氧化酶活力的測(cè)定編制說明

NADH氧化酶（NOXE.C.1.6.--）是一類重要的氧化還原酶，求，中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院于2024年3月提出《NADH氧化酶活力的測(cè)定2024年3月至2024年5月標(biāo)準(zhǔn)起草單位組織相關(guān)技術(shù)人員對(duì)到本行業(yè)的發(fā)展現(xiàn)狀與特點(diǎn)，又要有一個(gè)適宜的范圍與程度,從而提NADH氧化酶催化底物NADH的氧化生成NAD+，NAD+在340nm下無吸收，而NADH有吸收，其ε340=6.22mM-1cm-1，通過監(jiān)測(cè)340nm在反應(yīng)底物未飽和的條件下，酶活隨著底物濃度的增加而而降低。NADH氧化酶在不同NADH濃度下的活性如圖1所示。當(dāng)1.21.00.80.60.40.20.0-0.20.000.050.100.150.20NADH(mM)反應(yīng)體系pH值對(duì)于NADH氧化酶等酶的活性影響很大，pH的改不同pH對(duì)NADH氧化酶活性的影響如圖2所示。雖然該NADH氧化酶均具有活性的pH作為活力測(cè)定方法的pH，RelativeactivityRelativeactivity(%)在相同pH的條件下，緩沖液的類型也會(huì)對(duì)酶活產(chǎn)生影響。在pH7.0的條件下，NADH氧化酶在不同緩沖液中的酶活力如圖3所示，其在三羥基甲基氨基甲烷（Tris）-HCl緩沖液中具有最高的活力，因此RelativeactRelativeactivity(%)phosphatepotassiumBuffer本標(biāo)準(zhǔn)給出了NADH氧化酶活力的測(cè)定方法中所使用的試劑的對(duì)于NADH氧化酶活力的測(cè)定，反應(yīng)底物溶液含0.13mmol/L本標(biāo)準(zhǔn)給出了NADH氧化酶活力的測(cè)定方法中所使用的儀器設(shè)此在試樣酶液的制備中分為液體樣品待測(cè)酶液制備和固體樣品待測(cè)酶活的測(cè)定步驟為：準(zhǔn)確移取1000μL反應(yīng)底物溶液于石英比色在340nm下掃描1min，保存吸光度曲線。通過線性回························X1——NADH氧化酶活力，單位為酶活力單位每毫升（U/mL）1——反應(yīng)底物溶液的體積，單位為微升(μL2——酶活力測(cè)定中加入酶液的體積，單位為微升(μLk——酶活力測(cè)定中吸光度曲線斜率，單位為吸光度每分鐘ε——吸光系數(shù)，單位為mM-1cm-1（取值為6.22mM-1cm-1）?！ぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁぁ2——NADH氧化酶活力，單位為酶活力單位每克（U/g）1——反應(yīng)底物溶液的體積，單位為微升(μL2——酶活力測(cè)定中加入酶液的體積，單位為微升(μLk——酶活力測(cè)定中吸光度曲線斜率，單位為吸光度每分鐘ε——吸光系數(shù)，單位為mM-1cm-1（取值為6.22mM-1cm-1）；氧化酶活力的RSD為2.46%，說明重復(fù)性好。基于以上重復(fù)性結(jié)果，酶