(高清版)GB 18281.1-2015 醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 生物指示物 第1部分：通則

代替GB18281.1—2000醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物指示物2015-12-10發(fā)布IGB18281的本部分的全部技術(shù)內(nèi)容為強(qiáng)制性。GB18281《醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物指示物》分為以下五個(gè)部分：——第1部分：通則；——第2部分：環(huán)氧乙烷滅菌用生物指示物；——第3部分：濕熱滅菌用生物指示物；——第4部分：干熱滅菌用生物指示物；——第5部分：低溫蒸汽甲醛滅菌用生物指示物。本部分是GB18281的第1部分。本部分按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草?！黾恿俗院缴镏甘疚锏木唧w信息；——增加了對(duì)標(biāo)簽的綜合要求的圖表；——增加了生物指示物的使用關(guān)于具體的最低生物量和/或抗力標(biāo)準(zhǔn)的范圍等其他方面的要求，這些范圍在產(chǎn)品標(biāo)簽上有詳細(xì)說明；——在附錄D中規(guī)定可以用HSKP、LHSKP或SMCP方法計(jì)算D值。本部分使用翻譯法等同采用ISO11138-1:2006《醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物指示物第1部分：通則》。與本部分中規(guī)范性引用的國(guó)際文件有一致性對(duì)應(yīng)關(guān)系的我國(guó)文件如下：——GB/T7408—2005數(shù)據(jù)元和交換格式信息交換日期和時(shí)間表示法(ISO8601:2000,——GB18278.1—2015醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌濕熱第1部分：醫(yī)療器械滅菌過程的開發(fā)、確認(rèn)和常規(guī)控制要求(ISO17665-1:2006,IDT); -GB18279.1—2015醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌環(huán)氧乙烷第1部分：醫(yī)療器械滅菌過程的開發(fā)、確認(rèn)和常規(guī)控制的要求(ISO11135-1:2007,IDT); -GB/T18279.2—2015醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌環(huán)氧乙烷第2部分：GB18279.1應(yīng)用指南 常規(guī)控制要求(ISO 2006,IDT);——GB/T18280.3—2015醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌輻射第1部分：醫(yī)療器械滅菌過程的開發(fā)、確認(rèn)和輻輻射第2部分：建立滅菌劑量(ISO11137-2:醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌輻射第3部分：劑量測(cè)量指南(ISO11137-3:2006,IDT); 最終滅菌醫(yī)療器械的包裝第1部分：材料、無菌屏障系統(tǒng)和包裝系統(tǒng)要求(ISO11607-1:2006,IDT); -GB/T19633.2—2015最終滅菌醫(yī)療器械的包裝第2部分：成形、密封和裝配過程的確認(rèn) GB/T19973.1—2015醫(yī)療器械的滅菌微生物學(xué)方法第1部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的測(cè)Ⅱ——GB/T24628—2009醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物與化學(xué)指示物測(cè)試設(shè)備(ISO18472:2006,——YY/T0287—2003醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系用于法規(guī)的要求(ISO13485:2003,IDT);——YY/T0466.1—2009醫(yī)療器械用于醫(yī)療器械標(biāo)簽、標(biāo)記和提供信息的符號(hào)第1部分：通本部分做了下列編輯性修改：——按照GB/T1.1的要求進(jìn)行了一些編輯上的修改；——?jiǎng)h除了國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的前言。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)行機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本部分由國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局提出。本部分由全國(guó)消毒技術(shù)與設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC200)歸口。本部分起草單位：山東新華醫(yī)療器械股份有限公司、3M中國(guó)有限公司、國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局廣州醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心。本部分所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：Ⅲ本部分規(guī)定了用于滅菌周期監(jiān)測(cè)的生物指示物(包括染菌載體和菌懸液)在生產(chǎn)、標(biāo)簽、檢測(cè)方法和性能等方面的通用要求。GB18281的其他部分規(guī)定了對(duì)用于不同滅菌過程的生物指示物的具體要求。附錄F中介紹了生物指示物的詳細(xì)圖解和組成部分，其中包含GB18281中的兩類生物指示物，這表明染菌載體可不用包裝，也可以用滅菌物質(zhì)可穿透的初級(jí)包裝，暴露于滅菌因子中。抗力特性取決于試驗(yàn)微生物的種類、數(shù)量、準(zhǔn)備方式和初級(jí)包裝的效果。關(guān)于生物指示物的選擇、使用以及結(jié)果的指南參考ISO14161。對(duì)于任何一個(gè)(包括GB18281的其他部分所描述的)滅菌過程，生物指示物的抗力也取決于測(cè)試時(shí)的微生物環(huán)境。理論上，這可能導(dǎo)致生物指示物的準(zhǔn)備過程中產(chǎn)生很多不確定因素。此外，滅菌過程中可能會(huì)出現(xiàn)各種情況，這就要保證產(chǎn)品在各種條件下能充分暴露。因此，當(dāng)暴露在特定滅菌過程各種條件下時(shí)，規(guī)范生產(chǎn)的生物指示物的抗力性能表現(xiàn)為D值和相關(guān)的x值。這些值在GB18281的其他部分中都有所規(guī)定。專業(yè)制造商、使用者和權(quán)威管理部門都參與了GB18281的第1部分～第5部分的起草，其代表了當(dāng)今科技的發(fā)展水平。在GB18281的其他部分中所未涉及的具體滅菌過程的生物指示物也要遵循GB18281的通用要求，包括抗力性能的測(cè)試。這類指示物不能準(zhǔn)確定義，可能用于新的滅菌過程，也可用單獨(dú)的微生物負(fù)載來代表。如果這些生物指示物含有世界衛(wèi)生組織風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估小組一組以外的微生物，應(yīng)滿足合適的保藏方法和安全等級(jí)。GB18281規(guī)定了確認(rèn)要求和滅菌過程的控制。1醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物指示物1.1.1GB18281的本部分規(guī)定了擬用于確認(rèn)和監(jiān)測(cè)滅菌周期的生物指示物(包括染菌載體、試驗(yàn)菌懸液)及其他組成部分在生產(chǎn)、標(biāo)識(shí)、檢測(cè)方法和性能方面的通用要求。1.1.2本部分的基本要求適用于GB18281的其他各部分。對(duì)于用于特殊滅菌過程中的生物指示物的要求在GB18281的其他部分都有所規(guī)定。本部分適用于沒有特殊要求的生物指示物。本部分不適用于依靠物理方式去除微生物的檢測(cè)體系，例如過濾過程或利用清洗消毒器或流通蒸汽等物理和/或機(jī)械方法去除微生物的過程。然而，本部分應(yīng)包含相應(yīng)的微生物測(cè)試系統(tǒng)的內(nèi)容。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。ISO8601數(shù)據(jù)元和交換格式信息交換日期和時(shí)間表示法(Dataelementsandinterchangeformats—Informationinterchange—Representationofdatesandtimes)ISO11135-1醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌環(huán)氧乙烷第1部分：醫(yī)療器械滅菌過程的開發(fā)、確認(rèn)和常規(guī)控制的要求(Sterilizationofhealthcareproducts—Ethyleneoxide—Part1:Requirementsfordevelop-ment,validationandroutinecontrolofasterilizationprocessformedicaldevices)ISO11135-2醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌環(huán)氧乙烷第2部分：ISO11135-1應(yīng)用指南(SterilizationofISO11137-1醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌輻射第1部分：醫(yī)療器械滅菌過程的開發(fā)、確認(rèn)和常規(guī)控制要求(Sterilizationofhealthcareproducts—Radiation—Part1:RequirementsfordevelopISO11137-2醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌輻射第2部分：建立滅菌劑量(Sterilizationofhealthcareproducts—Radiation—Part2:Establishingthesterilizationdose)ISO11137-3醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌輻射第3部分：劑量測(cè)量指南(Sterilizationofhealthcareproducts—Radiation—PISO11607-1最終滅菌醫(yī)療器械的包裝第1部分：材料、無菌屏障系統(tǒng)和包裝系統(tǒng)要求(Packa-gingforterminallysterilizedmedicaldevices—Partl:Requirementsformaterials,sterilebarriersys-temsandpackagingsystems)terminallysterilizedmedicaldevices—Part2:Validationrequireme2ISO11737-1醫(yī)療器材的滅菌微生物學(xué)方法第1部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的估計(jì)(Sterilizationofmedicaldevices—Microbiologicalmethods—Part1:DeterminationISO13485醫(yī)療器械systems—RequirementsforISO15223醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系用于法規(guī)的要求(Medicaldevices—Qualitymanagementregulatorypurposes)用于醫(yī)療器械標(biāo)簽、標(biāo)記和提供信息的符號(hào)(Medicaldevices—Symbolstobeusedwithmedicaldevicelabels,labellingandinformationtobesupplied)要求(Sterilizationofhealthcareproducts—Moistheat—Part1:RequirementsforISO18472醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物與化學(xué)指示物測(cè)試設(shè)備(Sterilizationofhealthcareprod-ucts—Biologicalandchemicalindicators—Testequipment)3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。生物指示物biologicalindicator對(duì)規(guī)定的滅菌過程有特定的抗力，含有活微生物的測(cè)試系統(tǒng)。[ISO/TS11139:2006,定義2.3]可涂覆試驗(yàn)微生物的支持材料。菌落形成單位colonyformingunit由單個(gè)或多個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)構(gòu)成的肉眼可見的活的微生物群落。菌種保藏編號(hào)culturecollectionnumber由科學(xué)界公認(rèn)的菌種保藏機(jī)構(gòu)提供的試驗(yàn)微生物的唯一編號(hào)。培養(yǎng)條件cultureconditions促進(jìn)微生物復(fù)蘇、生長(zhǎng)和(或)繁殖所采用的生長(zhǎng)培養(yǎng)基和接種方式的組合。[ISO/TS11139:2006,定義2.10]注：接種方式包括接種溫度、接種時(shí)間和其他特定接種條件。在規(guī)定的條件下，滅活試驗(yàn)微生物總數(shù)的90%所需的時(shí)間或劑量。[ISO/TS11139:2006,定義2.11]反映了生物指示物的抗力，其根據(jù)D值與微生物的對(duì)數(shù)減少量的乘積計(jì)算得到。3微生物生長(zhǎng)和(或)繁殖能力的喪失。[ISO/TS11139:2006,定義2.21]滅活曲線inactivationcurve在設(shè)定的條件下，試驗(yàn)微生物的滅活與對(duì)滅菌介質(zhì)暴露增強(qiáng)的關(guān)系曲線圖。染菌載體inoculatedcarrier已染上規(guī)定數(shù)量試驗(yàn)微生物的載體。標(biāo)定的微生物總數(shù)nominalpopulation制造商標(biāo)定的活的微生物數(shù)量。無菌屏障系統(tǒng)和保護(hù)性包裝的組合。[ISO/TS11139:2006,定義2.28]初級(jí)包裝primarypackage包裝系統(tǒng)的一部分，用于維持產(chǎn)品的完整性。注：保護(hù)染菌載體免受損壞和污染，而不阻礙滅菌因子穿透的系統(tǒng)。過程挑戰(zhàn)裝置processchallengedevice;PCD對(duì)某一滅菌過程構(gòu)成特定抗力的裝置，用于評(píng)價(jià)該滅菌過程的性能。[ISO/TS11139:2006,定義2.33]抗力儀resistometer為測(cè)量滅菌過程中產(chǎn)生的物理和/或化學(xué)參數(shù)相關(guān)組合而設(shè)計(jì)的測(cè)量設(shè)備。次級(jí)包裝secondarypackage裝有已包裝的生物指示物，供運(yùn)輸和貯存的包裝系統(tǒng)。初級(jí)包裝中含有試驗(yàn)微生物恢復(fù)生長(zhǎng)所需培養(yǎng)基的生物指示物。存活-殺滅區(qū)間survival-killwindow在規(guī)定的條件下滅菌處理時(shí)，生物指示物從全部存活微生物(存活時(shí)間)過渡到全部殺滅微生物(殺滅時(shí)間)的暴露程度。菌懸液suspension包含活的試驗(yàn)微生物的液體。注：裝在密封好的安瓿內(nèi)的菌懸液可以作為一種生物指示物使用，菌懸液也可以是染菌載體或者生物指示物的中間體。4實(shí)際可回收的菌落形成單位或其他合適單位的數(shù)量。使D值變化一個(gè)數(shù)量級(jí)所需溫度的數(shù)值。4生產(chǎn)通用要求4.1生產(chǎn)控制制造商應(yīng)按照本部分建立、記錄和持續(xù)運(yùn)行一套完整的質(zhì)量體系(例如ISO13485、GMPS或國(guó)家其他要求)用以覆蓋所有的操作要求。特別是制造商要在生產(chǎn)的各個(gè)階段采取有效措施來降低對(duì)生物指示物產(chǎn)生的不良影響。4.1.2.1制造的組成成分的可追溯內(nèi)容應(yīng)保存。4.1.2.2制造的組成成分應(yīng)包括摻入或直接接觸試驗(yàn)菌懸液、染菌載體或其初級(jí)包裝的所有材料和組成成分。4.1.3最終產(chǎn)品要求最終產(chǎn)品應(yīng)符合本部分的要求：a)生產(chǎn)(第5章);b)標(biāo)簽(4.3);c)抗力特性(6.4);d)儲(chǔ)存和運(yùn)輸(4.4)。注：生物指示物的使用方法參見ISO14161。本部分規(guī)定的步驟和方法應(yīng)由經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)和經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)室人員來實(shí)施(見4.1.1)。4.2試驗(yàn)微生物4.2.1菌株4.2.1.1試驗(yàn)微生物應(yīng)為被確定的菌株，來源于公認(rèn)的菌種保藏機(jī)構(gòu)，并能通過正確的檢測(cè)方法進(jìn)行確認(rèn)。4.2.1.2試驗(yàn)微生物應(yīng)為符合以下條件的菌株：a)試驗(yàn)微生物需用合適的方法來處理，不需要特殊保藏方法，不需要特殊的操作條件，不需要特殊的運(yùn)輸和郵遞要求(例如世界衛(wèi)生組織風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估小組一組要求);b)在規(guī)定的保質(zhì)期內(nèi)運(yùn)輸和儲(chǔ)存，可以有效保持其菌株的抗力。54.2.1.3除細(xì)菌芽孢外，試驗(yàn)微生物也可以是被證明對(duì)滅菌過程有合適抗力的微生物。4.2.2菌懸液的初始接種物4.2.2.1每批試驗(yàn)微生物懸液的最初接種物應(yīng)符合以下要求：a)可追溯到公認(rèn)的菌種保藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株；b)驗(yàn)證其種類和純度。4.2.2.2指定保存試驗(yàn)微生物菌種的方法應(yīng)當(dāng)能保證培養(yǎng)物不受污染，且引起其固有的性質(zhì)發(fā)生變化的不利影響減少到最小。4.2.2.3制造商應(yīng)記錄和驗(yàn)證每株試驗(yàn)菌的詳細(xì)確認(rèn)檢驗(yàn)。4.2.3試驗(yàn)微生物數(shù)量4.2.3.1對(duì)試驗(yàn)微生物懸液的活菌計(jì)數(shù)按照附錄A的規(guī)定進(jìn)行。4.2.3.2用戶需要試驗(yàn)微生物生長(zhǎng)指數(shù)情況時(shí)，應(yīng)將有效試驗(yàn)微生物數(shù)表達(dá)為占顯微鏡檢測(cè)所得細(xì)菌總數(shù)的百分比。4.3制造商提供的信息(標(biāo)簽)4.3.1每批菌懸液、染菌載體和生物指示物的標(biāo)簽上應(yīng)有以下說明：——可追溯生產(chǎn)過程的唯一性編號(hào)；——試驗(yàn)微生物的名稱；——適合菌懸液、染菌載體和生物指示物的滅菌工藝；——按照ISO8601規(guī)定的方式標(biāo)明失效期，例如，××××年××月××日；——制造商的名稱、商標(biāo)、地址或其他識(shí)別方法；在適當(dāng)?shù)牡胤绞褂脟?guó)際公認(rèn)的符號(hào)(見4.1.3和ISO15223)。4.3.2每批產(chǎn)品的外包裝應(yīng)該包括表1中給出的信息。4.3.3標(biāo)簽使用的符號(hào)可參照ISO15223的規(guī)定。表1制造商提供的信息信息要求菌懸液染菌載體生物指示物提供試驗(yàn)微生物的菌種名稱或縮寫和該菌種的編號(hào)必需必需必需菌懸液的標(biāo)稱容積(mL)必需 產(chǎn)品適用過程、抗力以及影響抗力的操作過程和載體”必需必需必需詳細(xì)的儲(chǔ)藏條件必需必需必需處置方法必需必需必需使用指南，尤其是有關(guān)滅菌處理后用于恢復(fù)試驗(yàn)活菌的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的數(shù)據(jù)必需必需必需每毫升試驗(yàn)微生物的數(shù)量(菌懸液)或每單位菌含量(染菌載體或生物指示物)必需必需必需次級(jí)包裝中產(chǎn)品的數(shù)量—必需必需參考本部分必需必需必需根據(jù)要求對(duì)制造商提供的抗力以及數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)的方法。64.4儲(chǔ)存和運(yùn)輸4.4.1應(yīng)遵照試驗(yàn)微生物懸液的存儲(chǔ)和運(yùn)輸條件，確保試驗(yàn)微生物懸液符合本部分和GB18281的其他部分的要求。4.4.2對(duì)染菌載體的包裝方式應(yīng)不影響其標(biāo)明的數(shù)量和每個(gè)染菌載體的性能。4.4.3應(yīng)遵照染菌載體的存儲(chǔ)和運(yùn)輸條件，確保染菌載體符合本部分和GB18281的其他部分的要求。4.4.4單獨(dú)包裝的生物指示物應(yīng)放入次級(jí)包裝中才能進(jìn)行運(yùn)輸和儲(chǔ)存。用于運(yùn)輸和儲(chǔ)存的包裝應(yīng)確保生物指示物符合本部分和GB18281的其他部分的要求。5生產(chǎn)具體要求5.1.1合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件應(yīng)能保證穩(wěn)定地生產(chǎn)出符合本部分和GB18281的其他部分性能要求的試驗(yàn)菌懸液。5.1.2菌懸液培養(yǎng)基應(yīng)不影響試驗(yàn)微生物的穩(wěn)定性，同時(shí)要與染菌載體和生物指示物制造工藝和材料相兼容。5.1.3收集及隨后的處理方法應(yīng)保證載體染菌時(shí)使用的菌懸液不含有對(duì)染菌載體或生物指示物的效能可能產(chǎn)生不良影響的培養(yǎng)基殘留物。5.2.1載體、內(nèi)層和次級(jí)包裝的材料應(yīng)不得含有任何對(duì)生物指示物的性能產(chǎn)生不良影響的污染物(物理的、化學(xué)的或微生物的)。5.2.2載體、內(nèi)層和次級(jí)包裝以及特殊的儲(chǔ)藏條件的標(biāo)識(shí)應(yīng)符合本部分要求，保證生物指示物在有效期內(nèi)性能良好。制造商應(yīng)向購(gòu)買者提供每種載體尺寸的最大值和最小值。5.2.3在滅菌過程中或滅菌后，載體和初級(jí)包裝應(yīng)不得殘留或釋放任何物質(zhì)到培養(yǎng)基，否則會(huì)抑制少量存活菌在培養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)。應(yīng)按附錄B進(jìn)行試驗(yàn)，檢查是否符合這一要求。5.2.4載體、初級(jí)和次級(jí)包裝使用前應(yīng)耐受預(yù)期的運(yùn)輸和處理，保證無破損。5.2.5用于載體和初級(jí)包裝的原材料應(yīng)能經(jīng)受暴露于滅菌過程，以保證染菌載體和生物指示物性能在預(yù)期用途下穩(wěn)定。應(yīng)通過觀察滅菌過程中載體和初級(jí)包裝暴露于極限變化范圍及其物理和化學(xué)變化的程度來檢驗(yàn)是否符合標(biāo)準(zhǔn)。注：相關(guān)的滅菌條件見GB18281的其他相關(guān)部分。5.2.6生物指示物的制造商應(yīng)研究滅菌條件，并對(duì)生物指示物滅菌條件的適用性進(jìn)行測(cè)試。5.3染菌載體5.3.1制造染菌載體的材料應(yīng)能經(jīng)受暴露于滅菌過程中不會(huì)變形、熔化、腐蝕或其他損壞，從而影響染菌載體的使用。5.3.2除非制造商已經(jīng)證明多個(gè)菌種的使用不會(huì)嚴(yán)重影響在特殊滅菌過程中試驗(yàn)微生物的性能，否則只能采用同一株試驗(yàn)微生物，制備一批染菌載體。5.3.3接種前，需要依據(jù)ISO17665-1、ISO11135、ISO11137的相關(guān)滅菌方法，對(duì)載體進(jìn)行滅菌。如果滅菌不可行，接種前應(yīng)依據(jù)ISO11737-1建立可接受的生物負(fù)載量限度要求(見附錄B)。5.3.4載體的接種應(yīng)保持一致的微生物數(shù)量。75.4生物指示物5.4.1應(yīng)把單個(gè)載體分別裝入初級(jí)包裝內(nèi)作為生物指示物。5.4.2預(yù)期適用的初級(jí)包裝應(yīng)被確認(rèn)(見附錄B)。5.4.3包裝應(yīng)符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(見ISO11607-1和ISO11607-2)。5.5自含式生物指示物自含式生物指示物的性能應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證，其中包括經(jīng)過滅菌過程后試驗(yàn)微生物在培養(yǎng)基中的恢復(fù)能力。6抗力測(cè)定6.1抗力的通用要求6.1.1每批次/批量生物指示物的抗力應(yīng)經(jīng)過試驗(yàn)，以證明符合本部分及GB18281的其他部分的性能要求。6.1.2滅菌過程中生物指示物的抗力性能在GB18281的其他部分中沒有規(guī)定時(shí)，應(yīng)該按照已經(jīng)描述滅菌過程的試驗(yàn)條款確定。6.1.3某些滅菌過程中使用不符合GB18281要求的生物指示物的最小菌量和抗力，需確定和明示，并被公認(rèn)。能夠提供以下信息的生物指示物是可以被接受的：a)符合GB18281所有其他要求(包括菌量和抗力的檢測(cè)方法);b)產(chǎn)品信息中，包括對(duì)活菌數(shù)和抗力的詳細(xì)說明；c)當(dāng)菌量和/或抗力(若適用)低于GB18281的相關(guān)部分的規(guī)定值時(shí)，產(chǎn)品標(biāo)簽要有明確警示。6.1.4抗力試驗(yàn)應(yīng)包括活菌計(jì)數(shù)和抗力特性的測(cè)定(見6.3和6.4)。6.1.5生物指示物的抗力可用Fgo值表示。6.2試驗(yàn)微生物應(yīng)規(guī)定試驗(yàn)微生物。6.3試驗(yàn)微生物的數(shù)量應(yīng)確定活菌數(shù)量(見附錄A)。在有效期內(nèi)，制造商或第三方機(jī)構(gòu)利用制造商給出的方法檢測(cè)出活菌的數(shù)量，應(yīng)介于制造商標(biāo)定值的50%～300%之間。6.4.1抗力特性的確定應(yīng)使用至少以下兩種方法的組合：a)通過建立存活曲線測(cè)定D值(見附錄C);b)通過部分陰性分析法測(cè)定D值(見附錄D);c)驗(yàn)證存活-殺滅反應(yīng)特性(見附錄E)。6.4.2由這些方法獲得的數(shù)值應(yīng)在GB18281的其他部分規(guī)定的范圍之內(nèi)。在生物指示物標(biāo)簽上至少標(biāo)有兩個(gè)上述數(shù)據(jù)。6.4.3在有效期內(nèi)，利用制造商給出的檢測(cè)方法，檢測(cè)標(biāo)定的D值，范圍應(yīng)在±20%之內(nèi)。理想狀態(tài)下，存活菌曲線在整個(gè)滅活區(qū)間呈線性關(guān)系。實(shí)際上有些誤差，但是線性應(yīng)保持在可接受8范圍之內(nèi)。通過計(jì)數(shù)法建立的存活菌的抗力曲線大于5×10',而通過部分陰性分析法基于存活試驗(yàn)微生物統(tǒng)計(jì)分析建立的曲線則低于5×101。通過兩種方法獲得的D值有良好的相關(guān)性，與線形存活曲線無嚴(yán)重偏差。GB18281的其他部分可增加其他的要求[例如用于濕熱滅菌(ISO11138-3)或者干熱滅菌(ISO11138-4)的生物指示物的×值]。本部分和GB18281的其他部分規(guī)定的抗力特性規(guī)定了測(cè)試條件的細(xì)節(jié)。6.4.4用所得的全部存活菌數(shù)的常用對(duì)數(shù)值的一半對(duì)時(shí)間作圖，所得的曲線的線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)不小于6.5試驗(yàn)條件抗力特性的測(cè)定應(yīng)在指定的試驗(yàn)條件下進(jìn)行，見表2。表2試驗(yàn)所需要的最少樣本GB18281.1的測(cè)試方法檢測(cè)樣品的最少量最少暴露次數(shù)檢測(cè)樣品的最小總量測(cè)試活菌的初始數(shù)量“——4附錄C存活曲線方法45附錄D部分陰性分析法附錄E存活-殺滅區(qū)間2最小總數(shù)應(yīng)取決于方法組合的選擇124或204注：對(duì)于特殊滅菌過程的一般性檢測(cè)方法在GB18281的其余部分有所解釋。未經(jīng)過滅菌的染菌載體和生物指示物的活菌數(shù)?！彪S后的t?(見表D.1)在暴露條件下額外的檢測(cè)不用于計(jì)算，但卻是作為評(píng)判結(jié)果有效與否的條件。7培養(yǎng)條件7.1培養(yǎng)箱7.1.1培養(yǎng)箱應(yīng)能設(shè)置、監(jiān)測(cè)與確認(rèn)具體的培養(yǎng)條件。7.1.2除了對(duì)常規(guī)的溫度進(jìn)行監(jiān)測(cè)以外，培養(yǎng)箱溫度分布也要被驗(yàn)證。7.2生長(zhǎng)培養(yǎng)基7.2.1生長(zhǎng)培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)被規(guī)定和證明，可以支持不少于100個(gè)試驗(yàn)微生物接種體的生長(zhǎng)。7.2.2標(biāo)簽上應(yīng)包括暴露于滅菌過程后培養(yǎng)條件的信息。7.2.3生長(zhǎng)培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)被確認(rèn)以確保它可以去除任何可能影響測(cè)試菌活性的滅菌因子殘留。7.3.1應(yīng)確認(rèn)培養(yǎng)溫度和時(shí)間。7.3.2制造商應(yīng)提供培養(yǎng)指南(見表1)。對(duì)于一個(gè)公認(rèn)的滅菌過程例如濕熱滅菌和環(huán)氧乙烷滅菌，利用合適性能測(cè)試菌，分別為嗜熱脂肪芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，其培養(yǎng)時(shí)間通常為7d。對(duì)于一個(gè)新的滅菌方法，7d的培養(yǎng)時(shí)間是不充裕的，基于驗(yàn)證，至少14d才能用來作為一個(gè)參考培養(yǎng)周期。9(規(guī)范性附錄)試驗(yàn)活菌數(shù)測(cè)定A.1概述用于預(yù)期回收菌量在5×101CFU以上的情況。A.1.2應(yīng)按照A.2～A.4規(guī)定的方法檢查相關(guān)產(chǎn)品恢復(fù)的試驗(yàn)菌。這種方法適用于處理和未處理的樣品，同時(shí)也可以用于初始活菌數(shù)(未處理的樣品)的檢測(cè)以及利用存活曲線(處理過的樣品)檢測(cè)D值。A.2試驗(yàn)樣品的最小檢測(cè)數(shù)量每批量/批次或每次暴露至少使用4個(gè)測(cè)試樣品。A.3樣品的準(zhǔn)備和培養(yǎng)方法A.3.1應(yīng)把檢測(cè)樣品放入一定體積的培養(yǎng)液中。通過已確認(rèn)的程序(例如用玻璃珠振蕩、研磨和/或用混勻器和/或混合器混勻、漩渦振蕩、超聲波或其他合適的方法)將試驗(yàn)微生物從試驗(yàn)樣品上洗脫下來A.3.2若需要，應(yīng)通過稀釋的方法，用合適的無菌稀釋液調(diào)整微生物在菌懸液中的濃度。在任何情況下，利用上述方法，使菌落形成單位的數(shù)量控制在特定范圍之內(nèi)。將培養(yǎng)物與融化的固體瓊脂培養(yǎng)基混合或涂布在有固體培養(yǎng)基的平板上，菌落數(shù)控制在30CFU~300CFU之間最為精確。A.3.3應(yīng)利用合適的檢測(cè)方法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)。方法包括膜過濾法、半固體培養(yǎng)基涂布法，以及固體培養(yǎng)基混合法(見ISO11737-1)。A.3.4生物指示物制造商應(yīng)確認(rèn)或提供合適的試驗(yàn)微生物恢復(fù)培養(yǎng)基，和/或準(zhǔn)備培養(yǎng)基的全部資料和說明。A.4培養(yǎng)和計(jì)數(shù)A.4.1平板樣本或?yàn)V膜應(yīng)在制造商規(guī)定的溫度和時(shí)間下培養(yǎng)。通常，嗜熱菌的培養(yǎng)溫度在55℃~60℃下，時(shí)間不少于48h;常溫菌的培養(yǎng)溫度在30℃~37℃下，時(shí)間不少于48h。試驗(yàn)微生物的平均數(shù)。(規(guī)范性附錄)用經(jīng)過滅菌處理的載體和初級(jí)包裝材料測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)抑制B.1概述本方法通過確定載體和初級(jí)包裝材料對(duì)滅菌后試驗(yàn)微生物生長(zhǎng)可能的抑制效果來測(cè)定其在確定滅菌過程中的適用性。這些材料物理性能的適用性應(yīng)經(jīng)過測(cè)定。檢測(cè)方法在GB18281的其他部分已給出?？沽x的相關(guān)要求見ISO18472。B.2材料B.2.1試驗(yàn)菌懸液與染菌載體使用的細(xì)菌同株，而且制備方法相同。懸液內(nèi)細(xì)菌總數(shù)應(yīng)可知，可經(jīng)活菌計(jì)數(shù)確定，分成含有少于100CFU活菌的試樣。B.2.3培養(yǎng)基應(yīng)符合培養(yǎng)條件規(guī)定。B.3方法示物相同體積的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。B.3.2取具有代表性的12個(gè)未染菌載體，分成6組，每組2個(gè)。應(yīng)用制造生物指示物的材料進(jìn)行包裝。B.3.3取B.3.2中的3組樣品，每組包含2個(gè)載體，并將其暴露在滅菌過程中。B.3.4按照本部分以及GB18281的其他相關(guān)部分要求的數(shù)值確定抗力檢測(cè)儀的操作條件。B.3.5滅菌終止時(shí)，除去載體的包裝，在無菌條件下未經(jīng)中間處理直接轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中，在3管預(yù)溫至培養(yǎng)溫度的培養(yǎng)基中分別加入一組2個(gè)載體(見B.3.1)。記錄完成轉(zhuǎn)移的時(shí)間。B.3.6將包含載體樣本的生長(zhǎng)培養(yǎng)基在規(guī)定的溫度下培養(yǎng)2h±10min以便載體上的抑制物解除吸附。將此培養(yǎng)基取出培養(yǎng)箱，每管接種不多于100個(gè)活菌的試驗(yàn)微生物懸液，再把此接種細(xì)菌的培養(yǎng)基放回培養(yǎng)箱。在正常使用條件下，按確定的恢復(fù)生物指示物的時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)。B.3.7將未經(jīng)暴露過程，包含2個(gè)載體的剩余3組轉(zhuǎn)移到3管培養(yǎng)基中作為對(duì)照，培養(yǎng)2h±10min,再每管接種不少于100個(gè)試驗(yàn)微生物，在確定時(shí)間內(nèi)按照B.3.6相同的方法培養(yǎng)。B.3.9生長(zhǎng)培養(yǎng)基對(duì)照，將3管無載體生長(zhǎng)培養(yǎng)基培養(yǎng)2h±10min,再每管接種不少于100個(gè)試驗(yàn)微生物，在確定時(shí)間內(nèi)按照B.3.6相同的方法培養(yǎng)。B.3.10在確定的培養(yǎng)周期結(jié)束時(shí)，從培養(yǎng)箱中取出全部9管培養(yǎng)基，再按制造商確定的常規(guī)條件使用方法進(jìn)行活菌檢查。B.4結(jié)果分析B.4.1如果在陽性對(duì)照中出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)“無菌生長(zhǎng)”,則本次試驗(yàn)無效。注：陽性對(duì)照無菌生長(zhǎng)可能是由于接種試驗(yàn)菌總數(shù)失控或恢復(fù)條件不合適(如生長(zhǎng)培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度等)。B.4.2如在載體對(duì)照中出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)“無菌生長(zhǎng)”,則表明載體不適合生產(chǎn)染菌載體或者生物指示物。注：在載體對(duì)照中“無菌生長(zhǎng)”而在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中有生長(zhǎng)，則表明載體材料對(duì)試驗(yàn)微生物的生長(zhǎng)有抑制。B.4.3若被滅菌過的載體在三次試驗(yàn)中出現(xiàn)一個(gè)或者多個(gè)“無菌生長(zhǎng)”,則表明載體材料不適合生產(chǎn)染菌載體或者生物指示物。注：無菌生長(zhǎng)可能是由于處理過程中載體材料上吸附高濃度的滅菌劑或發(fā)生降解引起的。B.5初級(jí)包裝材料生長(zhǎng)抑制性的確定B.5.1初級(jí)包裝材料應(yīng)按照類似載體的方法進(jìn)行試驗(yàn)(用初級(jí)包裝材料作為檢測(cè)樣品，按照本部分給B.5.2試驗(yàn)中被測(cè)試的初級(jí)包裝材料與培養(yǎng)基接觸的部分，應(yīng)是正常染菌載體面積的兩倍。對(duì)自含式生物指示物，則等于正常接觸恢復(fù)培養(yǎng)基面積。檢測(cè)樣品應(yīng)該浸沒在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。(規(guī)范性附錄)存活曲線方法測(cè)量D值C.1概述本方法是通過直接計(jì)數(shù)菌落數(shù)(CFU)檢測(cè)存活試驗(yàn)微生物的數(shù)量。利用活菌計(jì)數(shù)法檢測(cè)存活被測(cè)微生物的數(shù)量。這個(gè)方法也稱為直接計(jì)數(shù)法，見附錄A。注：這種方法可行的最低限約為5×101CFU。C.2材料C.2.1測(cè)試樣品如芽孢懸液、染菌載體或已包裝的生物指示物，應(yīng)包含在材料當(dāng)中。注：檢測(cè)方法在GB18281的其他部分給出。抗力儀的其他規(guī)定由ISO18472給出。C.2.2培養(yǎng)箱應(yīng)能設(shè)定特定培養(yǎng)條件的溫度，并能監(jiān)測(cè)確認(rèn)。C.2.3符合培養(yǎng)條件的生長(zhǎng)培養(yǎng)基應(yīng)包含在材料當(dāng)中。C.3步驟C.3.1測(cè)試樣本應(yīng)暴露于規(guī)定的暴露條件。暴露范圍應(yīng)規(guī)定，見表2。C.3.2應(yīng)至少有5次暴露，而且應(yīng)包括以下幾方面：a)有一次暴露中樣本未經(jīng)滅菌因子處理(例如0暴露時(shí)間);b)至少有一次暴露使活菌數(shù)降低到最初接種量的0.01%(減少4lg)c)至少有三次暴露介于a)和b)情況之間。C.3.3每次測(cè)定中每次暴露所用的試驗(yàn)樣本應(yīng)不少于4個(gè)，每次暴露應(yīng)采用相同數(shù)量的試驗(yàn)樣本。C.3.4如果滅菌因子在試驗(yàn)樣本上或內(nèi)部有殘留，要盡快去除以免影響測(cè)試結(jié)果。如果需要去除程C.3.5每次暴露2h內(nèi)，應(yīng)對(duì)測(cè)試樣本進(jìn)行處理，讓試驗(yàn)微生物從載體上脫落。在常用條件下恢復(fù)，采用制造商規(guī)定的培養(yǎng)條件和方法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)(見附錄A)。C.3.6應(yīng)用合適的無菌稀釋液調(diào)整菌懸液濃度。將培養(yǎng)物與融化的固體瓊脂培養(yǎng)基混合或涂布在有固體培養(yǎng)基的平板上，菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間視為有效。C.3.7用所得的全部存活菌數(shù)的常用對(duì)數(shù)值，對(duì)時(shí)間(min)或劑量作圖，用最小二乘法進(jìn)行回歸分析，確定最佳線性曲線?；貧w分析時(shí)不應(yīng)包括原先細(xì)菌數(shù)0.5lg范圍內(nèi)的存活數(shù)據(jù)點(diǎn)。計(jì)算所得直線斜率的負(fù)倒數(shù)值，即等于以時(shí)間(min)或劑量表示的指定暴露條件下的D值。a)利用以下公式確定最佳線性擬合曲線的斜率：m——最佳線性擬合曲線的斜率；n——數(shù)據(jù)點(diǎn)的個(gè)數(shù)；A——Zt;B——2lgy;C——2t2。計(jì)算所需要的數(shù)據(jù)在表C.1給出?；貧w分析需要的樣本數(shù)據(jù)回收菌量(y)暴露間隔(t)mint?=0.0分配變量ABCGE按照C.3.7,回歸分析時(shí)不應(yīng)包括0.5lgy?范圍內(nèi)的數(shù)據(jù)點(diǎn)。b)最佳線性曲線斜率的示例見表C.2和以下計(jì)算過程：=-0.5270表C.2斜率的計(jì)算示例回收菌量(y)暴露間隔(t)miny?=2.5×10y?=3.4×103y?=3.1×104y?=1.7×103ys=1.9×102分配變量A=20B=21.9300C=120G=66.6414E=107.3317按照C.3.7,回歸分析時(shí)不應(yīng)包括0.5lgy?范圍內(nèi)的數(shù)據(jù)點(diǎn)。c)D值相當(dāng)于所得的斜率的負(fù)倒數(shù)值，用下面公式計(jì)算：C.3.8所得線性存活菌曲線的線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)不小于0.8。a)存活菌曲線的線性相關(guān)系數(shù)用以下公式計(jì)算：其中C.3.7a)給出了所有變量的定義，E=2(1gy)2。b)存活曲線的線性相關(guān)系數(shù)的計(jì)算示例：=0.9965(規(guī)范性附錄)部分陰性分析法測(cè)定D值D.1.1本方法是通過直接觀察液體培養(yǎng)基的生長(zhǎng)情況確定的可回收微生物的數(shù)量，來間接確定存活試驗(yàn)微生物的數(shù)量。部分陰性分析法是一種部分測(cè)試樣沒有表現(xiàn)出生長(zhǎng)情況(部分陰性范圍),并且這種計(jì)算是建立于獲得的數(shù)據(jù)的結(jié)果之上的方法?！叭繗绶治龇ā币彩且环N部分陰性分析法，它是所有的測(cè)試樣本沒有表現(xiàn)出生長(zhǎng)，并且計(jì)算建立于獲得符合該要求的結(jié)果之上。這種方法適用于當(dāng)測(cè)量的單位面積上的可回收試驗(yàn)微生物的數(shù)量少于5×100CFU的情況。D.1.2Holocomb-spearman-karbe法(見D.3.1)與有限Holcomb-spearman-karbe法(見D.3.2)要求覆蓋整個(gè)部分陰性區(qū)域的連續(xù)暴露過程。得到的方法。D.1.3試樣應(yīng)暴露在除時(shí)間外的滿足所有過程變量要求確定的暴露條件下，并保持在規(guī)定區(qū)間內(nèi)(穩(wěn)定狀態(tài))。如果認(rèn)為過程變量范圍小，可以接受，則時(shí)間用“t”表示。如果認(rèn)為過程變量控制范圍大，不屬于恒定量，則應(yīng)采用積分法計(jì)算等效時(shí)間“U”。這兩個(gè)術(shù)語均可在文獻(xiàn)中查到。每次暴露過程中的暴露試樣數(shù)量n、相鄰兩次暴露過程之間的間隔時(shí)間d均會(huì)影響試驗(yàn)可靠性。D.2.1測(cè)試樣本應(yīng)能代表芽孢懸液、染菌載體或者包裝的生物指示物。D.2.2使用相關(guān)的抗力儀。注：檢測(cè)方法在GB18281的相關(guān)部分給出?？沽x的要求在抗力儀的標(biāo)準(zhǔn)中給出(ISO18472)。D.3.1.1.1應(yīng)將試樣分級(jí)暴露在除時(shí)間外，符合所有過程變量規(guī)定的確定暴露條件下，并保持穩(wěn)定狀態(tài)。試驗(yàn)樣本總數(shù)量不應(yīng)少于100CFU。每次暴露過程中最少使用20個(gè)重復(fù)。D.3.1.1.2至少應(yīng)使用5個(gè)暴露條件，至少包括1組所有試樣出現(xiàn)有菌生長(zhǎng)的試樣、2組部分試樣出現(xiàn)有菌生長(zhǎng)的試樣、2組經(jīng)過連續(xù)暴露后沒有觀察到出現(xiàn)有菌生長(zhǎng)的試樣。D.3.1.1.3當(dāng)滅菌因子在樣品里面或上面有殘留時(shí)，殘留應(yīng)該盡快被去除，以免影響測(cè)試結(jié)果。如果樣D.3.1.1.4試樣經(jīng)過暴露后應(yīng)按照制造商指定的方法培養(yǎng)。D.3.1.1.5每個(gè)染菌載體在無菌條件下轉(zhuǎn)移至裝有適當(dāng)?shù)囊后w培養(yǎng)基的試管中去。每個(gè)試管內(nèi)的液體培養(yǎng)基應(yīng)該一致。如果液體培養(yǎng)基已經(jīng)由制造商提供在生物指示物里，應(yīng)按照制造商規(guī)定的方法進(jìn)行。生物指示物制造商應(yīng)確定或者能提供制備一份生物指示物所需的合適回收培養(yǎng)基和/或完整的數(shù)據(jù)(見4.3)。D.3.1.1.6應(yīng)按照制造商指定的方法為試樣接種。經(jīng)過制造商建議的培養(yǎng)期后，或經(jīng)確認(rèn)的培養(yǎng)時(shí)間，應(yīng)檢查培養(yǎng)基(見7.3)。根據(jù)試驗(yàn)微生物的特點(diǎn)，液體培養(yǎng)基的渾濁度、培養(yǎng)基表面的生長(zhǎng)情況或試管底部沉淀物將表明試驗(yàn)微生物的生長(zhǎng)情況。如果生長(zhǎng)培養(yǎng)基屬于生物指示物的一部分，如自含式生物指示物，則應(yīng)按照制造商提供的使用說明判斷試驗(yàn)微生物是否出現(xiàn)生長(zhǎng)情況。D.3.1.1.7通過觀察pH值顏色變化，從而顯示自含式生物指示物中試驗(yàn)微生物的生長(zhǎng)情況。D.3.1.1.8結(jié)果應(yīng)記錄為在每次亞致死暴露過程中帶有非回收試驗(yàn)微生物的染菌載體與染菌載體的總數(shù)之比。D.3.1.2.1此計(jì)算方法是建立在5組暴露試驗(yàn)條件的最小數(shù)基礎(chǔ)之上，至少應(yīng)包含以下條件：——其中1組樣品是全部試驗(yàn)菌生長(zhǎng)；——其中2組樣品有部分樣品生長(zhǎng)；——其中2組樣品是全部不生長(zhǎng)菌(見表D.1)。注：HSKP類似于有限HSKP法(見D.3.2)。不同之處在于，HSKP利用通用公式，該公式不受限于在每個(gè)暴露條件或在暴露的過程中恒定的時(shí)間間隔的相同數(shù)量重復(fù)。D.3.1.2.2D值的平均值用以下公式計(jì)算：式中：N?——每個(gè)生物指示物的活菌平均數(shù)，用活菌計(jì)數(shù)法計(jì)算(見附錄A),計(jì)算時(shí)需要的數(shù)據(jù)見表D.1HSKP計(jì)算時(shí)所需要的樣品數(shù)據(jù)暴露在滅菌因子下的時(shí)間t暴露樣品數(shù)量n無菌生長(zhǎng)的樣品數(shù)量rts(U)注：t?為所有測(cè)試樣均出現(xiàn)生長(zhǎng)情況的暴露組中，暴露在滅菌因子下的最長(zhǎng)暴露時(shí)間；t?-ts是部分陰性區(qū)域的增加時(shí)間；t?和t?是所有試樣均沒出現(xiàn)生長(zhǎng)情況的連續(xù)暴露時(shí)間。如果未出現(xiàn)陰性單元，即，未出現(xiàn)陰性試樣(r=0),且所有單元在暴露時(shí)間t?前出現(xiàn)生長(zhǎng)情況；同時(shí)，在暴露時(shí)間t?之后的過程中全部為陰性試樣(r=n?),即未出現(xiàn)生長(zhǎng)情況，則測(cè)試有效。D.3.1.2.3對(duì)于暴露在滅菌因子下的暴露時(shí)間t?-ts,因子X和γ按如下公式計(jì)算：GB18281.1—2015/ISO11138-1:2006式中：r;——在暴露時(shí)間t;時(shí)出現(xiàn)未生長(zhǎng)試樣的數(shù)量；n;——在暴露時(shí)間t;下暴露的數(shù)量。在t?時(shí)間下，所有試樣表現(xiàn)出生長(zhǎng)，所以從以上X;和γ;的計(jì)算值中，在每一次暴露時(shí)間t;的U;值可以被計(jì)算如下：D.3.1.2.4任何試樣的平均無菌時(shí)間Unsk,可以通過對(duì)每一次暴露時(shí)間t?-ts的U;值的求和來計(jì)算：當(dāng)暴露時(shí)間間隔d是一個(gè)常量，在每一個(gè)暴露時(shí)間下，測(cè)試樣品數(shù)量n也是一樣的，平均無菌時(shí)間的Unsk可以用以下公式計(jì)算：D.3.1.2.6D的平均值D,可用下面的公式中計(jì)算：式中：N?——每個(gè)試樣的初始活菌數(shù)量(見附錄A)。D.3.1.2.7按照以下公式計(jì)算D(p=0.05)的95%置信區(qū)間Da:Dalc=D±2√VD.3.1.2.8方差V用以下公式計(jì)算：D.3.1.2.9用于計(jì)算方差的“a”可以用以下公式計(jì)算：D.3.1.3HSKP計(jì)算方法舉例表D.2可變的時(shí)間間隔和可變的樣本數(shù)量的數(shù)據(jù)示例滅菌劑暴露時(shí)間tmint?=10n?=20r?=0t?=18nz=19r?=4t?=28n?=21r?=8t?=40n?=20r?=12GB18281.1—2015/ISO11138-1:2006滅菌劑暴露時(shí)間tmin表現(xiàn)未生長(zhǎng)試樣的數(shù)量r;t?=50n?=20rs=16ts=60ns=20rs=20t?=70n?=20r?=20D.3.1.3.1X,和γ;的計(jì)算(每次暴露):注：為了γ和γ?的計(jì)算，兩者的γs=0.2,D.3.1.3.2計(jì)算每個(gè)暴露時(shí)間t;的U;這是因?yàn)樵谶@個(gè)例子中表現(xiàn)出未生長(zhǎng)的試樣的數(shù)量以恒定比率增長(zhǎng)。U;=X;y;U?=Xy;=14×0.21=2.94U?=23×0.17=3.91U?=34×0.22=7.48U?=45×0.2=9.0U?=55×0.2=11.0U?=65×0=0D.3.1.3.3用以下公式計(jì)算平均無菌時(shí)間Unsk:UHsk=μ?+pz+μ?+μ?+μs+μsUnsk=2.94+3.91+7.48+9.0+11.0+0=34.33D.3.1.3.4用以下公式計(jì)算D的平均值D:N?——初始菌量1×10?。D.3.1.3.5D.3.1.3.6按照以下公式計(jì)算D(p=0.05)的95%置信區(qū)間D:Da=D±2√V方差V用以下公式計(jì)算：D.3.1.3.7每一個(gè)時(shí)間t;方差公式中的“a”和所有結(jié)果的求和可以用以下公式計(jì)算：a=0.25(2.9917+5.7070+6.1137+3.3684+0.0000)a=0.25×18.1808=4.5452N?=1×10?。=4.5452×(0.19045)2D.3.1.3.9D.3.1.3.10=4.5452×0.03627=0.1649按照以下公式計(jì)算D(p=0.05)的95%置信區(qū)間Dle:Dale=D±2√V置信下限：Dal=D-2√V=6.54—(2×0.4061)=5.73D.3.1.3.11置信上限：Dal=D+2√V=6.54+(2×0.4061)=7.35D.3.2LHSKPD.3.2.1用LHSKP計(jì)算D.3.2.1.1LHSKP計(jì)算方法是建立在至少5組暴露試驗(yàn)條件下的基礎(chǔ)之上，至少包含以下條件：——其中1組樣品應(yīng)是全部試驗(yàn)菌生長(zhǎng)；——其中2組樣品應(yīng)有部分樣品生長(zhǎng)；——其中2組樣品應(yīng)是全部不生長(zhǎng)菌(見表D.3)。表D.3相同時(shí)間間隔和相同樣品數(shù)量的LHSKP計(jì)算所需的數(shù)據(jù)示例滅菌因子下的暴露時(shí)間tmin暴露試樣數(shù)量n表現(xiàn)無菌生長(zhǎng)的試樣數(shù)量r;n?如果未出現(xiàn)陰性單元，即，未出現(xiàn)陰性試樣(r=0),且所有單元在暴露時(shí)間t?前出現(xiàn)生長(zhǎng)情況；同時(shí)，在暴露時(shí)間t?之后的過程中全部為陰性試樣(r=nz),即未出現(xiàn)生長(zhǎng)情況，則測(cè)試有效。D.3.2.1.2LHSK方法類似于有限HSKP法(見D.3.1)。不同之處在于，LHSK利用公式計(jì)算，該公式要求在每個(gè)暴露條件下有相同數(shù)量重復(fù)和在暴露的過程中恒定的時(shí)間間隔。D.3.2.1.3無菌生長(zhǎng)平均時(shí)間Unsk用以下公式計(jì)算：GB18281.1—2015/ISO11138-1:2006Uhsk——無菌生長(zhǎng)的平均時(shí)間；U?——所有試樣顯示無菌生長(zhǎng)的第一次暴露；d——暴露條件之間的時(shí)間間隔或劑量差別(是一個(gè)恒量);n——每次暴露條件下樣品的重復(fù)數(shù)量(每次暴露的相同樣品數(shù)量，例如20);N?——每個(gè)指示物的平均活菌數(shù)，用活菌計(jì)數(shù)法(見附錄A);D.3.2.1.4D的平均值D可以用以下公式計(jì)算：注：當(dāng)按照上述方法時(shí)，LHSK方法可以計(jì)算變量V、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)和95%置信區(qū)間(置信上限和置信下限)。D.3.2.1.5變量V可用以下公式計(jì)算：D.3.2.1.6D.3.2.1.7D.3.2.1.8標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)用以下公式計(jì)算：SD=√VD(p=0.05)的95%置信區(qū)間De用以下公式計(jì)算：Dek=D±2SD置信下限：D.3.2.1.9置信上限：N?=1×10?。相同時(shí)間間隔和相同數(shù)量的樣品的數(shù)據(jù)暴露時(shí)間tmin暴露菌片的數(shù)量n不長(zhǎng)菌的測(cè)試樣品數(shù)量r;t?=20(U?)n?=20r?=0(r=0)n?=20r?=1na=20ra=7n?=20r?=15ts=28(U-i)ns=20rs=19ts=30(U)ns=20r?=20(r=n)?GB18281.1—2015/ISO11138-1:2006暴露時(shí)間t暴露菌片的數(shù)量n不長(zhǎng)菌的測(cè)試樣品數(shù)量rr?=20(r=n)*‘如果未出現(xiàn)陰性單元，即，未出現(xiàn)陰性試樣(r=0),且所有單元在暴露時(shí)間U?前出現(xiàn)生長(zhǎng)情況；同時(shí)，在暴露時(shí)間U,之后的過程中全部為陰性試樣(r=n),即未出現(xiàn)生長(zhǎng)情況，則測(cè)試有效。D.3.2.2.2無菌保證的平均暴露時(shí)間UnsK用以下公式計(jì)算：式中：N?=1×10?;D.3.2.2.3變量V用以下公式計(jì)算：標(biāo)準(zhǔn)誤差SD用以下公式計(jì)算：D值(p=0.05)的95%置信區(qū)間Dat用以下公式計(jì)算：Dk=D±2SD經(jīng)過驗(yàn)證等同于D.3.1和D.3.2的分析方法也可以用于部分陰性數(shù)據(jù)的分析。當(dāng)反應(yīng)特性可以預(yù)見時(shí)，SMCP作為一種稀釋培養(yǎng)計(jì)數(shù)法可以實(shí)際應(yīng)用。SMCP的計(jì)算需要在部分陰性區(qū)域內(nèi)的時(shí)間t,表現(xiàn)無菌生長(zhǎng)的數(shù)量r,樣品的重復(fù)數(shù)量n,在陰性區(qū)域內(nèi)的一個(gè)暴露時(shí)間和每一個(gè)樣品上的注釋菌量N。。D.3.3.1.4為了通過SMCP得到正確的數(shù)據(jù)，D值應(yīng)為在部分陰性區(qū)域內(nèi)的至少三個(gè)可重復(fù)循環(huán)的平均值。D.3.3.1.5材料的應(yīng)用與D.2相同。D.3.3.1.6為了得到95%的置信區(qū)間，每一個(gè)暴露條件下要不少于50個(gè)重復(fù)，同時(shí)為了建立相同于試樣應(yīng)在同一批/次的存活-殺滅區(qū)間內(nèi)的確定的暴露條D.3.3.2.1D值用以下公式計(jì)算：t——暴露時(shí)間；lgB——暴露t時(shí)間之后的含菌量的lg值。D.3.3.2.2以下公式可以重新定義部分陰性的數(shù)據(jù)庫(kù)：或lgB——lg(1nn/r)或lg[2.303lg(n/r)];N;——被檢測(cè)樣品的數(shù)量除以陰性樣品的數(shù)量的商的自然對(duì)數(shù)；N——每一個(gè)暴露時(shí)間下的試樣的數(shù)量；r——空白或者無菌生長(zhǎng)的試樣數(shù)量。D.3.3.2.3D(p=0.05)的95%置信區(qū)間Dk用以下公式計(jì)算：D.3.3.2.4上述公式只有在minn=100r=37D.3.3.3.1用下以下公式計(jì)算D值：t——暴露時(shí)間；N。——每個(gè)試樣中初始活菌數(shù)=1×10?;lgA——每個(gè)樣品中初始染菌量N。的lg值；lgB——暴露t時(shí)間之后的含菌量的lg值，或lg(lnn/r)或lg[2.303lg(n/r)];n——每一個(gè)暴露時(shí)間下的試樣的數(shù)量；r——空白或者無菌生長(zhǎng)的試樣數(shù)量。=4.00min(保留小數(shù)后一位，D=4.0min)時(shí)，95%置D.3.3.3.2D(p=0.05)的95%置信區(qū)間D用以下公式計(jì)算。只有當(dāng)時(shí)，95%置信區(qū)間才可以用以下公式計(jì)算：式中：式中：=0.37+1.96×0.04828=0.465式中：式中：=0.37-1.96×0.04828=0.37—0.095(規(guī)范性附錄)存活-殺滅反應(yīng)特性E.1概述監(jiān)測(cè)一次/批生物指示物的存活-殺滅反應(yīng)特性，是為該次/批所有生物指示物性能一致提供保證的又一方法。E.2.1試樣應(yīng)是芽孢懸液、染菌載體或包裝好的生物指示物。E.2.2應(yīng)使用相關(guān)的抗力儀。注：GB18281的后續(xù)部分給出了相關(guān)檢測(cè)方法。抗力儀的要求在抗力儀標(biāo)準(zhǔn)給出(見ISO18472)。E.2.3培養(yǎng)箱應(yīng)能設(shè)定特定培養(yǎng)條件的溫度，并能監(jiān)測(cè)確認(rèn)。E.2.4培養(yǎng)基應(yīng)滿足培養(yǎng)條件。E.3方法E.3.1應(yīng)不少于50個(gè)相同的試樣，證實(shí)存活時(shí)間和殺滅時(shí)間(見表2)。通過存活曲線(見附錄C)或者部分陰性分析法(見附錄D)計(jì)算的D值應(yīng)被用于存活-殺滅反應(yīng)特性的規(guī)定。E.3.2樣品暴露后應(yīng)按照制造商給出的方法進(jìn)行培養(yǎng)。E.3.3所標(biāo)明的每個(gè)生物指示物中試驗(yàn)微生物存活的暴露時(shí)間表示存活特性。所標(biāo)明的每個(gè)生物指示物中殺滅所有試驗(yàn)微生物的暴露時(shí)間表示殺滅特性。E.3.4存活-殺滅反應(yīng)特性應(yīng)用相關(guān)的抗力儀測(cè)定，使用相關(guān)的抗力儀過程參數(shù)。注：GB18281的后續(xù)相關(guān)部分給出了特殊滅菌過程的相關(guān)條件。E.3.5存活時(shí)間和殺滅時(shí)間的相關(guān)數(shù)值用以下公式計(jì)算：存活時(shí)間≥(1gN。-2)×D值殺滅時(shí)間≤(lgN。+4)×D值E.3.6每次暴露中使用的樣品數(shù)，應(yīng)根據(jù)所使用的生物指示劑物抗力儀的容積和操作特點(diǎn)確定。在測(cè)定存活和殺滅時(shí)間時(shí)，為了測(cè)試樣品總數(shù)是否符合要求，可能需要進(jìn)行幾次暴露。(規(guī)范性附錄)生物指示物組成部分的關(guān)系生物指示物組成部分的關(guān)系見表F.1。表F.1生物指示物組成部分的關(guān)系圖解組成術(shù)語微生物試驗(yàn)微生物懸浮在液體中的微生物試驗(yàn)微生物懸液接種在表面的微生物°染菌載體b!初級(jí)包裝染菌載體單獨(dú)包裝的生物指示物包含有處理過的染菌載體的生長(zhǎng)培養(yǎng)基處理好的染菌載體的生長(zhǎng)性能測(cè)試火[火[過程準(zhǔn)備使用的染菌載體和生長(zhǎng)培養(yǎng)基結(jié)合的系統(tǒng)自含式生物指示劑體物質(zhì)(見3.2)。根據(jù)微生物的目的是用來保存還是檢測(cè)，采用的液體可能會(huì)發(fā)生變化?！比绻糜诒O(jiān)測(cè)滅菌過程，可以被定義為一種生物指示物。在某些情況下，表面可以作為檢測(cè)目的的產(chǎn)品。[2]ISO690:1987Documentation—Bibliographicreferences—Content,formandstructure[3]ISO1000:1992SIunitsandrecommendationsfortheuseoftheotherunits[4]ISO1000:1992/Amd1:1998SIunitsandrecommendationsfortheuseoftheirmultiplesandofcertainotherunits—Amendment1[6]ISO/TS11139Sterilizationofhealthcareproducts—Vocabulary[7]ISO14161:2000Sterilizationofhealthcareproducts—Biologicalindicators—Guidancefortheselection,useandinterpretationofresults[8]ISO14937:2000Sterilizationofhealthcareproducts—Generalrequirementsforcharacter-izationofasterilizingagentandthedevelopment,validationandroutinecontrolofasterilizingprocessformedicaldevices[9]IEC60027(allparts)Lettersymbolstobeusedinelectricaltechnology[10]ARMITAGE,P.andALLEN,I.,MethodsofEstimatingtheLD50inQuantalResponseData,J.ofHyg.Vol.XLVIII,pp.298-322,1950.[11]COCHRAN,W.G.,EstimationofBacterialDensitiesbyMeansofthe"MostProbableNumber",Biometrics,Vol.6,N