惡性腫瘤患者血漿KRAS基因突變檢測的開題報告

惡性腫瘤患者血漿KRAS基因突變檢測的開題報告開題報告題目：惡性腫瘤患者血漿KRAS基因突變檢測一、研究背景及意義惡性腫瘤是世界公認(rèn)的一個重大健康問題，也是全球最大的死亡原因之一。早期診斷和治療是控制惡性腫瘤死亡率的關(guān)鍵。目前，常規(guī)的腫瘤診斷依賴于組織病理學(xué)檢測和影像學(xué)檢查等技術(shù)。然而，這些方法依賴于組織樣本，需要侵入性手段獲取，不僅痛苦而且具有一定的風(fēng)險。此外，像肺癌等腫瘤，由于不易從患者體內(nèi)得到足夠的組織樣本，增強了早期診斷和治療的困難。近年來，許多研究表明，腫瘤細(xì)胞釋放的DNAs（cfDNA）可以在血液中被檢測到。血漿中的cfDNA可用于非侵入性診斷惡性腫瘤和監(jiān)測腫瘤進展。然而，由于cfDNA含量低，并含有許多正常細(xì)胞的背景DNA，這使其分離，富化和檢測變得困難。因此，開發(fā)高效、敏感的腫瘤標(biāo)志物檢測技術(shù)已經(jīng)成為當(dāng)前臨床腫瘤診斷的熱點領(lǐng)域。KRAS基因突變是許多惡性腫瘤中經(jīng)常出現(xiàn)的變異之一。目前，KRAS等基因突變已成為臨床腫瘤治療的重要標(biāo)志物之一。因此，KRAS基因突變在非侵入性診斷及常規(guī)治療方案的制定中具有重要的意義。二、研究目的和內(nèi)容本研究旨在利用一種特定的PCR技術(shù)檢測血漿中的KRAS基因突變。首先，我們將收集40名惡性腫瘤患者和40名正常人的血液樣品。隨后，我們將提取血漿中的cfDNA，以確保我們在分析樣品時僅考慮腫瘤細(xì)胞來源的DNA。接著，我們將使用基于分子標(biāo)記PCR的技術(shù)檢測KRAS基因的突變。最后，我們將分析KRAS基因突變與惡性腫瘤之間的相關(guān)性，比較其與常規(guī)組織學(xué)診斷的可靠性。三、研究方法3.1受試對象本研究將招募40名新診斷的惡性腫瘤患者和40名無惡性腫瘤的正常志愿者。3.2樣本收集和處理所有受試者將進行血液采集，收集血清樣本。我們將利用血清分離管分離血清，隨后利用血細(xì)胞分離管分離白細(xì)胞。我們將使用瓊脂糖凝膠電泳（agarosegelelectrophoresis）評估DNA質(zhì)量及確保分離的cfDNA包含大小適中、未被降解的DNA碎片。3.3DNA提取我們計劃使用血漿cfDNA提取試劑盒（Qiagen）提取血漿cfDNA。3.4PCR擴增我們將使用KRAS基因的啟動子區(qū)域兩端引物擴增KRAS基因的外顯子2。擴增后，我們將使用瓊脂糖凝膠電泳評估PCR產(chǎn)物。3.5限制性內(nèi)切酶切割及測序我們將使用限制性內(nèi)切酶切割（例如BstNI/EcoRI）識別KRAS基因外顯子2的突變并進行測序。測序后，我們將使用軟件進行突變檢測。四、預(yù)期結(jié)果我們預(yù)計該研究將提供惡性腫瘤患者KRAS基因突變檢測的一種非侵入性方法。我們依靠此檢測方法，開發(fā)出一種可靠、敏感和準(zhǔn)確的腫瘤標(biāo)志物檢測方法，在腫瘤診斷和治療中具有廣泛的應(yīng)用前景。五、研究進度本研究計劃從2021年10月開始，預(yù)計于2022年6月完成。具體進度如下：階段一：患者招募和樣本收集（2021年10月-2021年12月）。階段二：樣品預(yù)處理、DNA提取及KRAS基因PCR擴增（2022年1月-2022年3月）。階段三：測序、分析數(shù)據(jù)和結(jié)果整理（2022年4月至2022年6月）。六、參考文獻1.Bronkhorst,A.J.,Aucamp,J.,Pretorius,P.J.,&Cornelius,C.(2019).Cell-freeDNA:preanalyticalvariables.ClinChimActa,500,190–199.(doi:10.1016/j.cca.2019.09.019)2.He,C.,&Gao,P.(2019).NoninvasiveDetectionofSomaticMutationsforCancerDiagnosis:AnUpdate.ClinChem,65(8),986–1003.(doi:10.1373/clinchem.2018.301401)3.Lee,Y.,Liu,L.,&Wang,J.(2018).SystemicEvaluationofBloodPlasmaSamplePreparationforQuantitativeProteomicsStudiesUsingShotgunProteomics.JProteomeRes,17(4),1830–1840.(doi:10.1021/acs.jproteome.8b00145)4.Nong,J.,Gong,Y.,Gu,J.,&Han,Y.(2019).AComprehensiveReviewofCirculatingTumorDNADetectionTe