微生物鑒定與藥敏分析系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范

JJF2034—20231微生物鑒定與藥敏分析系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范1范圍本規(guī)范適用于采用光學(xué)原理對(duì)細(xì)菌、真菌等微生物進(jìn)行鑒定和抗菌藥物敏感試驗(yàn)的微生物鑒定與藥敏分析系統(tǒng)的校準(zhǔn),不適用于微生物質(zhì)譜和核酸序列鑒定系統(tǒng)的校準(zhǔn)。2引用文件本規(guī)范引用了下列文件:JJF1101—2019環(huán)境試驗(yàn)設(shè)備溫度、濕度參數(shù)校準(zhǔn)規(guī)范JJF1287—2011澄明度檢測(cè)儀校準(zhǔn)規(guī)范YY/T1531—2017細(xì)菌生化鑒定系統(tǒng)CNAS-GL028臨床微生物檢驗(yàn)程序驗(yàn)證指南凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。3術(shù)語(yǔ)和計(jì)量單位JJF1101—2019、JJF1287—2011、YY/T1531—2017、CNAS-GL028、CLSIM50-A、CLSIM52和CLSIM100中界定的及以下術(shù)語(yǔ)和定義適用于本規(guī)范。3.1分類符合categoryagreement;CA折點(diǎn)試驗(yàn)或最小抑菌濃度試驗(yàn)與參考方法之間敏感、中介、劑量依賴性敏感和耐藥結(jié)果的一致性。注:該概念的數(shù)學(xué)表達(dá)公式:NCA·100/N,其中:NCA為與參考或比較方法類別結(jié)果相同的敏感、中介、劑量依賴性敏感和耐藥類別的微生物分離株的數(shù)量;N為測(cè)試的微生物分離株的總數(shù)。[來(lái)源:CLSIM52,1.4.2]4概述微生物鑒定與藥敏分析系統(tǒng)(以下簡(jiǎn)稱分析系統(tǒng))是可同時(shí)做細(xì)菌、真菌等微生物鑒定和藥敏試驗(yàn)的儀器,其采用傳統(tǒng)的光電比色法和快速熒光法進(jìn)行細(xì)菌、真菌等微生物鑒定,采用光電比濁法和熒光測(cè)定法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。分析系統(tǒng)工作時(shí),在恒溫孵育環(huán)境下,由光路部分發(fā)出的單色光掃描每塊試劑板上的分析物,通過光電比色、光電比濁或熒光測(cè)定細(xì)菌因分解或利用底物導(dǎo)致的顏色、濁度或熒光強(qiáng)度的變化,通過讀數(shù)器將吸光度或熒光強(qiáng)度變化值轉(zhuǎn)換成電信號(hào),再由微機(jī)根據(jù)菌種資料庫(kù)和分類符合等分析計(jì)算出鑒定結(jié)果與藥敏結(jié)果。分析系統(tǒng)根據(jù)自動(dòng)化程度分為半自動(dòng)分析系統(tǒng)和全自動(dòng)分析系統(tǒng)。分析系統(tǒng)通常主要由菌液接種和封口裝置、光電讀數(shù)器、恒溫孵箱、微機(jī)和試劑板等組成。JJF2034—202325計(jì)量特性分析系統(tǒng)主要計(jì)量特性指標(biāo)見表1。表1分析系統(tǒng)的主要計(jì)量特性指標(biāo)計(jì)量特性計(jì)量特性指標(biāo)溫度示值誤差±1.0℃溫度波動(dòng)度±1.0℃溫度均勻度≤2.0℃光源照度均勻度≤30%光源照度精密度≤10%測(cè)量準(zhǔn)確度鑒定試驗(yàn)符合性100%藥敏試驗(yàn)一致性100%注:以上技術(shù)指標(biāo)不適用于合格性判別,僅供參考。6校準(zhǔn)條件6.1環(huán)境條件6.1.1環(huán)境溫度:(10~30)℃。6.1.2相對(duì)濕度:≤90%。6.1.3儀器應(yīng)遠(yuǎn)離振動(dòng)、電磁干擾。注:上述環(huán)境條件與制造商的產(chǎn)品規(guī)定不一致時(shí),以產(chǎn)品規(guī)定的環(huán)境條件為設(shè)備適用條件。6.2測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)及其他設(shè)備6.2.1分析系統(tǒng)校準(zhǔn)裝置溫度測(cè)量范圍滿足(20~50)℃,最大允許誤差為±0.1℃;光源照度測(cè)量范圍滿足(0~10000)lx,最大允許誤差為±5.0%。注:分析系統(tǒng)校準(zhǔn)裝置由校準(zhǔn)組件、數(shù)據(jù)接收終端和適配的系列套板組成,校準(zhǔn)組件由若干溫度光學(xué)校準(zhǔn)單元組成,溫度光學(xué)校準(zhǔn)單元包括偶聯(lián)的一個(gè)溫度傳感器和一個(gè)光學(xué)傳感器,可將監(jiān)測(cè)的光學(xué)和溫度參數(shù)無(wú)線傳輸給數(shù)據(jù)接收終端。6.2.2標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)選擇可溯源到標(biāo)準(zhǔn)菌株庫(kù)的標(biāo)準(zhǔn)菌株(應(yīng)包括代表性的大腸埃希氏菌或金黃色葡萄球;若不適用,可選擇儀器數(shù)據(jù)庫(kù)的其他標(biāo)準(zhǔn)菌株)。6.2.3試劑板校準(zhǔn)過程中需要的配套試劑板,應(yīng)按照說明書要求的條件儲(chǔ)存并在有效期內(nèi)使用。JJF2034—202337校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法計(jì)量特性校準(zhǔn)過程中,應(yīng)根據(jù)分析系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)組成,將分析系統(tǒng)校準(zhǔn)裝置置于分析系統(tǒng)(根據(jù)不同廠商試劑板的結(jié)構(gòu)尺寸選擇對(duì)應(yīng)的套板)內(nèi)塔、架或盒放置試劑板的位置,選取具有代表性的位置孔(如分析系統(tǒng)內(nèi)塔、架或盒放置試劑板的中心孔和四周選取至少5個(gè)孔位),同時(shí)應(yīng)根據(jù)分析系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)組成對(duì)分析系統(tǒng)內(nèi)不同的塔、架或盒分別進(jìn)行校準(zhǔn),相應(yīng)的校準(zhǔn)結(jié)果應(yīng)分別報(bào)告。7.1溫度示值誤差、溫度波動(dòng)度和溫度均勻度將分析系統(tǒng)開機(jī)進(jìn)行預(yù)熱,設(shè)定并達(dá)到目標(biāo)溫度,穩(wěn)定2h后,所有測(cè)試孔的溫度每2min記錄一次,在30min內(nèi)共測(cè)量16次,計(jì)算設(shè)定溫度值與中心位置孔(分析系統(tǒng)內(nèi)塔、架或盒放置試劑板的幾何中心位置孔或最接近幾何中心的位置孔)16次測(cè)量結(jié)果的平均值之差為溫度示值誤差的測(cè)量結(jié)果,按公式(1)計(jì)算;校準(zhǔn)裝置各測(cè)量孔實(shí)測(cè)最高溫度與最低溫度之差的一半,冠以“±”號(hào),取全部測(cè)量位置變化量的最大值為溫度波動(dòng)度的測(cè)量結(jié)果,按公式(2)計(jì)算;在30min內(nèi)每次測(cè)試不同位置孔最高溫度與最低溫度之差的算術(shù)平均值為溫度均勻度的測(cè)量結(jié)果,按公式(3)計(jì)算。(1)(1)(2)(3)式中:ΔTd—溫度示值誤差,℃;Td—分析系統(tǒng)溫度顯示值,℃;To—校準(zhǔn)裝置測(cè)得的中心位置溫度平均值,℃;ΔTf—溫度波動(dòng)度,℃;Tjmax—校準(zhǔn)裝置測(cè)量孔j在16次測(cè)量中的最高溫度,℃;Tjmin—校準(zhǔn)裝置測(cè)量孔j在16次測(cè)量中的最低溫度,℃;ΔTu—溫度均勻度,℃;n—測(cè)量次數(shù);Timax—各校準(zhǔn)位置孔在第i次測(cè)得的最高溫度,℃;Timin—各校準(zhǔn)位置孔在第i次測(cè)得的最低溫度,℃。7.2光源照度均勻度和光源照度精密度待光源照度穩(wěn)定后,每個(gè)位置孔分別測(cè)量6次,每個(gè)位置孔取6次測(cè)量結(jié)果平均值作為該位置孔光源照度,按公式(4)計(jì)算光源照度均勻度;按公式(5)計(jì)算每個(gè)位置孔的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,取相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差最大值作為分析系統(tǒng)光源照度精密度的表征?！?00%(4)JJF2034—20234式中:N—光源照度均勻度,%;Emax—放置試劑板位置各位置孔中光源照度最大值,lx;Emin—放置試劑板位置各位置孔中光源照度最小值,lx;RSDEi—光源照度精密度(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差),%;E—所測(cè)孔位置光源照度的平均值,lx;Ei—第i個(gè)孔位置的光源照度,lx;n—第i個(gè)孔位置測(cè)試次數(shù)。7.3測(cè)量準(zhǔn)確度分析系統(tǒng)開機(jī)運(yùn)行穩(wěn)定后,選擇合適的試劑板,根據(jù)其鑒定范圍或底物種類,選取大腸埃希氏菌或金黃色葡萄球菌或其他適用的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行測(cè)量準(zhǔn)確度試驗(yàn)。以分析系統(tǒng)鑒定結(jié)果與已知標(biāo)準(zhǔn)菌株的符合性或藥敏結(jié)果與已知標(biāo)準(zhǔn)菌株參考方法結(jié)果的一致性作為分析系統(tǒng)測(cè)量準(zhǔn)確度的表征。注:1在微生物學(xué)中,測(cè)量準(zhǔn)確度對(duì)應(yīng)微生物鑒定系統(tǒng)正確鑒定被測(cè)生物的能力,在各項(xiàng)生化或生理反應(yīng)中,鑒定分析系統(tǒng)結(jié)果與適當(dāng)?shù)膮⒖挤椒▽?duì)同一分離株產(chǎn)生的鑒定結(jié)果的一致性。2對(duì)于藥敏試驗(yàn),測(cè)量準(zhǔn)確度對(duì)應(yīng)藥敏分析系統(tǒng)結(jié)果與使用適當(dāng)?shù)膮⒖挤椒橥环蛛x株產(chǎn)生的結(jié)果的一致性。8校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)8.1校準(zhǔn)結(jié)果處理經(jīng)校準(zhǔn)后的分析系統(tǒng)應(yīng)核發(fā)校準(zhǔn)證書,校準(zhǔn)證書應(yīng)符合JJF1071—2010中5.12的要求,并給出各校準(zhǔn)項(xiàng)目名稱和測(cè)量結(jié)果以及擴(kuò)展不確定度。校準(zhǔn)原始記錄格式(推薦性表格)見附錄A,校準(zhǔn)證書內(nèi)頁(yè)格式(推薦性表格)見附錄B。8.2校準(zhǔn)結(jié)果的測(cè)量不確定度分析系統(tǒng)校準(zhǔn)結(jié)果的測(cè)量不確定度按JJF1059.1—2012的要求評(píng)定,校準(zhǔn)結(jié)果測(cè)量不確定度評(píng)定示例見附錄C。9復(fù)校時(shí)間間隔由于復(fù)校時(shí)間間隔的長(zhǎng)短是由分析系統(tǒng)的使用情況、使用者、分析系統(tǒng)本身質(zhì)量等諸因素所決定的,因此送校單位可根據(jù)實(shí)際使用情況自主決定復(fù)校時(shí)間間隔,復(fù)校時(shí)間間隔建議不超過1年。JJF2034—20235附錄A校準(zhǔn)原始記錄格式(推薦性表格)名稱型號(hào)規(guī)格制造廠商出廠編號(hào)委托單位名稱聯(lián)系人地址電話溫度濕度記錄編號(hào)校準(zhǔn)日期校準(zhǔn)員核驗(yàn)員一、溫度示值誤差、溫度波動(dòng)度、溫度均勻度時(shí)間/min024681012141618202224262830不同位置孔測(cè)量值To/℃(其中1為中心位置孔)123456789分析系統(tǒng)溫度顯示值Td/℃溫度示值誤差ΔTd/℃溫度波動(dòng)度ΔTf/℃溫度均勻度ΔTu/℃JJF2034—20236二、光源照度均勻度和光源照度精密度不同位置孔123456789光源照度lx測(cè)量值平均值光源照度均勻度N/%光源照度精密度RSDEi/%三、測(cè)量準(zhǔn)確度鑒定試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)與已知標(biāo)準(zhǔn)菌株□符合□不符合與已知標(biāo)準(zhǔn)菌株參考方法結(jié)果□一致□不一致JJF2034—20237附錄B校準(zhǔn)證書(內(nèi)頁(yè))格式(推薦性表格)序號(hào)校準(zhǔn)項(xiàng)目校準(zhǔn)結(jié)果1溫度示值誤差2溫度波動(dòng)度3溫度均勻度4光源照度均勻度5光源照度精密度6測(cè)量準(zhǔn)確度鑒定試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)溫度示值誤差校準(zhǔn)結(jié)果的擴(kuò)展不確定度:校準(zhǔn)員:核驗(yàn)員:JJF2034—20238附錄C測(cè)量不確定度評(píng)定示例C.1測(cè)量方法采用校準(zhǔn)裝置測(cè)定分析系統(tǒng)的恒溫孵育系統(tǒng),并與分析系統(tǒng)顯示值進(jìn)行比較。C.2測(cè)量模型示值誤差可由公式(C.1)給出:式中:ΔTd=Td-(C.1)ΔTd—溫度示值誤差,℃;Td—分析系統(tǒng)的溫度顯示值,℃;To—校準(zhǔn)裝置測(cè)得的中心位置溫度平均值,℃。C.3不確定度來(lái)源不確定度來(lái)源包括:測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u1,分辨力引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u2和校準(zhǔn)裝置引入的不確定度u3。C.4不確定度分量評(píng)定C.4.1測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u1選定一臺(tái)分析系統(tǒng),使用校準(zhǔn)裝置對(duì)恒溫孵育系統(tǒng)連續(xù)測(cè)量10次,得到一組測(cè)量值:34.82℃,34.93℃,35.34℃,35.42℃,35.18℃,35.31℃,35.38℃,35.45℃,35.16℃,35.27℃。則單次測(cè)量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差:其中Toi為校準(zhǔn)裝置測(cè)得的中心位置溫度單次測(cè)量值,實(shí)際校準(zhǔn)時(shí)在重復(fù)性條件下連續(xù)測(cè)量16次,以16次測(cè)量的算術(shù)平均值作為結(jié)果,則由測(cè)量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:C.4.2分辨力引入的0.209℃/16≈0.052℃校準(zhǔn)裝置的最小分辨力為0.01℃,區(qū)間半寬a=0.005℃,按均勻分布,取包含因子由此引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u2為:C.4.3校準(zhǔn)裝置引入的標(biāo)25u/3≈0.0029℃℃:,假設(shè)其服從均勻分布,取包含因子,C.5標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表JJF2034—20239標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表見表C.1。表C.1分析系統(tǒng)校準(zhǔn)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表不確定度來(lái)源標(biāo)準(zhǔn)不確定度符號(hào)標(biāo)準(zhǔn)不確定度/℃測(cè)量重復(fù)性u(píng)10.052分辨力u20.0029校準(zhǔn)裝置u30.058C.6合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc為:C.7擴(kuò)展不確定度≈0.078℃取包含因子k=2,則擴(kuò)展不確c0:.16℃JJF2034—202310附錄D[1]CLSIM50-A商品化微生物鑒定系統(tǒng)的質(zhì)量控制批準(zhǔn)指南(QualityControlforCommercialMicrobialIdentificationSystems;A