實(shí)驗(yàn)二 細(xì)胞中核酸染色和兩類核酸定位

實(shí)驗(yàn)二細(xì)胞中核酸染色和兩類核酸定位一、實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)胞中，DNA主要分布在細(xì)胞核內(nèi)；RNA主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，堿性染料甲基綠和派洛寧對酸性的核酸均有親和力，但是這兩種染料對DNA和RNA卻有很強(qiáng)的選擇性：DNA可以被甲基綠染成綠色，RNA卻被派洛寧染成紅色。二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察細(xì)胞中的DNA、RNA的分布三、實(shí)驗(yàn)用具：載玻片，蓋玻片，牙簽，微量可調(diào)移液器，顯微鏡。四、試劑配制：甲基綠-派洛寧混合染料：稱取甲基綠0.1g，吡咯紅0.0835g，乙酸鈉0.39g，加入蒸餾水90ml,再加入乙酸192μL,混勻后定容至100ml。卡諾氏固定液:：取無水乙醇60ml,再加入冰乙酸20ml。95%酒精：量取95ml酒精，加入5ml蒸餾水。70%酒精：量取70ml酒精，加入30ml蒸餾水。五、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：主要儀器：普通光學(xué)顯微鏡（12個/班，共用）計(jì)時(shí)器（25個/班，1個/組）微量移液器（25套/班，1套/組）輔助儀器：載、蓋玻片（各50個/班，2個/組）鑷子（各50個/班，2個/組）耗材：黃、藍(lán)吸頭（各25盒/班，1盒/組）材料：洋蔥（25個/班，1個/組）試劑：甲基綠-派洛寧混合染料(12.5ml/班，500μl/組)卡諾氏固定液(250mL/班，10ml/組)95%酒精(250ml/班，10ml/組)70%酒精(250ml/班，10ml/組)備注：甲基綠-派洛寧混合染料（100ml）：稱取甲基綠0.1g，吡咯紅0.0835g，乙酸鈉0.39g，加入蒸餾水90ml,再加入乙酸192μL,混勻后定容至100ml?？ㄖZ氏固定液（320ml）：取無水乙醇240ml,再加入冰乙酸80ml。95%酒精（300ml）：量取285ml酒精，加入15ml蒸餾水。70%酒精（300ml）：量取210ml酒精，加入90ml蒸餾水。六、實(shí)驗(yàn)步驟：1.取洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞，放入卡諾氏固定液固定15min。然后再放入95%酒精10min，接著再轉(zhuǎn)入70%酒精10min?；2.將洋蔥內(nèi)表皮放在潔凈的載玻片上，滴上1~2滴甲基綠-派洛寧混合染料，染色5-10min，用蒸餾水沖去多余染液，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去多余染液；3.在普通光學(xué)顯微鏡下觀察。七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析：從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞經(jīng)甲基綠哌洛寧(吡咯紅)染液染色后，細(xì)胞核被染成藍(lán)綠色，細(xì)胞質(zhì)部位呈粉紅色，如圖1所示圖1.400×洋蔥內(nèi)表皮經(jīng)甲基綠哌洛寧染液染色八、注意事項(xiàng)及改進(jìn)：1.洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞進(jìn)行經(jīng)吡咯紅甲基綠染色，實(shí)驗(yàn)效果好，建議用洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞代替洋蔥根尖細(xì)胞；2.卡諾固定15min便能達(dá)到較好的實(shí)驗(yàn)效果，建議固定細(xì)胞時(shí)時(shí)間為15min；3.甲基綠吡咯紅染色5-10min就能達(dá)到很好的染色效果，建議將染色時(shí)間從20-30min改為5-10min。九、建議課時(shí)安排：建議用1個課時(shí)十、問題提問：1.甲基綠哌洛寧染色的原理是什么？答：甲基綠易與聚合程度高的DNA結(jié)合呈現(xiàn)綠色。而派洛寧則與聚合程度較低的RNA結(jié)合呈現(xiàn)紅色（但解聚的DNA也能和派洛寧結(jié)合呈現(xiàn)紅色），即RNA對派洛寧親和力大，被染成紅色，而DNA對甲基綠親和力大，被染成綠色。2.卡諾試劑固定的原理是什么？答：卡諾固定液能夠迅速穿透細(xì)胞，溶解脂肪及類脂體，使蛋白質(zhì)變性凝固，維持細(xì)胞的穩(wěn)定性，達(dá)到優(yōu)良染色效果。3.DNA僅存在于細(xì)胞核中，這句話對嗎？為什么？答：不對，DNA除存在于細(xì)胞