HLA-B27檢測及臨床意義課件

HLA-B27檢測及臨床意義病

因?qū)W臨

床表

現(xiàn)AS血

清學流

行病

學AS年輕男士多見男:女比例約為（2—3）:1種族差異，白種人患病率1%，黑人最低中國人HLA

—B27陽性率約6—8%，中國

人群患病率0.3%，在患者家系中為4%，

南方較北方高AS發(fā)

病

率病因?qū)W遺傳感染血清學RF陰性HLA-B27陽性HLA-B*27位

于

第

6

號染色體的短

臂上HLA-B

含

有

1

000個

等位

基因Ⅰ

型

M

HC基因，基本

上表達在機體

中所有有核的

細胞上，尤其

是淋巴細胞的

表面HLA-B27亞

型(B27*02;B27*04;

B27*05;

B27*07)HLA-B27檢測意義

超

過

9

0%的強直性脊椎炎患者其H

LA-B27

抗原表達為陽

性

，

普通人群中僅5-10%的為陽性

HLA-B27陽性者AS

發(fā)病率約為1

0%

～20%

，而普通人群發(fā)

病

為

1

‰～2‰，相差約1

00

倍

與傳統(tǒng)方法相比，用流式細胞儀來檢測

HLA-B27的表達，

靈

敏

度可達1

00%，特異性達9

7.4%PCR-SSP/SSO方法基

因

芯片技術(shù)Real-time

PCR

方

法補

體

依賴性微量淋巴細胞毒試驗ELISA法流

式

細胞術(shù)（FCM法）HLA-B27檢測方法補

體

依

賴

性微量淋巴細

胞毒抗體與

淋巴細胞

表面的

膜抗原特

異性結(jié)

合后，免

疫球蛋

白的

補體

結(jié)合位點暴露，該I

C

與補體結(jié)合而使其活化，形成攻膜復合體在細胞

膜上穿孔，導致靶細胞的溶解死亡。在細胞被穿孔但尚未裂解前加入

染

料

，可使染料進入細胞內(nèi)，使細胞著色。補

體

依

賴

性

淋

巴細

胞毒?

缺

少

高純度的單價抗血清?

人

工

計數(shù)淋巴細胞數(shù)量，易誤診和漏診

?

可

疑

結(jié)果，難判斷結(jié)果，常需復查?

血

標

本要求高，實驗條件的影響?

成

本

低流

式

細胞術(shù)流式細胞術(shù)BD

FACSAria

?

II

Flow

Cytometer流式細胞術(shù)?

熒

光

標記的單克隆抗體，特異性高

?

操

作

簡便，靈敏度和準確性高?

成

本

較高?

抗

體

發(fā)生交叉反應(yīng)?

樣

本

要求較高ELISA方法ELISA方法

?

快

速

、簡單?

特

異

性和靈敏度低?

溶

血

標本影響檢測結(jié)果

?

成

本

低PCR-SSP

序列特異性引物PCR擴增抽提DNA瓊脂糖凝

膠電泳實

驗

步驟PCR-SSP/SSO?????Real-time

PCR通

過

融

解

曲

線

對

擴

增

片

斷

進

行

檢

測本

體

系

包

含

兩

對

引

物

——

質(zhì)

控

引

物、B27

擴增引物同

一

份

樣

本

，

只

擴

增

出

質(zhì)

控

峰

—

—陰性同

一

份

樣

本

，

擴

增

出

現(xiàn)

雙

峰

—

—

陽性陰

陽

性

結(jié)

果依

據(jù)

質(zhì)控

峰

與

B

27陽性峰

的

比值進行判斷19質(zhì)控峰

B27峰操

作

流程核

酸

提取3

小時PCR擴增3

小時軟

件

判讀，報告輸出20基因芯片技術(shù)

病

人

樣本的D

NA

提取PCRDNA

芯

片

雜

交全自動結(jié)果判讀基因芯片技術(shù)病

人

D

NA熒

光

信號寡

核

苷酸探針Spot

→芯

片

基質(zhì)基因技術(shù)

準

確

性

高

：基因型檢測

特

異