臨床免疫測定的質(zhì)量控制及結(jié)果的可比性

臨床免疫測定的質(zhì)量控制及結(jié)果的可比性《衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于醫(yī)療機構(gòu)間醫(yī)學檢驗、醫(yī)學影像檢查互認有關(guān)問題的通知》（衛(wèi)辦醫(yī)發(fā)〔2006〕32號）對于參加國家級質(zhì)量控制和省級質(zhì)量控制的、穩(wěn)定性好、質(zhì)量比較容易控制和費用較高的檢查項目，應當組織轄區(qū)內(nèi)有條件的醫(yī)院間逐步開展檢查互認工作。對于參加國家級質(zhì)量控制的檢查項目，有條件的省、自治區(qū)、直轄市之間可以探索開展檢查互認；參加省級質(zhì)量控制的檢查項目，可以在本省、自治區(qū)、直轄市范圍內(nèi)實行檢查互認。

國家醫(yī)療衛(wèi)生體制改革年中共中央、國務(wù)院提出關(guān)于深化醫(yī)藥衛(wèi)生體制改革的意見年4月，國務(wù)院發(fā)出醫(yī)藥衛(wèi)生體制五項重點改革年度主要工作安排，在“推進公立醫(yī)院改革試點”重點改革中指出的具體工作目標之一“實行同級醫(yī)療機構(gòu)檢查結(jié)果互認”。衛(wèi)生部隨后發(fā)出的通知指出，根據(jù)實際情況，合理確定開展檢查互認的項目，對于開展檢查結(jié)果互認的醫(yī)療機構(gòu)或項目要有科學、合理的認定依據(jù)。推進公立醫(yī)院改革試點規(guī)范公立醫(yī)院臨床檢查、診斷、治療、使用藥物和植（介）入類醫(yī)療器械行為，優(yōu)先使用基本藥物和適宜技術(shù)，實行同級醫(yī)療機構(gòu)檢查結(jié)果互認。適當提高醫(yī)療技術(shù)服務(wù)價格，降低藥品、醫(yī)用耗材和大型設(shè)備檢查價格。

臨床免疫檢驗的類型定量（腫瘤標志物、激素、特定蛋白、治療藥物、部分傳染病血清學標志物等）定性（傳染病血清學標志物、自身抗體等）免疫檢驗常用的方法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）全自動化學發(fā)光免疫分析時間分辨熒光免疫分析放射免疫試驗（RIA）質(zhì)量控制（QualityControl）室內(nèi)質(zhì)量控制（Internalqualitycontrol,IQC）室間質(zhì)量評價（Externalqualityassessment，EQA）實驗室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理濃度（NCU/ml)室間質(zhì)量評價（Externalqualityassessment，EQA）GBW(E)090040純化物,混合血清,提取物于載體蛋白緩沖溶液中7%可信限）的結(jié)果不多于3個。GBW(E)090045“鉤狀”效應(Hookeffect)免疫測定,與一級標準比對適用于免疫測定的標準品的一般要求對IQC應定期進行評價。ANA抗核抗體（顆粒型）室內(nèi)質(zhì)控物的質(zhì)檢(確認)已知結(jié)構(gòu)的多肽(激素和腫瘤標志物)室內(nèi)質(zhì)控物的質(zhì)檢(確認)概念的理解室內(nèi)質(zhì)控就是作質(zhì)控圖嗎？實驗室空間和工作流程的設(shè)計；儀器設(shè)備的正確使用、維護和校準；試劑方法的性能驗證及質(zhì)檢；SOP的編寫；人員培訓等。概念的理解有了試劑盒的陰性和陽性對照還需要每次試劑檢測質(zhì)控品嗎？陰性和陽性對照的功能？外加質(zhì)控品的功能？實驗室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理實驗室空間及工作流程的設(shè)計實驗室環(huán)境條件的控制：溫濕度控制設(shè)備、穩(wěn)壓或不間斷電源儀器設(shè)備及管理：酶標儀、洗板機、全自動免疫分析儀、加樣器等應建立技術(shù)檔案，并定期維護和校準實驗室環(huán)境條件的控制和監(jiān)控實驗室溫度和濕度的記錄及其意義溫度和濕度計的放置試劑冰箱標本保存冰箱標本處理（生物安全柜、離心機）標本接收洗手池實驗臺（儀器設(shè)備）實驗臺（儀器設(shè)備）圖1-2.血液篩檢血清學實驗室具體設(shè)置示意圖實驗廢棄物報告及記錄儀器設(shè)備的校準周期理想的試劑：試劑的性能驗證重復性和準確性（定量和定性）測定下限(Detectionlimit)（定性）線性范圍和可測定范圍（定量）ELISA批內(nèi)變異(<10%)和批間變異(<15-25%)

“鉤狀”效應(Hookeffect)變異體的檢測能力(HBsAg)臨床敏感性和特異性抗干擾能力理想的操作方法操作中影響測定結(jié)果的關(guān)鍵環(huán)節(jié)寫出具有可操作性的SOPSOP等于試劑盒說明書嗎？怎樣編寫SOP？XXX單位XXX實驗室XXX標準操作程序編號：啟用日期：版本：

一目的：適用范圍：職責或責任人：（方法原理）（檢測設(shè)備和試劑）（所需的環(huán)境條件）操作步驟：

1．

2．

3．

五、本操作程序變動程序：六、相關(guān)的文件七、相關(guān)的記錄表格和報告編寫人審核人批準人SOP（5W和1H）誰來做(Who)：

責任人做什么(What)：適用范圍何時（When）：適用范圍何地（Where）：適用范圍為什么做（Why）：目的如何做（How）：操作步驟人員培訓

方法原理檢測的關(guān)鍵環(huán)節(jié)儀器設(shè)備使用、維護和校準結(jié)果的分析、報告及進一步處理質(zhì)控的分析知其然又知其所以然。何時（When）：適用范圍03/062(1stIRpanel)為什么做（Why）：目的化學純（>99%）WHOanti-RNP自身抗體國際標準物質(zhì)（二）在檢測血液標本的同時，檢測一定數(shù)量（與臨床樣本的數(shù)量相適應）的已知弱陽性（與試劑宣稱的測定下限相適應）和陰性的質(zhì)控樣本Standard:文字GBW(E)090040部分純化或未純化提取物或體液血液篩檢血清學實驗室具體設(shè)置示意圖結(jié)果的分析、報告及進一步處理儀器設(shè)備的正確使用、維護和校準；低分子量化合物（類固醇、甲狀腺素）03/062(1stIRpanel)室內(nèi)質(zhì)控方法非統(tǒng)計學方法統(tǒng)計質(zhì)控方法定性測定質(zhì)控非統(tǒng)計學方法在檢測血液標本的同時，檢測一定數(shù)量（與臨床樣本的數(shù)量相適應）的已知弱陽性（與試劑宣稱的測定下限相適應）和陰性的質(zhì)控樣本檢測有效的質(zhì)控判斷方法：陽性檢測為陽性（反應性），陰性檢測為陰性（非反應性）。統(tǒng)計質(zhì)控方法定性免疫測定質(zhì)控物濃度的選擇室內(nèi)質(zhì)控物的質(zhì)檢(確認)質(zhì)控物的數(shù)量質(zhì)控規(guī)則Levey-Jennings質(zhì)控圖方法“即刻法”質(zhì)控方法“假陽性”的統(tǒng)計質(zhì)控方法Levey-Jennings質(zhì)控圖方法也稱Shewhart質(zhì)控圖，是由的Shewhart于1924年首先提出，并用于工業(yè)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。二十世紀五十年代初，Levey-Jennings將其引入臨床檢驗的質(zhì)量控制。經(jīng)Henry和Segalove的改良，即為目前常用的Levey-Jennings質(zhì)控圖。Levey-Jennings質(zhì)控圖Levey-Jennings質(zhì)控圖

基本的統(tǒng)計學含義穩(wěn)定條件下，在20個IQC結(jié)果中不應有多于1個結(jié)果超過2SD（95.5%可信限）限度；在1000個測定結(jié)果中超過3SD（99.7%可信限）的結(jié)果不多于3個。如以±3s為失控限，假失控的概率為0.3%。理想的試劑：試劑的性能驗證適當提高醫(yī)療技術(shù)服務(wù)價格，降低藥品、醫(yī)用耗材和大型設(shè)備檢查價格。如何做（How）：操作步驟實驗室空間和工作流程的設(shè)計；不能單獨使用物理化學方法定值國際標準品(IS)中作為第一級標準,二級標準可用來維持校準.年中共中央、國務(wù)院提出關(guān)于深化醫(yī)藥衛(wèi)生體制改革的意見一級標準可用來校準第二和第三級標準.Standards:物質(zhì)對用于不同類型免疫測定的一級標準的特殊要求GBW(E)090040免疫測定,與二級標準比對已知結(jié)構(gòu)的多肽(激素和腫瘤標志物)在1000個測定結(jié)果中超過3SD（99.室內(nèi)質(zhì)控物的質(zhì)檢(確認)“假陽性”的統(tǒng)計學室內(nèi)質(zhì)控方法基于日常檢驗的陽性率比值(呈正態(tài)分布)直接概率計算方法室內(nèi)質(zhì)量控制的評價IQC是一個集體活動，不光是對實驗室一次測定的有效性的判斷，也反應了實驗室測定趨勢的變化。IQC的失控不能做為處罰的依據(jù)，應建設(shè)性的找出失控的原因，針對其采取措施加以改進。對IQC應定期進行評價。結(jié)果的可比性標準化(standardization)的概念Standard:文字Standards:物質(zhì)Standardization:

通過對測定方法和檢測程序的規(guī)范化，使測定結(jié)果的量值可溯源至同一標準，從而使測定結(jié)果在不同的實驗間及不同試劑間具有可比性。量值溯源生物活性物質(zhì)的特點具有復雜的分子結(jié)構(gòu)不能單獨使用物理化學方法定值用于疾病的診療和預防測定方法工作程序標準化標準物質(zhì)可比的結(jié)果標準物質(zhì)分類國際標準物質(zhì)分級:可分為第一,第二和第三等三個等級.一級標準數(shù)量有限,可使用10-20年,是凍干品,內(nèi)含載體蛋白.一級標準可用來校準第二和第三級標準.國際標準品(IS)中作為第一級標準,二級標準可用來維持校準.國內(nèi)標準物質(zhì)分級：一級和二級。適用于免疫測定的標準品的一般要求

要求

一級標準

二級標準

三級標準來源

單一

多個

多個使用時間10-20年1-5年1-數(shù)年制備純化物于載體蛋白緩沖溶液中純化物,混合血清,提取物于載體蛋白緩沖溶液中血清或血漿,人工蛋白為基礎(chǔ)的緩沖液定值方法多中心合作研究免疫測定,與一級標準比對免疫測定,與二級標準比對貯存方式

凍干-70℃下凍存冰凍或于穩(wěn)定溶液中,可能的話凍干對用于不同類型免疫測定的一級標準的特殊要求

要求已知結(jié)構(gòu)的多肽(激素和腫瘤標志物)未知結(jié)構(gòu)的蛋白（抗體確定的腫瘤標志物）

血清蛋白

低分子量化合物（類固醇、甲狀腺素）

純度

最純的蛋白部分純化或未純化提取物或體液混合血清

化學純（>99%）定值方法氨基酸分析（物質(zhì)濃度）；稱重（質(zhì)量濃度）；比對較早的標準進行免疫測定（IU）；（生物測定，IU）國際組織的一致性結(jié)果；研制者指定的單位。國際組織的一致性結(jié)果；比對純蛋白進行免疫測定（質(zhì)量濃度）

稱重（物質(zhì)和質(zhì)量濃度）；光電比色測定。

標準物質(zhì)的單位IU/mL

ANA#11（2310）測定下限(Detectionlimit)（定性）重復性和準確性（定量和定性）7%可信限）的結(jié)果不多于3個。濃度（NCU/ml)人血清免疫球蛋白G，A和M(IgG,IgAandIgM)檢測有效的質(zhì)控判斷方法：陽性檢測為陽性（反應性），陰性檢測為陰性（非反應性）。已知結(jié)構(gòu)的多肽(激素和腫瘤標志物)冰凍或于穩(wěn)定溶液中,可能的話凍干標準化(standardization)的概念HBsAg（液體系列）自身抗體國際標準物質(zhì)（二）WHOanti-RNP免疫測定,與二級標準比對二十世紀五十年代初，Levey-Jennings將其引入臨床檢驗的質(zhì)量控制。Foot最初是一個成人的腳長？德國人異議：因人而異16個男子左腳長度的均值抗原、抗體國際標準物質(zhì)項目研制者發(fā)布年編號濃度（IU/瓶）HBsAgNIBSC1985(ad)1stIS100（IU/ml)NIBSC2003(adw2,genetypeA)00/588(2stIS)33

NIBSC200303/062(1stIRpanel)抗HBsSanquin1977w104250

HIV-1P24NIBSC199290/6361000

抗-HAVSanquin1998w104149抗-HEVNIBSC199095/58450抗梅毒血清NIBSC1958HS49抗弓形體IgGNIBSC200301/60020抗風疹抗體NIBSC1996RUBI-1-941600定量測定的標準物質(zhì)項目編號研制者人血清補體C1q,C4,C5,B因子，和總功能補體CH50W1032Sanquin人血清免疫球蛋白G，A和M(IgG,IgAandIgM)67/086NIBSC人血清免疫球蛋白E75/502NIBSC甲胎蛋白（AFP）NIBSC前列腺特異抗原（PSA）（90：10）前列腺特異抗原（PSA），游離96/668NIBSC癌胚抗原（CEA）73/601NIBSC絨毛膜促性腺激素75/589NIBSC人胰島素66/304NIBSC自身抗體國際標準物質(zhì)（一）項目編號濃度（IU/瓶）研制者ANA（均質(zhì)型）WHO66/233100CLB抗dsDNA抗體WHOWo/80200CLBRFWHO-64/1100CLBAPFWHO-64/1100CLBFITC抗HuIgWHO480010100CLB抗RNP抗體WHOanti-RNPCLB抗甲狀腺球蛋白抗體WHO65/0931000NIBSC抗胰島細胞抗體97/550200NIBSC抗谷氨酸脫羧酶抗體97/550100NIBSC自身抗體國際標準物質(zhì)（二）項目編號濃度（IU/瓶）研制者抗酪氨酸磷酸酶抗體97/550100NIBSC抗心磷脂抗體93/7680.85NIBSC狼瘡抗凝物96/522NIBSCANA（均質(zhì)型、核周型）抗dsDNA抗體ANA#1（IS2072）AF-CDCANA（顆粒型）抗SSB/La抗體ANA#2（IS2073）AF-CDCANA抗核抗體（顆粒型）ANA#3（IS2074）AF-CDC抗U1-RNP抗體ANA#4（IS2075）AF-CDC抗Sm抗體ANA#5（IS2076）AF-CDC自身抗體國際標準物質(zhì)（三）項目編號濃度（IU/瓶）研制者抗核抗體（核仁型）抗fibrillarin抗體（U3-RNP）ANA#6（IS2100）AF-CDC抗SSA\Ro抗體ANA#7（2105）AF-CDC抗核抗體（著絲點型）