腫瘤免疫治療思考和對策

關于腫瘤免疫治療思考和對策腫瘤免疫治療主要通過相關的技術(shù)方法增強腫瘤抗原的免疫原性，進而誘導機體產(chǎn)生腫瘤特異性的細胞免疫應答來消除腫瘤。腫瘤相關及特異性抗原的存在是腫瘤免疫治療的基礎，但因受到腫瘤細胞本身及外在多種因素的影響，怎樣誘導有效的腫瘤免疫應答，是一個令人困擾的問題。第2頁,共25頁，2024年2月25日，星期天1.非特異性主動免疫療法非特異性刺激因子細胞因子2.特異性主動免疫療法腫瘤疫苗：包括處理的瘤細胞、腫瘤抗原肽和人工合成肽抗原作為疫苗、癌基因產(chǎn)物。腫瘤抗原特異性DC疫苗腫瘤的主動免疫治療第3頁,共25頁，2024年2月25日，星期天1、過繼性細胞免疫治療

LAK、TIL、CTL2、腫瘤的抗體導向治療抗體偶聯(lián)物雙特異性抗體3、特異性免疫治療分子疫苗腫瘤抗原特異性CTL細胞治療

腫瘤的被動免疫治療第4頁,共25頁，2024年2月25日，星期天影響宿主腫瘤免疫的因素腫瘤細胞低表達MHC分子腫瘤細胞缺乏共刺激分子腫瘤抗原是沉默抗原或為低免疫原性腫瘤抗原特異性CD4+T細胞克隆丟失腫瘤細胞產(chǎn)生大量抑制因子腫瘤細胞增殖超過免疫細胞對其殺傷能力第5頁,共25頁，2024年2月25日，星期天第一信號MHCⅠMHCⅡTCRCD4+T共刺激分子CD28共刺激分子B7腫瘤抗原第二信號第一信號MHCⅠTCRCD4+T共刺激分子CD28共刺激分子（沉默型/低免疫原）B7腫瘤抗原第二信號MHCⅡ第6頁,共25頁，2024年2月25日，星期天激發(fā)有效T細胞介導的抗腫瘤反應

的物質(zhì)基礎腫瘤抗原多肽必需經(jīng)過抗原遞呈細胞（APC）加工處理后，形成MHC分子復合物，才能被TCR識別，產(chǎn)生抗原特異性激發(fā)信號；還需依賴于APC表達的共刺激分子與T細胞上表達的相應分子結(jié)合后產(chǎn)生的共刺激信號。第7頁,共25頁，2024年2月25日，星期天一、樹突狀細胞在腫瘤免疫中的應用第8頁,共25頁，2024年2月25日，星期天樹突狀細胞（DC）是機體內(nèi)最重要的一群抗原提呈細胞，是機體免疫應答的有力啟動者，以DC為物質(zhì)基礎的免疫療法是近年來新發(fā)展起來的一種新的生物治療手段。第9頁,共25頁，2024年2月25日，星期天DC激發(fā)腫瘤特異性免疫應答的三個環(huán)節(jié)1.腫瘤特異性抗原的遞呈；2.腫瘤特異性CTL細胞和非特異性殺傷細胞的活化；3.效應細胞向腫瘤部位的遷移和清除腫瘤的限制因素的識別。主要目的是誘導患者機體產(chǎn)生腫瘤特異性的、持久的免疫應答。第10頁,共25頁，2024年2月25日，星期天主要治療策略（1）直接輸注DCs，以激發(fā)機體免疫功能的主動免疫；（2）以經(jīng)自體DCs體外擴增、激活的T淋巴細胞（CTL）為物質(zhì)基礎的過繼免疫療法，使腫瘤患者產(chǎn)生有效、持久的抗腫瘤免疫效應。第11頁,共25頁，2024年2月25日，星期天3.DC體外擴增的方法DC在組織中含量甚微，細胞表面缺乏特征性的標志，不易與其它細胞分離。細胞來源的困難一度限制了對DC生物學特性等方面的深入研究。在應用中發(fā)現(xiàn)治療時使用的DC可能并不完全成熟，相當一部分回輸?shù)腄C是非功能性的幼稚DC，從而大大降低了治療效果；而如果僅僅應用未成熟的DC往往只能導致機體的免疫耐受。國內(nèi)外許多實驗室都致力于研究通過體外培養(yǎng)獲得大量高純度功能性成熟DC的方法第12頁,共25頁，2024年2月25日，星期天

目前用于臨床和實驗研究的DC大多是通過體外分離DC的前體細胞，在含有有關細胞因子的培養(yǎng)體系中誘導獲得。骨髓、臍血、外周血CD34+細胞或外周血單個核細胞均可作為體外培養(yǎng)DC的來源。適當?shù)募毎蜃优湮楹蛻庙樞驅(qū)C的培養(yǎng)具有重要作用。

第13頁,共25頁，2024年2月25日，星期天腫瘤抗原特異性DCs的制備

細胞性腫瘤抗原體外沖擊DC：包括采用滅活的腫瘤細胞或凋亡的腫瘤細胞負載DC;

合成的腫瘤細胞抗原或抗原肽體外沖擊DC;腫瘤抗原提取物負載DC：目前常用的提取物包括腫瘤細胞碎片、酸性洗脫肽及mRNA抽提物;

基因修飾的DC：包括腫瘤抗原編碼的基因及某些細胞因子（GM-CSF、IL-7、IL-12等）通過病毒導入DC。

第14頁,共25頁，2024年2月25日，星期天二、細胞毒性T細胞在腫瘤免疫中的運用第15頁,共25頁，2024年2月25日，星期天CTL抗凋亡能力測定

FLIP、Bcl-2、Bax51Cr釋放試驗

對相應腫瘤細胞的殺傷作用對自體PBMC的殺傷作用T細胞趨化實驗第16頁,共25頁，2024年2月25日，星期天A．病人選擇

①

已經(jīng)病理組織學確診為非小細胞肺癌②

已失去手術(shù)機會或不愿接受手術(shù)治療③

住院病人④

臨床分期（TNM）：Ⅲ期及Ⅲ期以上⑤

年齡≤65歲⑥

預計生存期≥1.0年⑦

生存質(zhì)量評分≥60分⑧

心、肝、腎等臟器功能基本正常⑨

知情同意的志愿受試者第17頁,共25頁，2024年2月25日，星期天B．腫瘤治療a）將病人隨機分為A、B、C三組，A組：對照組，行常規(guī)的正規(guī)放療或化療；B組：試驗組，正規(guī)化療+腫瘤抗原特異性自體T細胞過繼免疫治療；C組：試驗組，正規(guī)放療+腫瘤抗原特異性自體T細胞過繼免疫治療；b)腫瘤抗原特異性CTL輸注程序：在減瘤治療后，分3次回輸體外擴增的自體T淋巴細胞（1×109/次），即在最大程度降低機體的腫瘤負荷后，重建患者的細胞免疫功能。第18頁,共25頁，2024年2月25日，星期天C．療效評價

a)

二個療程后，按WHO的判定標準，評定療效l

CR（完全緩解）l

PR（部分緩解）l

MR（穩(wěn)定）l

NC或PD（無變化或進展）b)

生存質(zhì)量評分（Karnofsky的標準）根據(jù)腫瘤患者治療前后的精神、睡眠、食欲、疲乏、疼痛、家庭理解與配合、同事的理解與配合、自身對癌癥的認識、對治療的態(tài)度、行為狀態(tài)、日常活動情況、面部的表情等進行等級綜合評分。

c）臨床癥狀體征改變的分析。

d）生存期、中位生存期的分析。e）免疫功能狀況的分析①采用免疫熒光標記法分析患者治療前后的T細胞及其亞群功能變化（CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD4+/CD28+、CD8+/CD28+、CD4+-IFN-γ+、CD8+-IFN-γ+、

CD4+-IL-10+、CD8+-IL-10+、CD56、CD40L、CD95L）②采用ELISA法分析患者治療前后的血清細胞因子水平變化（IL-2、sIL-2R、IL-10、IL-12、IFN-γ）③患者治療前后自體T淋巴細胞對相應腫瘤細胞的殺傷效應測定（51Cr釋放試驗）④肽-MHC四聚體的測定第19頁,共25頁，2024年2月25日，星期天三、免疫分子的分析及臨床意義第20頁,共25頁，2024年2月25日，星期天DualParameterHistograms1FSCSizeSSC

granularity32LymphsMonosGrans25第21頁,共25頁，2024年2月25日，星期天第22頁,共25頁，2024年2月25日，星期天抗體的基本結(jié)構(gòu)是一個Y型的多肽鏈，由兩條完全相同的重鏈和輕鏈組成。第23頁,共25頁，2024年2月25日，星期天抗體（Antibody,