DB32T-職業(yè)衛(wèi)生實驗室質(zhì)量控制樣品研制規(guī)范 第5部分 生物樣本類

Q/LB.□XXXXX-XXXX目次TOC\o"1-1"\h前言 II1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語、定義 14生物樣本類質(zhì)量控制樣品的技術(shù)要求 15生物樣本類質(zhì)量控制樣品的研制步驟 26生物樣本類質(zhì)量控制樣品的制備 27生物樣本類質(zhì)量控制樣品的貯存/使用 3附錄A（資料性） 4附錄B（資料性） 7附錄C（資料性） 7前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件為DB/TXXXX《職業(yè)衛(wèi)生實驗室質(zhì)量控制樣品研制規(guī)范》的第5部分。DB/TXXXX分為以下5個部分：——第1部分：固體吸附劑管類；——第2部分：濾料類；——第3部分：吸收液類；——第4部分：粉塵類（游離二氧化硅測定）；——第5部分：生物樣本類。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由江蘇省衛(wèi)生標準化技術(shù)委員會提出并歸口。本文件起草單位：江蘇省疾病預防控制中心、無錫市疾病預防控制中心、蘇州市疾病預防控制中心、蘇州工業(yè)園區(qū)疾病防治中心有限公司、東南大學、無錫市第八人民醫(yī)院本文件主要起草人：周長美、朱寶立、龔燕、孟元華、劉文衛(wèi)、張利明、李大偉、王樂華、史俊文、羅凱、宋振威職業(yè)衛(wèi)生實驗室質(zhì)量控制樣品研制規(guī)范第5部分：生物樣本類范圍本文件適用于職業(yè)衛(wèi)生實驗室研制生物樣本類質(zhì)量控制樣品（QCM）。本文件規(guī)定了該類QCM的技術(shù)要求、制備步驟、規(guī)范使用等原則。本文件的基本用戶是需要研制特定的QCM的實驗室人員。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T15000.1標準樣品工作導則(1)在技術(shù)標準中陳述標準樣品的一般規(guī)定GB/T15000.2標準樣品工作導則第2部分：常用術(shù)語及定義GB/T15000.3標準樣品工作導則(3)標準樣品定值的一般原則和統(tǒng)計方法GB/T15000.7標準樣品工作導則第7部分：標準樣品生產(chǎn)者能力的通用要求CNAS-GL003能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南CNAS-GL005實驗室內(nèi)部研制質(zhì)量控制樣品的指南GBZ/T224職業(yè)衛(wèi)生名詞術(shù)語ISO/IEC指南99國際計量學詞匯-基本及一般概念和相關(guān)術(shù)語ISO3534-1統(tǒng)計學-術(shù)語及符號：第一部分通用統(tǒng)計學及概率論術(shù)語術(shù)語、定義GB/T15000.2-2019、ISO/IEC指南99、ISO3534-1、GBZ/T224-2010中界定的術(shù)語和定義適用于本文件。生物樣本類質(zhì)量控制樣品的技術(shù)要求基體要求生物樣本原料成分一般比較復雜，選擇的生物樣本類QCM的基體應與日常檢測樣品的基體相同或者盡可能接近，均勻性穩(wěn)定性能達到使用要求，且目標化學物質(zhì)本底值較低。生物樣本原料總量可在考慮實驗室一定周期（如每年）的QCM需求量及研制過程用量后確定。制備過程中使用5/10mL西林瓶或者聚乙烯塑料小瓶分裝，小瓶需使用同一生產(chǎn)商的同一批次產(chǎn)品，驗收合格后使用。目標化學物質(zhì)標準儲備液采用國家一級標準物質(zhì)。選擇符合要求的分液瓶，移液器，真空冷凍干燥器。特性和特性值生物樣本類QCM的特性與所需進行質(zhì)量控制的測量特性一致，其特性值的范圍可在考慮該目標化學物質(zhì)的職業(yè)衛(wèi)生限值、日常樣品濃度、標準曲線范圍等因素后確定。均勻性和穩(wěn)定性均勻性：運用單因素方差分析統(tǒng)計分析抽取樣品的檢測結(jié)果有無顯著性差異，判定該批次QCM均勻性是否符合要求。穩(wěn)定性：各存放條件下，各考察時間點抽取樣品的檢測結(jié)果與均勻性檢驗的總體均值運用t檢驗法進行統(tǒng)計分析，無顯著性差異時間點前該批次QCM的穩(wěn)定性符合要求。生物樣本類質(zhì)量控制樣品的研制步驟使用一種實用且簡便的方法來確保QCM的均勻性和穩(wěn)定性，以達到開發(fā)成本和預期用途之間的平衡，可為實驗室提供較有證標準物質(zhì)（CRM）更為經(jīng)濟的識別測量波動的方法。研制過程除需具備一定技術(shù)水平和能力的組織外，研制人員還應有豐富的樣品知識并熟悉相關(guān)過程。生物樣本類QCM研制步驟為：原材料準備→原材料制備→加料制備→分裝→冷凍干燥→輻照滅菌→均勻性評估→賦值→穩(wěn)定性評估→研制文件整理→貯存/使用。材料及其處理、分裝、包裝和輻照等均可由具有一定經(jīng)驗和特定設備的第三方完成。生物樣本類質(zhì)量控制樣品的制備材料準備按照4.1要求，準備一定數(shù)量的同基質(zhì)生物樣本原材料，經(jīng)過均質(zhì)化處理（例如尿樣：振蕩混勻、離心、過濾等步驟），制備更加均勻的原材料；準備足夠量的低本底西林瓶或聚乙烯塑料瓶；準備分液器，移液槍，真空冷凍干燥機。按照4.2要求準備符合要求的目標化學物質(zhì)儲備液。加料封裝目標化學物質(zhì)的添加可根據(jù)生物樣本原材料的性質(zhì)采取一次直接添加或分步添加。（例如血液樣本相對比較粘稠，為了增加均勻性我們可以采取分步添加。以1L血液為例，我們可以將其按3：3：4的比例分成3份，用移液槍準確定量吸取目標化學物質(zhì)儲備液添加入第一份樣本中，充分混合均勻后再依次于第二、第三份樣本混合，并充分混合均勻。）制備好的加料生物樣本用分液器準確定量分裝到各個西林瓶（或聚乙烯瓶）中，經(jīng)真空冷凍干燥箱制備成凍干粉，加蓋密封。該批次QCM全部完成加料封裝后還應給每個樣品貼上清晰的標簽，標簽內(nèi)容應包括樣品名稱和材料描述、編號、批號等內(nèi)容。輻照滅菌后-18℃冷凍保存均勻性評估從該批次QCM中隨機抽取不少于10個樣品用于均勻性檢驗。使用目標化學物質(zhì)規(guī)定/推薦測定方法程序測定，每個樣品重復測定3次。樣品的重復測定可按隨機次序進行，以降低測量飄移對均勻性評估的影響。采用單因素方差分析法對測定結(jié)果進行統(tǒng)計處理，若F＜自由度為（f1，f2）及給定顯著性水平α（通常α=0.05）的臨界值Fα（f1，f2），P>0.05，則表明樣品內(nèi)和樣品間無顯著性差異，樣品是均勻的。定值將6.3中均勻性評估研究獲得的樣本總平均值作為指示值，3倍總評均值的標準偏差建立指示值的控制限。穩(wěn)定性評估-18℃存放條件下，按照每個考察時間點（時間點的確定可參考附錄B）隨機抽取6個樣本，使用目標化學物質(zhì)規(guī)定/推薦測定方法程序測定，每個樣品重復測定3次。各時間點檢測結(jié)果與均勻性檢驗的總體均值運用t檢驗法進行統(tǒng)計分析，無顯著性差異時間點前該批次QCM的穩(wěn)定性符合要求。各時間點樣本測定前，應使用CRM等對實驗室測量程序進行校準，以降低實驗室長期再現(xiàn)性對穩(wěn)定性評估的影響。QCM復溶后于4℃保存，按照考察時間點，將樣本取出恢復至室溫，使用目標化學物質(zhì)規(guī)定/推薦測定方法程序測定，每個樣品重復測定3次。各時間點檢測結(jié)果與均勻性檢驗的總體均值運用t檢驗法進行統(tǒng)計分析，無顯著性差異時間點前該QCM的復溶穩(wěn)定性符合要求。各時間點樣本測定前，應使用CRM等對實驗室測量程序進行校準，以降低實驗室長期再現(xiàn)性對穩(wěn)定性評估的影響。樣品信息文件QCM的單個樣品除應有清晰、合適的標簽外，還應附有使用說明文件。文件信息應包括制備日期、貯存條件、有效期、預期的用途、指示值、制備單位、使用的安全注意事項等內(nèi)容。樣品的貯存/運輸/使用貯存QCM制備完成后，應嚴格按照樣品信息文件中的貯存條件來貯存，確保包裝容器密封、遠離熱源、避光和防潮。此外，還應定期監(jiān)測貯存條件（如：冰箱溫度）并記錄，以確保貯存條件合適。運輸本文件所述QCM通常無需廣泛分發(fā)，如需要運輸還有必要進行運輸穩(wěn)定性評估，可參考ISO指南35。使用生物樣本類QCM的使用應嚴格按照有效期、預期用途、使用安全注意事項等內(nèi)容進行。生物樣本類QCM啟封復溶后在一定存儲條件下重復使用，4℃冰箱冷藏條件下可以穩(wěn)定一個月，應定期監(jiān)測貯存條件（如：冰箱溫度）并記錄，以確保貯存條件合適。

（資料性）

尿中鎘QCM研制（示例）材料準備：健康人尿：經(jīng)0.22μm濾膜過濾后混合備用（1L）；水中鎘成分分析標準物質(zhì)（GBW086121000μg/mL）；西林瓶及瓶蓋（或聚乙烯瓶），分液器，真空冷凍干燥機。加工制備：尿中鎘質(zhì)量控制樣品（QCM）內(nèi)部研制的步驟：取健康人尿→過濾→混合均勻→加標充分混勻→分裝→冷凍干燥→輻照滅菌→冷凍保存→均勻性檢驗→定值→穩(wěn)定性檢驗→樣本信息成文。將1000μg/mL鎘標準溶液用1%硝酸釋成10μg/mL標準儲備液備用。取1mL10μg/mL標準儲備液備，直接加入到1L尿中，充分攪拌均勻。用分液器準確取5mL加標尿液于各個西林瓶（或聚乙烯瓶）中，分裝約200瓶左右。經(jīng)真空冷凍干燥機凍干處理，待成凍干粉后密封。該批次尿鎘全部完成加料封裝后，再逐一貼上包括“尿鎘、批號、編號”等信息的標簽。輻照滅菌后-18℃冷凍保存。均勻性評估：從該批次尿中鎘QCM中隨機抽取10瓶用于均勻性檢驗。取尿鎘QCM恢復至室溫，加入5mL純水，待溶解后充分混勻，靜置20min。按照GBZ/T307.1-2018尿中鎘的測定第1部分：石墨爐原子吸收光譜法或GBZ/T307.2-2018尿中鎘的測定第2部分：電感耦合等離子體質(zhì)譜法進行測定，每個樣品重復測定3次，測定結(jié)果見表1。樣品的重復測定應按隨機次序進行（可參考如下示例），以降低測量漂移對均勻性評估的影響。采用單因素方差分析法對測定結(jié)果進行統(tǒng)計處理，樣品間均值無顯著性差異則表明樣品是均勻的，單因素方差分析結(jié)果見表2。示例：10個樣品，重復測量3次，適合的測量方案如下：第一次測量順序：1、3、5、7、9、2、4、6、8、10第二次測量順序：10、9、8、7、6、5、4、3、2、1第三次測量順序：2、4、6、8、10、1、3、5、7、9表1尿中鎘均勻性測定結(jié)果(μg/L)石墨爐樣號 測定次數(shù)123110.099.919.84210.289.9510.30310.2510.1010.3049.689.869.96510.369.549.96610.2210.0310.2879.769.8410.30810.3810.199.8699.849.6710.32109.869.9910.41總平均值10.04標準偏差0.24表2單因素方差分析結(jié)果方差來源自由度平方和均方F單元間90.4650.0520.825重復測定201.2510.063F臨界值F0.05(9,20)=2.39。計算的F值為0.825，該值＜F臨界值，表明在0.05顯著性水平時，該批次尿中鎘QCM是均勻的。定值：將均勻性評估研究中獲得的10瓶尿中鎘QCM的總平均值作為指示值，3倍標準偏差建立指示值的控制限，本批次尿中鎘QCM的指示值及控制限為：10.04±0.72（μg/L）。穩(wěn)定性評估：-18℃冷凍條件下按照0、1個月、3個月、6個月、12個月存放時間（存放條件及時間點的選擇可參考附錄B），各時間點取出6個樣本恢復至室溫，加入5mL純水，待溶解后充分混勻，靜置20min。按照GBZ/T307.1-2018尿中鎘的測定第1部分：石墨爐原子吸收光譜法或GBZ/T307.2-2018尿中鎘的測定第2部分：電感耦合等離子體質(zhì)譜法進行測定，每個樣品重復測定3次進行測定，測定結(jié)果見表3。各時間點檢測結(jié)果與均勻性檢驗的總體均值運用t檢驗法進行統(tǒng)計分析，如無顯著性差異，此時間點前該批次尿中鎘QCM的穩(wěn)定性符合要求。表3尿中鎘穩(wěn)定性測定結(jié)果(μg/L)樣號 存放時間（月）013612110.0410.17210.20310.19410.1359.50610.31平均值10.08標準偏差0.29t0.31按下式計算t值：t=式中：x─n次測量的平均值；μ─參考值(指示值)；n─測量次數(shù)；S─n次測量結(jié)果的標準偏差。注：為了保證平均值和標準偏差的準確度，n≥6。表3結(jié)果顯示，室溫條件下存放1個月、3個月、6個月、12個月后，各時間點測定6個樣本計算所得t值均小于臨界值t(0.05,5)=2.57，各時間點平均值與參考值之間無顯著性差異，表明室溫條件下該批次尿中鎘QCM至少可穩(wěn)定存放12個月。復溶樣本穩(wěn)定性評估：取6份尿中鎘QCM恢復至室溫，加入5mL純水復溶，待溶解后充分混勻，靜置20min，于4℃冰箱保存，分別于第1天、第7天、第15天、第30天取出，恢復至室溫后，混勻，按照GBZ/T307.1-2018尿中鎘的測定第1部分：石墨爐原子吸收光譜法或GBZ/T307.2-2018尿中鎘的測定第2部分：電感耦合等離子體質(zhì)譜法進行測定，每個樣品重復測定3次，測定結(jié)果見表4。各時間點檢測結(jié)果與均勻性檢驗的總體均值運用t檢驗法進行統(tǒng)計分析，如無顯著性差異，此時間點前復溶樣本尿中鎘QCM的穩(wěn)定性符合要求。表4復溶樣本尿中鎘穩(wěn)定性測定結(jié)果(μg/L)樣號 存放時間（天）0171530110.0410.0010.109.879.87210.1110.0410.4510.45310.0210.5010.1310.13410.099.8110.3210.32510.289.8810.3310.33610.4410.119.719.71平均值10.1510.0710.1310.13標準偏差0.170.240.290.29t1.