高考生物總復(fù)習(xí)第一部分非選擇題必考五大專題專題五選修部分第15講基因工程及克隆技術(shù)全國(guó)公開課一等獎(jiǎng)百

第15講基因工程及克隆技術(shù)第1頁(yè)[考試要求]

1.工具酶發(fā)覺和基因工程誕生(/a)。2.基因工程原理和技術(shù)(/b)。3.基因工程應(yīng)用(/a)。4.提出生活中疑難問題，設(shè)計(jì)用基因工程技術(shù)處理方案(/c)。5.植物克隆(/b)。6.動(dòng)物克隆(/a)。第2頁(yè)1.(·浙江4月選考)回答與基因工程和植物克隆相關(guān)問題： (1)將含某抗蟲基因載體和含卡那霉素抗性基因載體pBI121均用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ酶切，在切口處形成____________。選取含抗蟲基因DNA片段與切割后pBI121用DNA連接酶連接，在兩個(gè)片段相鄰處形成____________，取得重組質(zhì)粒。 (2)已知用CaCl2處理細(xì)菌，會(huì)改變其一些生理狀態(tài)。取CaCl2處理過農(nóng)桿菌與重組質(zhì)粒在離心管內(nèi)進(jìn)行混合等操作，使重組質(zhì)粒進(jìn)入農(nóng)桿菌，完成________試驗(yàn)。在離心管中加入液體培養(yǎng)基，置于搖床慢速培養(yǎng)一段時(shí)間，其目標(biāo)是_______________，

從而表示卡那霉素抗性基因，并大量增殖。第3頁(yè)(3)取田間不一樣品種水稻幼胚，先進(jìn)行________，然后接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)，幼胚發(fā)生________形成愈傷組織，并進(jìn)行繼代培養(yǎng)。用含重組質(zhì)粒農(nóng)桿菌侵染愈傷組織，再培養(yǎng)愈傷組織，方便取得抗蟲轉(zhuǎn)基因水稻。影響愈傷組織能否成功再生出植株原因有：培養(yǎng)條件如光溫、培養(yǎng)基配方如植物激素配比、以及____________________________________________________________________________________________________________________________________________(答出2點(diǎn)即可)。

第4頁(yè)解析

(1)構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ剪切得到是粘性末端，DNA連接酶連接兩個(gè)DNA片段之間形成是磷酸二酯鍵。(2)目標(biāo)基因?qū)胫参锛?xì)胞慣用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。用Ca2＋處理細(xì)菌以增加細(xì)菌細(xì)胞壁通透性，讓其處于感受態(tài)細(xì)胞，以利于重組質(zhì)粒導(dǎo)入。(3)不一樣種類植物或同種植物不一樣基因型個(gè)體之間存在遺傳差異，細(xì)胞全能性表示程度大小不一樣，小麥水稻等作物在屢次繼代培養(yǎng)后，會(huì)喪失細(xì)胞全能性表示能力。答案

(1)粘性末端磷酸二酯鍵(2)轉(zhuǎn)化使CaCl2處理過農(nóng)桿菌恢復(fù)細(xì)胞正常狀態(tài)(3)消毒脫分化水稻基因型、愈傷組織繼代次數(shù)

第5頁(yè)2.(·浙江11月選考)回答與植物克隆和動(dòng)物克隆相關(guān)問題： (1)利用植物愈傷組織取得再生植株主要有兩條路徑：一是由愈傷組織細(xì)胞先分化產(chǎn)生芽和根后再形成一個(gè)完整植株________路徑，二是由愈傷組織細(xì)胞產(chǎn)生胚狀體后再萌發(fā)形成完整植株胚胎發(fā)生路徑。另外也可不經(jīng)過愈傷組織階段而直接采取帶腋芽莖段培養(yǎng)成叢狀苗，再誘導(dǎo)生根取得再生植株，其原因是腋芽中存在____________________________________________________________。

第6頁(yè)(2)利用植物克隆培育新品種，首先可利用帶有目標(biāo)基因________侵染植株，或?qū)⒛繕?biāo)基因經(jīng)過________方法導(dǎo)入植物細(xì)胞、組織或器官取得轉(zhuǎn)基因植株，另首先利用異源植株________進(jìn)行融合產(chǎn)生雜種植株，或利用異源植物在試管內(nèi)進(jìn)行________，對(duì)其產(chǎn)生胚進(jìn)行培養(yǎng)產(chǎn)生雜種植株。(3)以下屬于植物克隆和動(dòng)物克隆共有培養(yǎng)方法是________。A.懸浮培養(yǎng)、器官培養(yǎng) B.貼壁培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)C.器官培養(yǎng)、愈傷組織培養(yǎng)

D.原生質(zhì)體培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)第7頁(yè)解析(1)外植體經(jīng)脫分化后形成愈傷組織，由愈傷組織形成再生植株主要有兩條路徑：一是由愈傷組織細(xì)胞先分化產(chǎn)生芽和根后再形成一個(gè)完整植株是植物組織培養(yǎng)器官發(fā)生路徑，二是由愈傷組織細(xì)胞產(chǎn)生胚狀體后再萌發(fā)成完整植株是植物組織培養(yǎng)胚胎發(fā)生路徑。不經(jīng)過愈傷組織階段而直接采取帶腋芽莖段培養(yǎng)成叢狀苗，這說明腋芽中含有分生組織，而分生組織中含較高細(xì)胞分裂素，細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素之比較高可促進(jìn)芽生長(zhǎng)。

(2)將目標(biāo)基因?qū)胫参锛?xì)胞，能夠用含有目標(biāo)基因農(nóng)桿菌直接侵染，或者用顯微注射法導(dǎo)入；用異源植物能夠利用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)或者受精之后胚胎進(jìn)行培養(yǎng)，也能夠取得雜種植株。第8頁(yè)(3)貼壁生長(zhǎng)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)特征；愈傷組織是指植物細(xì)胞在組織培養(yǎng)過程中形成一個(gè)排列疏松而無(wú)規(guī)則無(wú)定形狀態(tài)、高度液泡化薄壁細(xì)胞，動(dòng)物細(xì)胞無(wú)愈傷組織培養(yǎng)；傳代培養(yǎng)應(yīng)用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中。答案(1)器官發(fā)生分生組織(2)農(nóng)桿菌顯微注射原生質(zhì)體受精(3)A第9頁(yè)3.(·浙江10月選考節(jié)選)某小組欲進(jìn)行煙草原生質(zhì)體分離與培養(yǎng)研究。請(qǐng)回答： (1)原生質(zhì)體分離：在無(wú)菌條件下，取煙草無(wú)菌苗葉片，放入含有0.5mol/L甘露醇(維持較高滲透壓)________混合液處理，經(jīng)過離心純化后取得原生質(zhì)體。 (2)原生質(zhì)體培養(yǎng)：將原生質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)，重新長(zhǎng)出細(xì)胞壁，形成胚性細(xì)胞。此時(shí)，應(yīng)該________培養(yǎng)基中甘露醇濃度，以利于胚性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán)，然后經(jīng)兩條路徑形成再生植株。路徑一：細(xì)胞團(tuán)經(jīng)球形胚、________和胚狀體，最終發(fā)育成植株。路徑二：細(xì)胞團(tuán)增殖為愈傷組織，然后在發(fā)芽培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出芽，切割芽經(jīng)過生根后形成完整植株。上述發(fā)芽培養(yǎng)基中含量相對(duì)較高激素是__________，胚性細(xì)胞主要特點(diǎn)是________(A.液泡小、細(xì)胞核小B.液泡大，細(xì)胞核大C.液泡大，細(xì)胞核小D.液泡小、細(xì)胞核大)。第10頁(yè)(3)為了對(duì)煙草一些性狀進(jìn)行改良，分離兩種煙草原生質(zhì)體后，經(jīng)過____________方法將他們遺傳物質(zhì)組合在一起，經(jīng)培養(yǎng)取得含有新性狀再生植株。提取再生植株DNA，采取______________擴(kuò)增相關(guān)基因，來判定遺傳物質(zhì)是否成功重組。第11頁(yè)解析(1)去除植物細(xì)胞壁，取得植物細(xì)胞原生質(zhì)體，慣用方法是利用纖維素酶和果膠酶處理植物細(xì)胞。(2)在獲取原生質(zhì)體時(shí)甘露醇是作為維持細(xì)胞膜內(nèi)外滲透壓平衡穩(wěn)定劑使用。其詳細(xì)作用是提升滲透壓，預(yù)防水分滲透細(xì)胞內(nèi)部，造成細(xì)胞破裂。在原生質(zhì)體形成新細(xì)胞壁后，有細(xì)胞壁支持與保護(hù)作用，所以要稀釋甘露醇濃度；從胚性細(xì)胞→細(xì)胞團(tuán)→球形胚→心形胚→胚狀體，然后再生出完整小植株；為快速誘導(dǎo)芽分化，培養(yǎng)基中往往添加細(xì)胞分裂素；胚性細(xì)胞特點(diǎn)是液泡小、細(xì)胞核大。(4)植物細(xì)胞工程中，利用原生質(zhì)體融合方法取得雜種細(xì)胞；體外擴(kuò)增DNA技術(shù)慣用是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，即PCR技術(shù)。答案

(1)纖維素酶和果膠酶(2)稀釋(降低)心形胚細(xì)胞分裂素D

(3)原生質(zhì)體融合PCR第12頁(yè)4.(·浙江4月選考節(jié)選)兔肝細(xì)胞中基因E編碼代謝甲醛酶，擬利用基因工程技術(shù)將基因E轉(zhuǎn)入矮牽牛中，以提升矮牽牛對(duì)甲醛代謝能力。請(qǐng)回答： (1)從兔肝細(xì)胞中提取mRNA，在________酶作用下形成互補(bǔ)DNA，然后以此DNA為模板擴(kuò)增得到基因E。在相關(guān)酶作用下，將基因E與Ti質(zhì)粒連接在一起，形成________，再導(dǎo)入用氯化鈣處理________，浸染矮牽牛葉片。將被浸染葉片除菌后進(jìn)行培養(yǎng)，最終得到轉(zhuǎn)基因矮牽牛。其中培養(yǎng)過程正確是________(A.葉片在含適當(dāng)濃度生長(zhǎng)素培養(yǎng)基上分化形成愈傷組織B.愈傷組織在含細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素配比較高培養(yǎng)基上形成芽C.再生芽在細(xì)胞分裂素含量高培養(yǎng)基上生根D.愈傷組織在含適當(dāng)濃度植物生長(zhǎng)調(diào)整劑培養(yǎng)基上脫分化形成再生植株)。第13頁(yè)(2)取轉(zhuǎn)基因矮牽牛葉片，放入含MS液體培養(yǎng)基和適量濃度甲醛且密封試管中。將試管置于________上，進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)。一段時(shí)間后測(cè)定培養(yǎng)基中甲醛含量，以判斷基因E是否在轉(zhuǎn)基因矮牽牛中正常表示。培養(yǎng)過程中液體培養(yǎng)基作用：一是提供營(yíng)養(yǎng)；二是________，從而使葉片保持正常形態(tài)。第14頁(yè)解析(1)以mRNA為模板合成DNA過程為逆轉(zhuǎn)錄過程，這一過程需要在逆轉(zhuǎn)錄酶催化下進(jìn)行。取得目標(biāo)基因后，需在限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶作用下，將目標(biāo)基因與運(yùn)載體(Ti質(zhì)粒)連接形成重組質(zhì)粒(重組DNA分子)，再將其導(dǎo)入受體細(xì)胞。將目標(biāo)基因?qū)胫参锛?xì)胞慣用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，先將重組DNA導(dǎo)入經(jīng)氯化鈣處理農(nóng)桿菌，再用導(dǎo)入目標(biāo)基因農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，最終實(shí)現(xiàn)將目標(biāo)基因?qū)胫参锛?xì)胞內(nèi)。導(dǎo)入目標(biāo)基因植物細(xì)胞經(jīng)組織培養(yǎng)過程形成轉(zhuǎn)基因植物。組織培養(yǎng)過程中，葉片在含適宜濃度生長(zhǎng)素培養(yǎng)基上脫分化形成愈傷組織，然后在含細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素配比較高培養(yǎng)基上形成芽，繼而在生長(zhǎng)素含量高培養(yǎng)基上生根，最終形成完整植株，愈傷組織形成植株過程中發(fā)生細(xì)胞分化。(2)植物組織培養(yǎng)過程中，將愈傷組織等細(xì)胞置于搖床上，進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)，形成多個(gè)分散細(xì)胞。培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液首先為植物細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)，另首先維持一定滲透壓，從而使葉片保持正常形態(tài)。答案

(1)逆轉(zhuǎn)錄重組DNA分子農(nóng)桿菌B

(2)搖床維持滲透壓

第15頁(yè)1.正誤判斷 (1)基因工程載體有質(zhì)粒、λ噬菌體、動(dòng)植物病毒，其中λ噬菌體可將外源基因載入動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)。() (2)構(gòu)建重組DNA分子時(shí)必須使用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割目標(biāo)基因和載體DNA，以在目標(biāo)基因和載體DNA兩端形成相同粘性末端。() (3)轉(zhuǎn)入了人胰島素原基因大腸桿菌，能夠合成出含有生物活性胰島素。() (4)轉(zhuǎn)基因技術(shù)育種克服了傳統(tǒng)育種育種時(shí)間長(zhǎng)、遠(yuǎn)緣親本難以雜交缺點(diǎn)。()×××√第16頁(yè)(5)植物克隆技術(shù)基礎(chǔ)是植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)，其理論基礎(chǔ)是植物細(xì)胞全能性。()(6)動(dòng)物克隆技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞和組織培養(yǎng)，其理論基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞全能性。()(7)細(xì)胞克隆要求必須確保分離出來細(xì)胞是一個(gè)或多個(gè)分離細(xì)胞。()(8)細(xì)胞系是泛指可傳代細(xì)胞，細(xì)胞株是含有特殊性質(zhì)細(xì)胞系。()√×√√第17頁(yè)2.讀圖析圖

(1)②構(gòu)建需要____________________酶參加。 (2)④→⑤過程依據(jù)原理是________________，關(guān)鍵步驟包含________________。 (3)要確定抗蟲基因?qū)胫参锛?xì)胞后，是否賦予了植物抗蟲特征，在個(gè)體水平上還需要做________試驗(yàn)；若要檢測(cè)含有抗蟲基因棉花是否產(chǎn)生了對(duì)應(yīng)毒蛋白，在分子水平上可利用________________方法進(jìn)行檢測(cè)。

提醒(1)限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接(2)植物細(xì)胞全能性脫分化、再分化(3)抗蟲接種抗原—抗體雜交

第18頁(yè)考點(diǎn)1基因工程工具1.已知一雙鏈DNA分子，用限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ切割得到長(zhǎng)度為120kb(kb：千堿基對(duì))片段；用限制性核酸內(nèi)切酶Ⅱ切割得到40kb和80kb兩個(gè)片段；同時(shí)用限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ和限制性核酸內(nèi)切酶Ⅱ切割時(shí)，得到10kb、80kb和30kb3個(gè)片段。據(jù)此分析該雙鏈DNA分子結(jié)構(gòu)及酶切位點(diǎn)情況為(

)第19頁(yè)解析依據(jù)題意，該DNA用限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ切割后得1條片段，故為環(huán)狀DNA，依據(jù)兩酶作用結(jié)果，可知酶切圖譜為D。答案D第20頁(yè)2.某一質(zhì)粒載體如圖所表示，外源DNA插入Ampr或Tetr中會(huì)造成對(duì)應(yīng)基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有些人將此質(zhì)粒載體用BamHⅠ酶切后，與用BamHⅠ酶切取得目標(biāo)基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌，結(jié)果大腸桿菌有未被轉(zhuǎn)化，有被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目標(biāo)基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目標(biāo)基因重組質(zhì)粒大腸桿菌?；卮鹨韵聠栴}：

第21頁(yè)假如用含有氨芐青霉素培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化和僅含環(huán)狀目標(biāo)基因細(xì)胞是不能區(qū)分，其原因是______________________________________________________________________________________________________；而且________和________細(xì)胞也是不能區(qū)分，其原因是_________________________________________________________________________________________________。在上述篩選基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目標(biāo)基因重組質(zhì)粒大腸桿菌單菌落，還需使用含有________固體培養(yǎng)基。

第22頁(yè)解析未轉(zhuǎn)化和僅含環(huán)狀目標(biāo)基因細(xì)胞都不能在含有氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，故這兩種不可區(qū)分。含有質(zhì)粒載體和含有插入了目標(biāo)基因重組質(zhì)粒細(xì)胞在含有氨芐青霉素培養(yǎng)基上都能生長(zhǎng)，這兩種也不可區(qū)分。因目標(biāo)基因插入位點(diǎn)在四環(huán)素抗性基因上，四環(huán)素抗性基因被破壞，在取得單個(gè)菌落中各挑取少許分別接種到含有四環(huán)素培養(yǎng)基上，不能生長(zhǎng)為要篩選菌落，即含有插入了目標(biāo)基因重組質(zhì)粒大腸桿菌。答案二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)含有質(zhì)粒載體含有重組質(zhì)粒二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)四環(huán)素

第23頁(yè)質(zhì)粒上抗生素抗性基因作用用作基因工程載體質(zhì)粒普通含有一些抗生素抗性基因(如青霉素抗性基因、四環(huán)素抗性基因等)，供重組DNA分子判定和篩選。通常情況下，受體細(xì)胞本身沒有抵抗相關(guān)抗生素能力，當(dāng)含有抗生素抗性基因質(zhì)粒與目標(biāo)基因構(gòu)建形成重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞后，抗生素抗性基因在受體細(xì)胞中表示，使受體細(xì)胞能夠抵抗對(duì)應(yīng)抗生素，從而在受體細(xì)胞培養(yǎng)基中加入該種抗生素，就能夠淘汰未導(dǎo)入重組DNA分子受體細(xì)胞，保留導(dǎo)入了重組DNA分子受體細(xì)胞。第24頁(yè)考點(diǎn)2基因工程原理、技術(shù)和應(yīng)用3.(·嘉興3月選考測(cè)試)絲素蛋白是家蠶一個(gè)分泌性復(fù)合蛋白，由絲素蛋白重鏈(FibH)、絲素蛋白輕鏈(Fibl)和P25糖蛋白組成。將Fibl基因?qū)氪竽c桿菌(不含質(zhì)粒A)并實(shí)現(xiàn)表示過程如圖所表示。第25頁(yè)(1)構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)要用到工具酶是___________________________________。(2)導(dǎo)入時(shí)，為了增加大腸桿菌通透性，慣用________處理大腸桿菌。(3)接種在含氨芐青霉素培養(yǎng)基上大腸桿菌，有不能形成菌落，原因是____________________________________________________________________。(4)影印接種就是用絲絨做成與平板大小相近印章，然后把長(zhǎng)有菌落母平板倒置在絲絨印章上，輕輕印一下，再把此印章在新培養(yǎng)基平板上輕輕印一下。經(jīng)培養(yǎng)后，比較新平板上長(zhǎng)出菌落與母平板上菌落位置，推測(cè)可能導(dǎo)入了重組質(zhì)粒菌落是________(用字母表示)。(5)目標(biāo)基因成功表示標(biāo)志是________________________________________。

第26頁(yè)解析重組質(zhì)粒構(gòu)建過程：通常先用相同限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目標(biāo)基因和質(zhì)粒，然后用DNA連接酶將目標(biāo)基因和質(zhì)粒連接。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌時(shí)，因成功率問題，大腸桿菌有四種可能：導(dǎo)入了重組質(zhì)粒(可在含氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但不能在含四環(huán)素培養(yǎng)基上生長(zhǎng))、導(dǎo)入了質(zhì)粒(既能在含氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，也能在含四環(huán)素培養(yǎng)基上生長(zhǎng))、導(dǎo)入了環(huán)狀目標(biāo)基因或未轉(zhuǎn)化(既不能在含氨芐青霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，也不能在含四環(huán)素培養(yǎng)基上生長(zhǎng))。答案(1)限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶(2)氯化鈣(3)沒有導(dǎo)入質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒(4)b、c

(5)大腸桿菌合成絲素蛋白輕鏈(Fibl)第27頁(yè)4.人血清蛋白(HSA)含有主要醫(yī)用價(jià)值。下列圖是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA(rHSA)兩條路徑。

(1)假如HSA基因序列未知，能夠采取________________方法獲取該目標(biāo)基因，為了使目標(biāo)基因能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制和穩(wěn)定保留，通常要先構(gòu)建________后才能導(dǎo)入宿主細(xì)胞。 (2)方框中“？”普通選取生物是________，為了提升Ⅱ過程導(dǎo)入成功率，通慣用________處理大腸桿菌。第28頁(yè)(3)人體合成初始HSA多肽，需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確空間結(jié)構(gòu)才能有活性，所以選擇________路徑(填Ⅰ或Ⅱ)獲取rHSA更有優(yōu)勢(shì)。(4)為了判定宿主細(xì)胞中是否產(chǎn)生rHSA，能夠用________方法來進(jìn)行檢驗(yàn)。A.檢驗(yàn)HSA基因是否導(dǎo)入B.檢驗(yàn)細(xì)胞中是否產(chǎn)生對(duì)應(yīng)mRNAC.抗原—抗體雜交D.檢測(cè)是否有標(biāo)識(shí)基因第29頁(yè)解析(1)若目標(biāo)基因序列已知，可用化學(xué)方法合成目標(biāo)基因或用PCR技術(shù)擴(kuò)增目標(biāo)基因；若目標(biāo)基因序列未知，可從基因文庫(kù)中獲取。目標(biāo)基因不能夠直接導(dǎo)入受體細(xì)胞，而是必須與載體構(gòu)建重組DNA分子后再導(dǎo)入，以使目標(biāo)基因能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制和穩(wěn)定保留。(2)假如受體細(xì)胞是植物細(xì)胞，普通選取農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入目標(biāo)基因；為增加大腸桿菌細(xì)胞壁通透性，利于目標(biāo)基因?qū)?，需用氯化鈣處理大腸桿菌。(3)大腸桿菌屬于原核生物，細(xì)胞內(nèi)缺乏內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體，無(wú)法對(duì)合成初始HSA多肽進(jìn)行加工。(4)rHSA是一個(gè)抗原蛋白，能夠利用對(duì)應(yīng)抗體進(jìn)行檢測(cè)。答案(1)從基因文庫(kù)中提取重組DNA分子(2)農(nóng)桿菌氯化鈣(3)Ⅰ

(4)C第30頁(yè)基因工程操作“五步曲”(1)獲取目標(biāo)基因若目標(biāo)基因序列已知，可用化學(xué)方法合成或用PCR擴(kuò)增；若目標(biāo)基因序列未知，可從基因文庫(kù)中分離。第31頁(yè)(2)形成重組DNA分子①通常是用相同限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目標(biāo)基因和載體DNA，形成相同粘性末端，然后用DNA連接酶將目標(biāo)基因和載體DNA連接形成重組DNA分子(以下列圖)。但在實(shí)際操作中，可形成3種不一樣連接物：目標(biāo)基因—載體連接物、載體—載體連接物、目標(biāo)基因—目標(biāo)基因連接物。第32頁(yè)②因?yàn)橥N限制性核酸內(nèi)切酶切割目標(biāo)基因和載體DNA所得粘性末端全部相同，在DNA連接酶作用下，目標(biāo)基因和載體DNA則可任意連接。為了使目標(biāo)基因與質(zhì)粒能定向連接，可使用兩種不一樣限制性核酸內(nèi)切酶切割目標(biāo)基因和質(zhì)粒(以下列圖)。第33頁(yè)(3)將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞受體細(xì)胞植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞或原生質(zhì)體微生物慣用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)CaCl2處理法轉(zhuǎn)化過程目標(biāo)基因插入Ti質(zhì)粒T－DNA上→導(dǎo)入農(nóng)桿菌→侵染植物細(xì)胞→目標(biāo)基因穩(wěn)定維持和表示將重組DNA分子提純→顯微注射入受體細(xì)胞→培養(yǎng)、發(fā)育→取得含有新性狀生物CaCl2處理增大細(xì)胞壁通透性→重組DNA分子與處理后受體細(xì)胞混合→重組DNA分子進(jìn)入受體細(xì)胞第34頁(yè)(4)篩選含有目標(biāo)基因受體細(xì)胞①篩選原因：并不是全部細(xì)胞都接納了重組DNA分子，還有部分細(xì)胞接納了載體—載體連接物、目標(biāo)基因—目標(biāo)基因連接物，甚至有細(xì)胞既沒有接納重組DNA分子，也沒有接納載體—載體連接物、目標(biāo)基因—目標(biāo)基因連接物。②篩選方法：主要是利用載體上抗生素抗性基因作用借助一定方法(如影印接種)用選擇培養(yǎng)基篩選。(5)目標(biāo)基因表示若目標(biāo)基因成功表示，則轉(zhuǎn)基因生物細(xì)胞中會(huì)產(chǎn)生對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)(可用抗原—抗體法檢測(cè))，轉(zhuǎn)基因生物會(huì)表現(xiàn)對(duì)應(yīng)性狀(如可接種病原體觀察轉(zhuǎn)基因生物抗性)。第35頁(yè)考點(diǎn)3結(jié)合植物克隆考查科學(xué)實(shí)踐能力5.下面是關(guān)于植物克隆問題。請(qǐng)回答：(1)為培育能高效吸收和富集重金屬鎘轉(zhuǎn)基因植物，將野外采得某植物幼葉消毒后，用酶混合液處理，取得了原生質(zhì)體。酶混合液中含有適宜濃度甘露醇，其作用是____________。(2)將目標(biāo)基因?qū)氲皆|(zhì)體，經(jīng)培養(yǎng)形成愈傷組織，再經(jīng)過________得到分散胚性細(xì)胞，發(fā)育成________，生長(zhǎng)發(fā)育后取得轉(zhuǎn)基因植株。

第36頁(yè)(3)愈傷組織繼代次數(shù)過多會(huì)喪失細(xì)胞全能性表示能力，以下原因錯(cuò)誤是________。A.愈傷組織發(fā)生染色體畸變B.愈傷組織不能分散成單細(xì)胞C.愈傷組織中激素平衡發(fā)生改變D.愈傷組織對(duì)外源激素敏感性發(fā)生改變第37頁(yè)解析(1)甘露醇能夠維持溶液滲透壓，以預(yù)防失去細(xì)胞壁原生質(zhì)體吸水脹破。(2)將愈傷組織放在搖床上，經(jīng)過液體懸浮培養(yǎng)能夠得到分散單細(xì)胞，這些單細(xì)胞含有細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小、細(xì)胞核大等胚性細(xì)胞特征，胚性細(xì)胞發(fā)育成胚狀體，深入形成植株。(3)在長(zhǎng)久培養(yǎng)過程中，愈傷組織可能發(fā)生染色體畸變、內(nèi)部激素平衡改變、對(duì)外源激素敏感性改變等改變，而喪失細(xì)胞全能性表示能力。答案(1)維持滲透壓(2)液體懸浮培養(yǎng)胚狀體(3)B第38頁(yè)6.植物葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體分離和培養(yǎng)主要過程可用下列圖所表示圖解簡(jiǎn)單表示，請(qǐng)據(jù)圖回答以下問題：

(1)培育胚狀體利用了________這一項(xiàng)生物技術(shù)，胚狀體再繼續(xù)培養(yǎng)，則可培育出完整植株，這表達(dá)了植物細(xì)胞________。 (2)要取得植物葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體，需要在________溶液環(huán)境下，用________酶和________酶去除細(xì)胞壁。

第39頁(yè)(3)培養(yǎng)基中除了含有一定營(yíng)養(yǎng)外，還必須含有________等植物激素，還需要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行嚴(yán)格________。(4)假如愈傷組織是三七葉肉細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生，為了取得三七次生代謝產(chǎn)物，則只需要培養(yǎng)到________。假如愈傷組織是棉花葉肉細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生，經(jīng)過基因工程要獲取抗蟲棉，重組DNA分子導(dǎo)入棉花愈傷組織細(xì)胞慣用方法是________法。(5)從葉片葉肉細(xì)胞到取得胚狀體過程中，必須要經(jīng)過________(不定項(xiàng)選擇：A.有絲分裂B.減數(shù)分裂C.原生質(zhì)體融合D.脫分化E.再分化)。第40頁(yè)解析(1)離體植物細(xì)胞經(jīng)過脫分化形成愈傷組織，經(jīng)過再分化形成含有根和芽胚狀體，再經(jīng)過細(xì)胞分裂、分化發(fā)育成一個(gè)完整植株。該技術(shù)稱為植物組織培養(yǎng)，其原理為植物細(xì)胞全能性。(2)制備葉片原生質(zhì)體酶混合液中，普通含較高濃度甘露醇，其目標(biāo)是防止制備原生質(zhì)體吸水脹破；依據(jù)酶專一性，去除植物細(xì)胞壁需用纖維素酶和果膠酶。(3)培養(yǎng)基成份包含水、無(wú)機(jī)鹽、維生素、氨基酸、蔗糖、植物激素(生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等)等；培養(yǎng)基要求進(jìn)行嚴(yán)格滅菌。(4)三七細(xì)胞產(chǎn)物為細(xì)胞代謝產(chǎn)物，將三七葉肉細(xì)胞培養(yǎng)到愈傷組織即可；目標(biāo)基因?qū)胫参锛?xì)胞慣用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。(5)離體葉肉細(xì)胞培養(yǎng)到胚狀體過程中必須經(jīng)過脫分化和有絲分裂形成愈傷組織，再分化和有絲分裂形成胚狀體。答案(1)植物組織培養(yǎng)全能性(2)0.5～0.6mol/L甘露醇纖維素果膠(3)細(xì)胞分裂素、生長(zhǎng)素滅菌(4)愈傷組織農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化(5)ADE第41頁(yè)植物細(xì)胞培養(yǎng)、器官培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)統(tǒng)稱為植物組織培養(yǎng)，最終都能得到完整植株，但因?yàn)榕囵B(yǎng)目標(biāo)不一樣，有時(shí)需對(duì)愈傷組織進(jìn)行特殊處理。它們之間關(guān)系如圖所表示：第42頁(yè)考點(diǎn)4動(dòng)物克隆7.(·浙江“超級(jí)全能生”聯(lián)考)如圖表示動(dòng)物細(xì)胞克隆和制備單克隆抗體相關(guān)過程，請(qǐng)回答相關(guān)問題：第43頁(yè)(1)過程①常應(yīng)用________方法導(dǎo)入重組誘導(dǎo)基因后得到干細(xì)胞；部分干細(xì)胞經(jīng)過誘導(dǎo)可分化成全身不一樣組織或器官，說明這些細(xì)胞含有________性。(2)該過程利用了甲細(xì)胞含有________能力，甲和乙細(xì)胞可經(jīng)過生物誘導(dǎo)劑________作用形成丙細(xì)胞。取一個(gè)丙細(xì)胞，放在含大量失去________小鼠成纖維細(xì)胞特定培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，最終產(chǎn)生大量細(xì)胞群，這種方法為________法。(3)以下關(guān)于經(jīng)③和④過程得到單克隆抗體敘述，錯(cuò)誤是(

)A.該過程應(yīng)用了細(xì)胞