檢驗(yàn)科血清葡萄糖測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科文件編號：JYK-3-SH-023版本/修訂號：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導(dǎo)書生效日期：20110701第4頁共4頁編寫制定日期審核審核日期：核準(zhǔn)執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-01葡萄糖測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗(yàn)申請單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請：空腹血清葡萄糖測定(縮寫GLU)，餐后2h葡萄糖測定，各種體液葡萄糖測定；組合項(xiàng)目申請：葡萄糖耐量試驗(yàn)(縮寫OGTT)。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請。2標(biāo)本采集與處理2.1標(biāo)本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中。或采用含分離膠的真空采血管。2.1.2檢驗(yàn)申請單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識符。2.1.3急診標(biāo)本采集后，在檢驗(yàn)申請單上填寫標(biāo)本采集時(shí)間。2.1.4標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。2.1.5.3無法確認(rèn)標(biāo)本與申請單對應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4抽血后室溫放置超過4h以上的標(biāo)本。2.1.5.5靜脈滴注大劑量維生素C后立即抽血的標(biāo)本。2.1.5.6其他如標(biāo)識涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2標(biāo)本保存2.2.1接收標(biāo)本后在30min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清，并及時(shí)將血清與血球分離。2.2.2標(biāo)本保存時(shí)間：不抗凝血標(biāo)本如血清未與血塊分開，共存同一試管中，室溫（15～25℃）下血清葡萄糖很不穩(wěn)定，普通冰箱中（2～8℃）穩(wěn)定1天。加氟化鈉的血液標(biāo)本室溫（15～25℃）下穩(wěn)定4h。2.2.3已完成測試的標(biāo)本保持完整的識別號，單獨(dú)分離出血清后，密閉置4～8℃冰箱內(nèi)保存7天。2.3標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛和空腹?fàn)顟B(tài)。檢查空腹血清葡萄糖的須在禁食12h以上早晨抽血。2.3.2餐后2h葡萄糖檢查，受檢者于餐后2h準(zhǔn)時(shí)抽血。2.3.3葡萄糖耐量試驗(yàn)檢查的血液標(biāo)本，在服用75克葡萄糖后，分別于0.5h、1h、2h及3h準(zhǔn)時(shí)抽血。2.3.4為了避免葡萄糖被酵解，單獨(dú)測定葡萄糖時(shí)，血標(biāo)本可氟化鈉-草酸鉀抗凝，氟化鈉用量為1.5mg/ml血。3方法原理在己糖激酶（HK）催化下，葡萄糖和三磷酸腺苷（ATP）發(fā)生磷酸化反應(yīng)，生成葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）和二磷酸腺苷（ADP）。G-6-P在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）催化下脫氫，生成6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)脂（6-PGA），同時(shí)使NADP+還原成NADPH+H+。反應(yīng)式如下：GLU+ATPG-6-P+ADPG-6-P+NADP+6-PGA+NADPH+H+反應(yīng)中NADPH的生成速率和生成量與葡萄糖濃度成正比，在波長340nm監(jiān)測吸光度的升高值(ΔA)，可計(jì)算血清中葡萄糖濃度。4試劑及其他用品4.1試劑：葡萄糖測定（HK法）試劑盒（貨號GL6211），由北京利德曼生化股份有限公司出品。4.2試劑盒保存：未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉冰箱內(nèi)穩(wěn)定14天。開蓋后避免污染。當(dāng)試劑變混濁，或者未開蓋的液體有沉淀，或空白吸光率＞0.5時(shí)，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。4.3試劑盒準(zhǔn)備：液態(tài)雙試劑型，即開即用，無特殊準(zhǔn)備。4.4試劑盒主要成分：ATP4mmol/L，NAD+3mmol/L，己糖激酶＞100U/ｍL，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶＞300U/ｍL，同時(shí)含有穩(wěn)定劑與保護(hù)劑。5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式5.1校準(zhǔn)液：Beckman-CoulterSYNCHRONLXMULTI校準(zhǔn)液(P/N442600）,其濃度可溯源至美國國家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究所（NIST）標(biāo)準(zhǔn)參考材料。5.2校準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)目：線性模式，1個校準(zhǔn)點(diǎn)。5.3校準(zhǔn)周期：校準(zhǔn)間隔時(shí)間不限。但在：①更換試劑批號或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時(shí)；②儀器進(jìn)行全面保養(yǎng)后；③儀器的重要零件更換后，進(jìn)行一次校準(zhǔn)。5.4校準(zhǔn)液重建方法：Beckman-CoulterSYNCHRONLXMULTI校準(zhǔn)液即開即用，無需特殊準(zhǔn)備。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個不同水平未定值質(zhì)控血清。6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控血清，即開即用，無需特殊準(zhǔn)備。6.3質(zhì)控品測定：在每一批標(biāo)本中測定兩個水平質(zhì)控血清各一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動生化分析儀器。8標(biāo)本檢測步驟裝載試劑→進(jìn)行校準(zhǔn)→進(jìn)行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測項(xiàng)目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測定→結(jié)果復(fù)核→報(bào)告。主要分析參數(shù)參見說明書。10結(jié)果計(jì)算葡萄糖濃度（mmol/L）＝×校準(zhǔn)液葡萄糖濃度（mmol/L）儀器根據(jù)此公式自動給出每個標(biāo)本測定結(jié)果。11檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍11.1結(jié)果的報(bào)告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報(bào)告。11.1.2報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2報(bào)告范圍：0～38.9mmol/L，超過此范圍的結(jié)果報(bào)告時(shí)必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測定的結(jié)果。A12操作性能12.1精密度：批內(nèi)CV＜5.0%,總CV＜6.0%。12.2準(zhǔn)確度：回收率99.4%～101.6%。12.3線性范圍:0～38.9mmol/L。12.4方法的有限性及干擾因素：特異性相當(dāng)高，干擾少。是葡萄糖測定的參考方法。嚴(yán)重溶血（Hb2～5.12g/L）使紅細(xì)胞內(nèi)有機(jī)磷酸酯及一些酶類釋放，消耗NADP+，可致葡萄糖測定值下降6.6～32%。13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平13.1參考范圍空腹血糖：3.9～6.1mmol/L腦脊液：兒童2.8～4.5mmol/L；成人2.5～4.5mmol/L尿液葡萄糖：24h尿糖為0.56～1.67mmol。13.2醫(yī)學(xué)決定水平血糖濃度6.12～7.00mmol/L（110～126mg/dl）為空腹血糖受損；≥7.0mmol/L（126mg/dl）為糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)；隨機(jī)血糖濃度>33.3mmol/L（600mg/dl）為糖尿病非酮癥高滲綜合癥，<2.8mmol/L（50mg/dl）考慮低血糖癥。14臨床意義14.11997年ADA（WHO）的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)中，空腹血漿GLU（FPG）≥7.0mmol/L，或OGTT2h血漿GLU≥11.1mmol/L，是糖尿病的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)。FPG濃度如超過參考范圍的上限6.1mmol/L，但低于7.0mmol/L，稱為空腹血糖異常。14.2除糖尿病外，血糖濃度升高還可發(fā)生在垂體前葉功能亢進(jìn)、生長激素或促腎上腺皮質(zhì)激素分泌過多、或腎上腺髓質(zhì)腫瘤等情況中。14.3血液葡萄糖濃度測定是糖尿病的診斷指標(biāo)，但并不是糖尿病人的較好的或必做的監(jiān)測指標(biāo)。診斷明確的糖尿病人如需評價(jià)降糖藥物的療效或調(diào)整劑量，對病情作監(jiān)測，可選用其他檢查項(xiàng)目例如定期監(jiān)測糖化血紅蛋白等。14.4病理性低血糖可因胰島β細(xì)胞增生或瘤等，使胰島素分泌過多所致；也可見于對抗胰島素的激素分泌不足的情況，如垂體前葉功能減退、腎上腺皮質(zhì)功能減退而使生長激素、腎上腺皮質(zhì)激素分泌不足等。嚴(yán)重肝病患者可因肝臟儲存糖原及糖異生功能下降，肝臟不能有效地調(diào)節(jié)血糖而出現(xiàn)低血糖。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2認(rèn)真審核每一個測定結(jié)果，審核者對發(fā)出報(bào)告結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào)告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項(xiàng)目：審核與糖化血白蛋白、糖化血清蛋白等的關(guān)系，其他一些應(yīng)用Trinder反應(yīng)的檢測項(xiàng)目如膽固醇、甘油三酯、尿酸等是否有共同降低的情況(如有此現(xiàn)象應(yīng)排除維生素C干擾的可能)。如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。16威脅生命的“緊急值”及報(bào)告規(guī)定：按危急值報(bào)告制度執(zhí)行。16.1血糖濃度＞33.3mmol/L。有可能是因胰島素缺乏引起的糖尿病性昏迷，發(fā)展為滲透性多尿伴嚴(yán)重的脫水和酮中毒。16.2血糖濃度＜2.78m