殼聚糖含量測(cè)定 高效液相色譜法征求意見稿編制說明

一、任務(wù)來源本國家標(biāo)準(zhǔn)的制定任務(wù)列入國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)《國標(biāo)委綜合[2018]41號(hào)》，項(xiàng)目編號(hào)“20180923-T-424”。本項(xiàng)任務(wù)由中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口，定于2020年完成。本標(biāo)準(zhǔn)起草工作組由中國科學(xué)院海岸帶研究所等單位共同組成。二、標(biāo)準(zhǔn)制定目的及意義三、標(biāo)準(zhǔn)制定原則和依據(jù)四、主要工作過程五、主要技術(shù)內(nèi)容1、原理殼聚糖原料乙?；玫郊讱に?，分別降解殼聚糖原料和合成后得到的甲殼素，得到含有氨基葡萄糖鹽酸鹽的樣品溶液，采用高效液相色譜法檢測(cè)氨基葡萄糖鹽酸鹽含量，分別計(jì)算殼聚糖純度（X）和甲殼素純度（Y），Y與X比值得到比例系數(shù)，通過比例系數(shù)計(jì)算殼聚糖含量。2、殼聚糖脫乙酰度測(cè)定準(zhǔn)確稱取殼聚糖樣品0.2g于小燒杯中，加入30ml標(biāo)定的鹽酸溶液，并置于恒溫磁力攪拌器上攪拌至溶解，加入2~3滴甲基橙-亞甲基藍(lán)指示劑，用標(biāo)定的氫氧化鈉溶液滴定樣品溶液中過量的鹽酸，當(dāng)指示劑顏色由紫色變?yōu)榈G色，停止滴定，記錄消耗的氫氧化鈉溶液體積，計(jì)算殼聚糖的脫乙酰度。脫乙酰度測(cè)定結(jié)果如下表1所示。表1殼聚糖的脫乙酰度標(biāo)示脫乙酰度%實(shí)際測(cè)定脫乙酰度%00.4080.0082.4285.0086.6088.4387.6695.0094.7396.0598.342、樣品溶液中氨基葡萄糖鹽酸鹽含量測(cè)定以峰面積積分值mAu為縱坐標(biāo)Y，以氨基葡萄糖鹽酸鹽濃度Ce（mg/mL）為橫坐標(biāo)X作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程為Y=12358.15X-2755.56，相關(guān)系數(shù)R2為0.9988。所得氨基葡萄糖鹽酸鹽線性方程如圖1所示。從圖中可以看出，當(dāng)氨基葡萄糖鹽酸鹽在1.0~3.5mg/mL濃度范圍內(nèi)時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)曲線呈現(xiàn)較好的相關(guān)性。圖1氨基葡萄糖鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線3、殼聚糖含量測(cè)定在相同條件測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，如果樣品溶液中檢出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中的某種組分峰的保留時(shí)間一致（變化范圍在±2.5%），則認(rèn)為該色譜峰為目標(biāo)物質(zhì)出峰。標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定色譜圖如下圖2所示，樣品溶液測(cè)定色譜圖如下圖3所示。圖2標(biāo)準(zhǔn)樣品HPLC圖圖3殼聚糖樣品HPLC圖依據(jù)測(cè)定的氨基葡萄糖鹽酸鹽的濃度，分別計(jì)算殼聚糖的純度（X）和甲殼素的純度（Y），得到Y(jié)/X比例系數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表2所示。從表中可以看出脫乙酰度越大的殼聚糖，直接降解成單糖的比例越低，計(jì)算得到的殼聚糖含量值與實(shí)際值相差越大。將殼聚糖合成甲殼素后進(jìn)行降解，降解成單糖接近完全，即直接降解殼聚糖得到的純度（X）乘以相應(yīng)比例系數(shù)后為殼聚糖的實(shí)際含量。表2殼聚糖含量測(cè)定結(jié)果不同脫乙酰度殼聚糖%殼聚糖（CTS）降解百分比%（X）合成甲殼素（CT）后降解百分比%（Y）比例系數(shù)Y/X099.899.8182.4281.599.41.2286.6079.899.61.2587.6670.899.41.4194.7362.599.81.5998.3453.499.81.87由于目前多數(shù)企業(yè)使用高脫乙酰度的殼聚糖，因此此系數(shù)重點(diǎn)適用于脫乙酰度80%以上的殼聚糖含量測(cè)定。此系數(shù)僅適用于高純度殼聚糖含量檢測(cè)。六、驗(yàn)證情況及結(jié)果分析七、與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性國家標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系本標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)行法律、法規(guī)和其他標(biāo)準(zhǔn)沒有沖突。八、標(biāo)準(zhǔn)屬性建議九、貫徹國家標(biāo)準(zhǔn)的要求和措施建議十、其他應(yīng)予說明的事項(xiàng)《殼聚糖含量測(cè)定高效液相色譜法》國家標(biāo)準(zhǔn)編制說