動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)上課

植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？這些技術(shù)的理論基礎(chǔ)是什么？植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞的全能性動(dòng)物細(xì)胞全能性如何？12動(dòng)物細(xì)胞工程3動(dòng)物細(xì)胞工程通常采用的技術(shù)手段動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞核移植是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。41、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念是什么？該技術(shù)實(shí)施的原理是什么？

概念：從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。

原理：細(xì)胞增殖（有絲分裂）。5注意關(guān)鍵詞:

細(xì)胞貼壁接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)67動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁：

懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無(wú)毒、易于貼附。細(xì)胞的接觸抑制：

當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。

8細(xì)胞貼壁過(guò)程9接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過(guò)程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特性部分細(xì)胞突變，獲得不死性，向癌細(xì)胞方向發(fā)展，糖蛋白減少。10動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無(wú)限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液原代培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎過(guò)程：細(xì)胞株細(xì)胞系遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變118、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？9、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能一直傳代下去嗎？10、有些為何能一直傳下去？11、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是為了得到這些細(xì)胞嗎？在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)不都能發(fā)生突變，朝著癌細(xì)胞方向發(fā)展不全是思考題1212、人類一般保存的是哪類細(xì)胞呢？為什么？保存10代以內(nèi)的細(xì)胞，因?yàn)?0－50部分細(xì)胞的細(xì)胞核型可能發(fā)生變化，有少部分還發(fā)生突變向癌細(xì)胞方向發(fā)展思考題13、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動(dòng)物個(gè)體13

細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。解答概念14

多細(xì)胞動(dòng)物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的內(nèi)環(huán)境的知識(shí)，思考并討論以下問(wèn)題：討論1.體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提供哪些物質(zhì)2.體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？充足的營(yíng)養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境。15無(wú)菌操作培養(yǎng)箱161、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清、血漿等。）3、溫度和PH

36.5+0.5度；PH為7.2-7.4。4、氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件？17細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體或組織培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目試一試18大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）培養(yǎng)作為基因工程中的受體細(xì)胞培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以用于檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)應(yīng)用：19

動(dòng)物細(xì)胞全能性特點(diǎn)？分化潛能變窄：隨著細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能變窄，這是指整體細(xì)胞而言。細(xì)胞核仍具有全能性：細(xì)胞核，它含有保持物種遺傳性所需的全套基因，而且并沒(méi)有因細(xì)胞分化而丟失基因，因此高度分化細(xì)胞的細(xì)胞核仍具有全能性想一想20

根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞核仍具有全能性的特點(diǎn),怎樣將動(dòng)物細(xì)胞的全能性表達(dá)?

利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)21動(dòng)物核移植：

將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的

，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的

中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。

用核移植的方法得到的動(dòng)物。克隆動(dòng)物：細(xì)胞核卵母細(xì)胞22胚胎移植細(xì)胞核移植23供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞（MⅡ中期：供質(zhì)）去核無(wú)核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基礎(chǔ)相同的犢牛歸納:共分成兩大階段：核移植和胚胎移植24(二)、體細(xì)胞核移植的過(guò)程：思考：1.核移植的受體細(xì)胞是什么？處在什么時(shí)期？用此細(xì)胞作為受體細(xì)胞有什么好處？2.通過(guò)什么手段激活受體細(xì)胞，構(gòu)建重組胚胎？MⅡ中期卵母細(xì)胞誘導(dǎo)方法：物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞，完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。卵母細(xì)胞體積大，便于操作；含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，提供早期胚胎發(fā)育所需的營(yíng)養(yǎng)；含有激活細(xì)胞核體現(xiàn)全能性的物質(zhì)。251.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？

為使核移植的胚胎或動(dòng)物的遺傳物質(zhì)全部來(lái)自有重要利用價(jià)值的動(dòng)物提供的體細(xì)胞，在供體細(xì)胞的細(xì)胞核移至受體細(xì)胞之前，必須將受體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐?6卵細(xì)胞C母綿羊子宮Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植胚胎移植早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵細(xì)胞細(xì)胞拆合技術(shù)妊娠多莉羊的培育過(guò)程無(wú)性生殖272.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景28克隆動(dòng)物的研究意義1.克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白