血和出血,內(nèi)有黏稠分泌物。健康對(duì)照組雞臨床觀察正常,剖檢無(wú)肉眼可見病變。表明該試驗(yàn)感染模型是成功的,符合試驗(yàn)需要。2.3各組雞毒霉形體感染情況比較雞感染病原后,每日記錄發(fā)病死亡雞數(shù)(至感染后第21d),結(jié)果見表3。由表3可見,各用藥組與感染對(duì)照組比較,均能顯著(P<0.05)降低雛雞由于雞毒霉形體感染引起的死亡。磷酸替米考星各劑量組與磷酸泰樂菌素對(duì)照組比較,能使存活率提高10%~30%,表明其療效較磷酸泰樂菌素強(qiáng)。2.4雞的平均增重測(cè)定試驗(yàn)結(jié)束后,即感染后第21d,對(duì)試驗(yàn)雞進(jìn)行稱重,結(jié)果見表4。由表4可見,各治療組雞的平均增重均低于陰性對(duì)照組;各用藥組與感染對(duì)照組比較,均能明顯地提高雞的相對(duì)增重率;而磷酸替米考星各劑量組與磷酸泰樂菌素組相比較,僅高劑量組與之差異較大,大約使相對(duì)增重率提高27%,中、低劑量組與之差異不大,只有13%~17%。2.5比較磷酸替米考星與磷酸泰樂菌素的降低煙氣損傷效果感染后第21d,每組抽檢5只雞,進(jìn)行剖檢,檢查、記錄氣囊病變,比較各組雞氣囊損傷減少率,結(jié)果見表5。由表5可見,各用藥組氣囊損傷減少率顯著高于感染對(duì)照組(P<0.05),并且磷酸替米考星高、中劑量組也均顯著高于磷酸泰樂菌素組(P<0.05);但低劑量組與之比較,無(wú)顯著(P<0.05)差異。這說明使用一定劑量的磷酸替米考星在降低氣囊損傷方面作用較好,效果優(yōu)于磷酸泰樂菌素;若劑量降低到一定的程度,則與磷酸泰樂菌素的療效相當(dāng)。2.6結(jié)果表1試驗(yàn)結(jié)束后,即感染后第21d,每組抽檢5只雞,進(jìn)行抗體檢測(cè),結(jié)果見表6。由表6可見,與陽(yáng)性對(duì)照組比較,各用藥組在降低雞體內(nèi)的雞毒霉形體抗體方面均有較好的效果,尤以磷酸替米考星高、中劑量組在降低抗體檢出率方面效果較顯著,但低劑量組與磷酸泰樂菌素對(duì)照組效果相當(dāng)。3替米考星預(yù)混劑體外試驗(yàn)結(jié)果表明,替米考星對(duì)雞毒霉形體MGS6株、巴氏桿菌及金黃色葡萄球菌均有強(qiáng)大的抑菌作用,較磷酸泰樂菌素的作用強(qiáng)。同時(shí),本研究提示,在治療由MGS6株引起的雞慢性呼吸道病時(shí),可考慮選用替米考星。若盲目選用其他藥物,不僅會(huì)延誤治療時(shí)機(jī),而且容易造成耐藥性在病原菌中的傳播