DB15T 3259-2023羊肝細胞體外培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.30CCSICS65.020.30CCSB44內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標準DB15/T3259—2023羊肝細胞體外培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程Thecodeofpracticeoncellsoflambhepaticinvitroculture2023-12-152023-12-152024-01-15內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院提出。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標準化技術(shù)委員會（SAM/TC19）歸口。本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院。羊肝細胞體外培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了羊肝細胞體外培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程的程序確立、工作區(qū)條件和方法。本文件適用于羊的肝細胞體外培養(yǎng)。（GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法下列術(shù)語和定義適用于本文件。肝細胞體外培養(yǎng)invitrocultureofhepaticcells以羊肝臟組織為材料，經(jīng)體外培養(yǎng)、分離出呈圓球形、分散狀態(tài)細胞的過程。肝細胞體外培養(yǎng)invitrocultureofhepaticcells以羊肝臟組織為材料，經(jīng)體外培養(yǎng)、分離出呈圓球形、分散狀態(tài)細胞的過程。4設(shè)施設(shè)備5方法GB/T668216404-(21-1g20mL0.22μm20箱中備用。50mg1mL0.22μm50g/L1g0.625g200mL0.22μm20mg20mL0.01mmol/L4.36mol/L×10-4mol/L的胰島素母液，用0.22μm濾膜過濾除菌，分裝并保存于-80℃冰箱中備用。Percoll27mLPercoll3mLPBS（10×）9mL15mLPBS（1×）灌流液A8.1816g0.4995g2.3831gHEPES、0.4500g0.1861g800mL1000mL1mmol/Llmmol/LpH7.21:100mL0.22μm37B8.1816g氯化鈉、0.4995g氯化鉀、6.8493gHEPES、0.4500g0.5550g800mL1000mL0.22μm437C：在灌流液B500mLB2mL50g/LIV0.2g/LIV0.22μm37RPIM1640RPIM16401L2.0g0.22m4CRPIM1640200mLRPIM164020mL10-6mol/L0.460mL10-6mol/L162mL，5mg/mLC80.22μm，4RPIM1640RPIM164050.22μm濾膜過濾除菌，分裝封口，4℃保存?zhèn)溆?。DMSORPMI16402:1:70.22μm24h1500IU40g2～3A50mL/min10min～15min。B50mL/minC20mL/min20mL～50mL100150μm20075500目(30μm)細胞篩過濾消化后的肝組織。500r/min5min～10minRPMI16402～3RPMI1640，0.42.6/mL×106個/mL2mL，375%CO24h2dRPMI16402～3500r/min5min～10minPercollr/min10RPMI1640r/min32RPMI1640生長培養(yǎng)液重懸肝細胞制成純化的肝細胞懸液備用。4mL1mL4～51000r/min5min1.5mL1000r/min5min1mL1mL1.5mL42h208037RPMI1640400r/min5min375%CO2800.25，371min8020RPMI1640375%CO2。附錄A（資料性）羊肝細胞體外培養(yǎng)程序流程圖羊肝細胞體外培養(yǎng)程序流程圖參見圖A.1。去除結(jié)締組織（見5.2.1.6）灌注灌流液（見5.2.1.3、5.2.1.4、5.2.1.5）去除結(jié)締組織（見5.2.1.6）灌注灌流液（見5.2.1.3、5.2.1.4、5.2.1.5）肝臟取樣后預(yù)處理（見5.2.1.2）羊只處理（見5.2.1.1）肝細胞分離及培養(yǎng)（見5.2.1）5.2.1.7）5.2.1.8）5.2.1.9、5.2.1.10）5.2.2）5.2.3）5.2.4）5.2.5）圖A.1羊肝細胞體外培養(yǎng)程序流程圖參考文獻馮振月,劉德福,宋佰芬等.牛肝臟細胞體外培養(yǎng)和傳代細胞的初步鑒定[J2019，41(01):80-86.陳陽潔,高柯欣,王智豪等.肝實質(zhì)細胞的分離、鑒定