西北農(nóng)林科技大學(xué)夏效東修改課件

匯報(bào)人：夏效東西北農(nóng)林科技大學(xué)教授

尿石素A對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂的影響及機(jī)制3214目錄Contents研究?jī)?nèi)容研究背景研究結(jié)論研究結(jié)果12435癱瘓中風(fēng)死亡據(jù)統(tǒng)計(jì)：我國(guó)每5個(gè)成人中有1人患有心血管疾病動(dòng)脈粥樣硬化是誘發(fā)心血管疾病的主要病理根底1.1動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病率高一、研究背景1動(dòng)脈粥樣硬化研究概況巨噬-泡沫細(xì)胞形成-關(guān)鍵環(huán)節(jié)在胞內(nèi)膽固醇合成過(guò)多或者攝入過(guò)多的情況下，促進(jìn)巨噬細(xì)胞膽固醇外流對(duì)抑制泡沫細(xì)胞形成和防治動(dòng)脈粥樣硬化起到關(guān)鍵作用。內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂—啟動(dòng)環(huán)節(jié)動(dòng)脈硬化開(kāi)展的重要表征。表達(dá)出促炎、促血小板聚集、促血管收縮、促凝等機(jī)能轉(zhuǎn)變。microRNA—新型藥物靶點(diǎn)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控。參與動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程的種類繁多，主要調(diào)節(jié)炎癥反響、脂質(zhì)代謝、細(xì)胞增殖等。1.2動(dòng)脈粥樣硬化分子機(jī)制1動(dòng)脈粥樣硬化研究概況一、研究背景尿石素A(UrolithinA,Uro-A)是石榴、草莓、花生等富含鞣花單寧的食物經(jīng)腸道微生物代謝生成的。尿石素A在血漿中的濃度可達(dá)14~25μM。圖1-2.尿石素在腸道中的代謝過(guò)程2.1尿石素的形成2尿石素A研究概況一、研究背景抗癌活性抗氧化活性抗炎活性抗瘧疾活性抗菌活性2.2尿石素生物活性一、研究背景2尿石素A研究概況在人動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞、THP-1源性巨噬細(xì)胞、LPS誘導(dǎo)的RAW264.7中，尿石素A可以顯著抑制促炎因子表達(dá)上調(diào)，表現(xiàn)出強(qiáng)于其他種類尿石素的抗炎作用(Gimenez-Bastidaetal.2021，Piwowarskietal.2021)。尿石素A能夠顯著減弱人肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞中甘油三酯的累積并有效抑制THP-1/巨噬細(xì)胞中膽固醇的募集(MeleLetal.2021,KangIetal.2021)。因此推測(cè)尿石素A在小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞中具有潛在的抑制膽固醇攝入和合成的作用。2.3尿石素A研究進(jìn)展一、研究背景2尿石素A研究概況第二局部研究?jī)?nèi)容人動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞尿石素A細(xì)胞活性NO釋放單核-內(nèi)皮黏附和黏附因子表達(dá)分析炎癥因子表達(dá)分析炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑分析細(xì)胞結(jié)構(gòu)〔LDH〕相關(guān)基因表達(dá)分析從細(xì)胞水平說(shuō)明尿石素A防治動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制二、研究?jī)?nèi)容二、研究?jī)?nèi)容內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反響單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附尿石素A對(duì)動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響MTT毒性乳酸脫氫酶含量及一氧化氮含量及表達(dá)分析單核-內(nèi)皮黏附和黏附因子表達(dá)分析炎癥因子表達(dá)分析炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑分析分子機(jī)制尿石素A抗動(dòng)脈粥樣硬化形成的作用機(jī)制第三局部研究結(jié)果圖1-1.Uro-A對(duì)HAEC細(xì)胞存活率的影響內(nèi)皮細(xì)胞存活率工作濃度：0.52.55μΜ孵育時(shí)間：24h1.1低濃度尿石素A促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞存活率1尿石素A對(duì)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果1尿石素A對(duì)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果1.3尿石素A提高一氧化氮〔NO〕含量圖1-3.Uro-A對(duì)NO含量的影響一氧化氮含量1.2尿石素A抑制乳酸脫氫酶〔LDH〕漏出率圖1-2.Uro-A對(duì)LDH漏出率的影響乳酸脫氫酶漏出率細(xì)胞完整性氧化應(yīng)激信號(hào)分子1尿石素A對(duì)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果圖1-4.Uro-A對(duì)eNOS和ET-1基因表達(dá)量的影響NO血管舒張ET-1血管收縮基因相對(duì)表達(dá)1.4尿石素A對(duì)內(nèi)皮一氧化氮合成酶〔eNOS〕和內(nèi)皮素1〔ET-1〕表達(dá)量的影響1.5尿石素A減少單核-內(nèi)皮粘附細(xì)胞總數(shù)圖1-5,6孟加拉紅染色法檢測(cè)Uro-A對(duì)單核-內(nèi)皮粘附細(xì)胞總數(shù)的影響。(A)對(duì)照組；(B)ox-LDL組；(C)ox-LDL+0.5μMUro-A組；(D)ox-LDL+2.5μMUro-A組；(E)ox-LDL+5μMUro-A組細(xì)胞總數(shù)比值1尿石素A對(duì)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果1.6尿石素A對(duì)單核細(xì)胞粘附內(nèi)皮細(xì)胞的影響圖1-7.pH熒光探針?lè)z測(cè)Uro-A對(duì)單核細(xì)胞粘附內(nèi)皮細(xì)胞的影響。(A)對(duì)照組；(B)ox-LDL組；(C)ox-LDL+0.5μMUro-A組；(D)ox-LDL+2.5μMUro-A組；(E)ox-LDL+5μMUro-A組圖1-8.定量分析Uro-A對(duì)單核細(xì)胞粘附內(nèi)皮細(xì)胞的影響熒光強(qiáng)度1尿石素A對(duì)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果圖1-9.Uro-A對(duì)粘附因子表達(dá)量的影響1.7尿石素A抑制粘附因子表達(dá)基因相對(duì)表達(dá)1尿石素A對(duì)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果尿石素A可降低由氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的黏附因子的表達(dá)下調(diào)細(xì)胞間粘附因子ICAM-1和單核細(xì)胞趨化蛋白MCP-1的基因表達(dá)對(duì)單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附進(jìn)行調(diào)控。維持內(nèi)皮細(xì)胞完整性和一氧化氮/內(nèi)皮素含量平衡，從而改善內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂的作用。1.8小結(jié)人動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞尿石素A1尿石素A對(duì)氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響三、研究結(jié)果2.1尿石素A降低ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥因子含量圖2-1.Uro-A對(duì)IL-6濃度的影響圖2-2.Uro-A對(duì)TNF-α濃度的影響圖2-3.Uro-A對(duì)IFN-γ濃度的影響白介素6含量干擾素γ含量腫瘤壞死因子α含量2尿石素A通過(guò)調(diào)控MAPK信號(hào)通路對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反響的影響三、研究結(jié)果ox-LDL可誘導(dǎo)IL-6、TNF-α產(chǎn)生誘導(dǎo)炎癥反響，Uro-A可有效改善這種作用；ox-LDL不能直接通過(guò)IFN-γ對(duì)HEAC造成炎癥反響，且Uro-A不是通過(guò)響IFN-γ相關(guān)基因或蛋白的表達(dá)對(duì)炎癥反響進(jìn)行調(diào)控。圖2-4.Uro-A對(duì)PPAR-γ基因表達(dá)的影響PPAR-γ基因相對(duì)表達(dá)2.2尿石素A通過(guò)調(diào)控miRNA-27促進(jìn)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ〔PPAR-γ〕基因表達(dá)2尿石素A通過(guò)調(diào)控MAPK信號(hào)通路對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反響的影響三、研究結(jié)果Uro-A改善經(jīng)氧化低密度脂蛋白對(duì)PPAR-γ基因表達(dá)的抑制作用圖2-5.Uro-A對(duì)miRNA-27基因表達(dá)的影響抑制表達(dá)miR-27基因相對(duì)表達(dá)圖2-6.miR-27過(guò)表達(dá)和抑制表達(dá)的情況下2.5μMUro-A對(duì)PPAR-γ基因表達(dá)的影響PPAR-γ基因相對(duì)表達(dá)尿石素A通過(guò)抑制miR-27表達(dá)提高PPAR-γ轉(zhuǎn)錄水平2.2尿石素A通過(guò)調(diào)控miRNA-27促進(jìn)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ〔PPAR-γ〕基因表達(dá)2尿石素A通過(guò)調(diào)控MAPK信號(hào)通路對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反響的影響三、研究結(jié)果Thanks2.2尿石素A抑制ERK1/2、SAPK/JNK和p38信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)2尿石素A通過(guò)調(diào)控MAPK信號(hào)通路對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反響的影響三、研究結(jié)果圖2-7.U0126和Uro-A對(duì)ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表達(dá)的影響圖2-8.SP600126和Uro-A對(duì)SAPK/JNK、P-SAPK/JNK蛋白表達(dá)的影響Thanks圖2-9.Uro-A對(duì)p38和p-p38蛋白表達(dá)的影響2.2尿石素A抑制ERK1/2、SAPK/JNK和p38信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)2尿石素A通過(guò)調(diào)控MAPK信號(hào)通路對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反響的影響三、研究結(jié)果Uro-A能夠明顯抑制50μg/mLox-LDL激活的ERK1/2、SAPK/JNK和p38磷酸化，并且和通路抑制劑U0126及SP600125具有一定的協(xié)同作用。2.3尿石素A通過(guò)調(diào)控ERK/PPAR-γ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制ICAM-1表達(dá)圖2-10.U0126和2.5μMUro-A對(duì)PPAR-γ蛋白表達(dá)的影響圖2-11.PPAR-γsiRNA和2.5μMUro-A對(duì)ICAM-1mRNA表達(dá)的影響尿石素A調(diào)控ERK/PPAR/ICAM-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑2尿石素A通過(guò)調(diào)控MAPK信號(hào)通路對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反響的影響三、研究結(jié)果降低炎癥因子含量通過(guò)miR-27途徑調(diào)控PPAR-γ抑制ox-LDL誘導(dǎo)的MAPK通路激活通過(guò)ERK/PPARγ途徑調(diào)控ICAM-1表達(dá)2.4小結(jié)2尿石素A通過(guò)調(diào)控MAPK信號(hào)通路對(duì)ox-