HJ 1049-2019 水質(zhì) 4種硝基酚類化合物的測定 液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法（正式版）

20192019-10-24發(fā)布中華人民共和國國家環(huán)境保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)水質(zhì)4種硝基酚類化合物的測定液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法—Liquidchromatography-tri追追2020-04-24實(shí)施 1適用范圍 2規(guī)范性引用文件 3方法原理 4干擾和消除 5試劑和材料 27樣品 28分析步驟 39結(jié)果計(jì)算與表示 4 5 6 6附錄A(規(guī)范性附錄)方法的檢出限和測定下限 7附錄B(資料性附錄)質(zhì)譜參考條件 8附錄C(資料性附錄)方法的精密度和準(zhǔn)確度 9為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護(hù)法》和《中華人民共和國水污染防治法》,保護(hù)生態(tài)環(huán)境，保障人體健康，規(guī)范水中硝基酚類化合物的測定方法，制定本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水中4種硝基酚類化合物的液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄，附錄B和附錄C為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。本標(biāo)準(zhǔn)由生態(tài)環(huán)境部生態(tài)環(huán)境監(jiān)測司、法規(guī)與標(biāo)準(zhǔn)司組織制訂。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：四川省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測總站。本標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證單位：重慶市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心、廣元市環(huán)境監(jiān)測中心站、攀枝花市環(huán)境監(jiān)測中心站、瀘州市環(huán)境監(jiān)測中心站、宜賓市環(huán)境監(jiān)測中心站和南充市環(huán)境監(jiān)測中心站。本標(biāo)準(zhǔn)生態(tài)環(huán)境部2019年10月24日批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)自2020年4月24日起實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由生態(tài)環(huán)境部解釋。1水質(zhì)4種硝基酚類化合物的測定液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法警告：實(shí)驗(yàn)中使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和有機(jī)溶劑為有毒有害物質(zhì)，試劑配制和樣品前處理過程應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行；操作時(shí)應(yīng)按要求佩戴防護(hù)器具，避免接觸皮膚和衣物。1適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定水中4種硝基酚類化合物的液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水中2,6-二硝基酚、2,4-二硝基酚、4-硝基酚和2,4,6-三硝基酚等4種硝基酚類化合物的測定。當(dāng)進(jìn)樣體積為10μl時(shí)，4種硝基酚類化合物的方法檢出限為0.4～0.6μg/L,測定下限為1.6~2.4μg/L。詳見附錄A。2規(guī)范性引用文件本標(biāo)準(zhǔn)引用了下列文件或其中的條款。凡是未注明日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ/T164地下水環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范3方法原理樣品經(jīng)過濾或凈化后直接進(jìn)樣，用液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜分離檢測硝基酚類化合物。根據(jù)保留時(shí)間和特征離子定性，內(nèi)標(biāo)法定量。4干擾和消除4.1當(dāng)樣品中存在基質(zhì)干擾時(shí)，可通過優(yōu)化色譜條件、稀釋樣品、減少進(jìn)樣體積以及對樣品進(jìn)行預(yù)處理等方式降低或消除。4.2當(dāng)樣品中存在同分異構(gòu)體干擾測定時(shí)，可通過改變色譜條件提高分離度或選擇不同的二級質(zhì)譜子離子消除干擾。4.3當(dāng)樣品中共存有機(jī)物干擾測定時(shí)，可用正己烷-二氯甲烷混合溶液萃取去除部分干擾，取水相進(jìn)行分析。5試劑和材料除非另有說明，分析時(shí)均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實(shí)驗(yàn)用水為新制備的不含目標(biāo)化合物的純水。25.1甲醇(CH?OH):液相色譜純。5.2二氯甲烷(CH?Cl?):液相色譜純。5.3正己烷(C?H??):液相色譜純。5.4甲酸(HCOOH):液相色譜純。5.5甲酸銨(HCOONH?):液相色譜純。5.6氨水：p(NH?H?O)=0.91g/ml,5.7甲酸銨-甲酸緩沖液：c(HCOONH?)=0.01mol/L,pH=4。準(zhǔn)確稱取0.315g甲酸銨(5.5)溶于適量水中，溶解后轉(zhuǎn)移至500ml容量瓶中，用水稀釋定容至標(biāo)線，混勻，再加約70μl甲酸(5.4)調(diào)節(jié)其pH至4。5.8正己烷-二氯甲烷混合溶液：1+2。用正己烷(5.3)和二氯甲烷(5.2)按1:2的體積比混合。5.9硝基酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)貯備液：p=100mg/L?？捎脴?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度大于99.0%,用甲醇(5.1)溶解，在-10℃以下冷凍、避光保存。也可直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，參照制造商的產(chǎn)品說明書保存。5.10硝基酚類化合物混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：p=5.00mg/L(參考濃度)。移取適量硝基酚類化合物標(biāo)準(zhǔn)貯備液(5.9),用甲醇(5.1)稀釋，在-10℃以下冷凍、避光保存，可保存3個(gè)月。5.11內(nèi)標(biāo)貯備液：p=5000mg/L。內(nèi)標(biāo)物為2,4-二硝基苯酚-d?,可用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度大于98.0%,用甲醇(5.1)溶解，在-10℃以下冷凍、避光保存。也可直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。5.12內(nèi)標(biāo)使用液：p=200μg/L(參考濃度)。將內(nèi)標(biāo)貯備液(5.11)按需要用甲醇(5.1)稀釋，在-10℃以下冷凍、避光保存，可保存3個(gè)月。5.13濾膜：0.22μm聚四氟乙烯濾膜。5.14氮?dú)猓杭兌取?9.99%。6儀器和設(shè)備6.1液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI),具備梯度洗脫和多反應(yīng)監(jiān)測功能。6.2色譜柱：填料粒徑為2.2μm,柱長75mm,內(nèi)徑3.0mm的Cig反相液相色譜柱或其他性能相近的色譜柱。6.3離心機(jī)：最高轉(zhuǎn)速不低于4000r/min。6.4具塞離心管：10ml。6.5樣品瓶：250ml磨口具塞棕色玻璃瓶。6.6微量注射器或移液器：10μl、50μl、1006.7一般實(shí)驗(yàn)室常用儀器和設(shè)備。7.1樣品采集和保存按照HJ/T91和HJ/T164的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行樣品的采集。樣品采集時(shí)應(yīng)充滿樣品瓶(6.5),不留空隙。若采集后樣品pH不在7~9,用氨水(5.6)或甲酸(5.4)調(diào)節(jié)其pH至7~9,在4℃以下冷藏、避光保存，7d內(nèi)完成分析37.2試樣的制備清潔樣品可過濾后直接進(jìn)樣分析。樣品(7.1)經(jīng)濾膜(5.13)過濾，棄去至少1ml初濾液后，移取1.0ml過濾后的樣品于棕色進(jìn)樣瓶中，加入10.0μl內(nèi)標(biāo)使用液(5.12),混勻待測?；w復(fù)雜的樣品經(jīng)凈化后直接進(jìn)樣分析。取5.0ml樣品(7.1)置于具塞離心管(6.4)中，加入1ml正己烷-二氯甲烷混合溶液(5.8),振蕩5min,以4000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min。吸取3ml上層水相溶液，用濾膜(5.13)過濾，然后移取1.0ml濾液于棕色進(jìn)樣瓶中，加入10.0μl內(nèi)標(biāo)使用液(5.12),混勻待測。7.3空白試樣的制備用實(shí)驗(yàn)用水代替樣品，按照與試樣的制備(7.2)相同的步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室空白試樣的制備。8分析步驟8.1儀器參考條件8.1.1液相色譜參考條件流動(dòng)相A:甲酸銨-甲酸緩沖液(5.7),流動(dòng)相B:甲醇(5.1),梯度洗脫程序見表1;流速：0.2ml/min;柱溫：30℃;進(jìn)樣體積：10μl。表1液相色譜流動(dòng)相梯度洗脫程序時(shí)間/min8.1.2質(zhì)譜參考條件離子源：電噴霧離子源(ESI),負(fù)離子模式。監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)。其余條件參見附錄B。8.1.3儀器調(diào)諧不同廠家的儀器調(diào)諧參數(shù)存在一定差異，應(yīng)按照儀器使用說明書在規(guī)定時(shí)間和頻次內(nèi)對質(zhì)譜儀進(jìn)行儀器質(zhì)量數(shù)和分辨率的校正，以確保儀器處于最佳測試狀態(tài)。8.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立移取適量的硝基酚類化合物混合標(biāo)準(zhǔn)使用液(5.10),用水稀釋，配制至少5個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液中硝基酚類化合物的質(zhì)量濃度分別為2.00μg/L、5.00μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L(此為參考質(zhì)量濃度),移取1.0ml標(biāo)準(zhǔn)系列溶液于棕色進(jìn)樣瓶中，加入10.0μl內(nèi)標(biāo)使用液(5.12),混勻待測。按照儀器參考條件(8.1),由低質(zhì)量濃度到高質(zhì)量濃度依次對標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行測定。以目標(biāo)化合4在本標(biāo)準(zhǔn)推薦的儀器參考條件下，目標(biāo)化合物的總離子流色譜圖見圖1(4種硝基酚類化合物的質(zhì)圖14種硝基酚類化合物和內(nèi)標(biāo)物的總離子流色譜圖按照與標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立(8.2.1)相同的儀器條件進(jìn)行試樣(7.2)的測定。按照與試樣測定(8.3)相同的儀器條件進(jìn)行空白試樣(7.3)的測定。選擇1個(gè)母離子和2個(gè)子離子對目標(biāo)化合物進(jìn)行監(jiān)測。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，試樣中目標(biāo)化合物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品中該目標(biāo)化合物的保留時(shí)間的相對偏差的絕對值應(yīng)小于2.5%;且對試樣中目標(biāo)化合物定性子離子的相對豐度(Kam)與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng)的定性子離子的相對豐度(Kga)進(jìn)行比較，偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在對應(yīng)的目標(biāo)化合物。式中：Kam—樣品中目標(biāo)化合物定性子離子的相對豐度，%;5式中：Ka——標(biāo)準(zhǔn)樣品中目標(biāo)化合物定性子離子的相對豐度，%;9.2結(jié)果計(jì)算P?=Pu×D6次重復(fù)測定：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.1%～9.5%和1.0%～10%;實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.8%~8.2%和3.3%～4.2%;重復(fù)性限分別為0.7～0.8μg/L和2.3~3.3μg/L;再現(xiàn)性限分別為0.9~次重復(fù)測定：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.3%～14%和2.4%～15%;實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為6次重復(fù)測定：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.4%～16%和2.0%～13%;實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為9.7%~20%和5.3%～12%;重復(fù)性限分別為0.9~1.3μg/L和2.9~4.8μgL;再現(xiàn)性限分別為1.7~6方法精密度匯總數(shù)據(jù)參見附錄C。6家實(shí)驗(yàn)室對硝基酚類化合物的加標(biāo)質(zhì)量濃度為5.00μg/L和20.0μgL的地表水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)加標(biāo)分析測定：加標(biāo)回收率范圍分別為77.1%～119%和77.0%～116%,加標(biāo)回收率最終值分別為94.1%±28.7%～97.5%±26.0%和93.5%±18.3%～101%±21.0%。6家實(shí)驗(yàn)室對硝基酚類化合物的加標(biāo)質(zhì)量濃度為5.00μg/L和20.0μgL的工業(yè)廢水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)加標(biāo)分析測定：加標(biāo)回收率范圍分別為72.6%～109%和75.0%～112%,加標(biāo)回收率最終值分別為91.8%±19.7%～95.5%±22.5%和98.7%±14.5%～104%±10.2%。方法準(zhǔn)確度匯總數(shù)據(jù)參見附錄C。11質(zhì)量保證和質(zhì)量控制每20個(gè)樣品或每批次(≤20個(gè)樣品/批)至少測定一個(gè)實(shí)驗(yàn)室空白，其測定結(jié)果應(yīng)低于方法檢出限。每批樣品應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)應(yīng)≥0.995。每20個(gè)樣品或每批次(≤20個(gè)樣品/批)應(yīng)測定一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線中間濃度點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)溶液，其測定結(jié)果與該點(diǎn)濃度的相對誤差應(yīng)在±20%之內(nèi)。11.3平行樣每20個(gè)樣品或每批次(≤20個(gè)樣品/批)至少測定一個(gè)平行樣，平行樣的相對偏差應(yīng)≤25%。每20個(gè)樣品或每批次(≤20個(gè)樣品/批)至少測定一個(gè)基體加標(biāo)樣，基體加標(biāo)回收率為70%～130%。實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的廢物應(yīng)集中收集，分類保管，