凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn)VIP

凝集反響實(shí)驗(yàn)抗原抗體反響的類(lèi)型1．沉淀反響√2．凝集反響3．補(bǔ)體參與的反響4.中和反響5.免疫標(biāo)記凝集反響

是指顆粒性抗原(紅細(xì)胞、細(xì)菌等)或可溶性抗原〔或抗體〕與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后與相應(yīng)抗體〔或抗原〕發(fā)生特異性結(jié)合，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。在免疫學(xué)技術(shù)中，凝集反響可分為直接凝集反響和間接凝集反響兩大類(lèi)。凝集反響的類(lèi)型一、直接凝集反響(directagglutination)是指細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集。反響中的抗原稱為凝集原，參與反響的抗體稱為凝集素。將的可溶性抗原〔或抗體〕吸附或耦聯(lián)到與免疫無(wú)關(guān)的載體顆粒外表,形成致敏顆粒,再與相應(yīng)抗體〔或抗原〕作用,在適宜的電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)肉眼所見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，稱之。載體不同可分：紅細(xì)胞－間接血凝試驗(yàn)聚苯乙烯乳膠－間接乳膠凝集試驗(yàn)活性炭－間接炭凝集試驗(yàn)。二、間接凝集反響1、正向間接凝集反響用于檢測(cè)標(biāo)本中的抗體抗體載體微球可溶性抗原免疫微球免疫微球凝集本試驗(yàn)簡(jiǎn)便、快速、敏感性和特異性高、本錢(qián)低。2、反向間接凝集反響用于檢測(cè)標(biāo)本中的抗原本法快速、敏感性和特異性高+凝集抗原載體顆?？贵w抗體致敏顆粒A、正向：診斷試劑為抗原致敏的載體顆粒及相應(yīng)抗體，用于檢測(cè)標(biāo)本中是否存在與致敏抗原相同的抗原。

3、間接凝集抑制反響又稱為膠乳凝集抑制試驗(yàn)抗體待測(cè)抗原免疫微球免疫微球不凝集結(jié)果：免疫微球不凝集為陽(yáng)性(標(biāo)本)第一種情況：抗體免疫微球免疫微球凝集標(biāo)本中無(wú)抗原結(jié)果：免疫微球凝集為陰性第二種情況：3間接凝集抑制反響B(tài)、反向：診斷試劑為抗體致敏的載體顆粒及相應(yīng)抗原，用于檢測(cè)標(biāo)本中是否存在與致敏抗體相同的抗體。間接凝集反響的應(yīng)用間接凝集反響具有快速、敏感、操作簡(jiǎn)便、無(wú)需特殊的實(shí)驗(yàn)設(shè)備等特點(diǎn)，而且能用于抗原或抗體的測(cè)定，因此在臨床檢驗(yàn)中廣為應(yīng)用?！惨弧晨乖臋z測(cè)人絨毛膜促性腺激素檢測(cè)乙型肝炎外表抗原〔HBsAg〕的間接血凝試驗(yàn)。〔一〕抗體的檢測(cè)

梅毒抗體類(lèi)風(fēng)濕因子RF一、正向間接凝集試驗(yàn)梅毒快速血漿反響素試驗(yàn)RapidPlasmaReagin〔RPR〕RPR試驗(yàn)感染梅毒后，首先產(chǎn)生IgM型抗梅毒螺旋體抗體，感染梅毒4周左右產(chǎn)生IgG型抗梅毒螺旋體抗體，即使經(jīng)足量抗梅治療，梅毒螺旋體抗原消失后很長(zhǎng)時(shí)間，IgG抗體仍可通過(guò)記憶細(xì)胞的作用繼續(xù)產(chǎn)生，甚至終生在血清中可測(cè)出梅毒的免疫性〔一〕用RPR旋轉(zhuǎn)儀水平轉(zhuǎn)動(dòng)卡8分鐘，100轉(zhuǎn)/分鐘然后3分鐘內(nèi)在光線充足處判斷結(jié)果。〔westernblottest〕〔FTA-ABS〕在免疫學(xué)技術(shù)中，凝集反響可分為直接凝集反響和間接凝集反響兩大類(lèi)。臨床上采用高效的抗HCGβ亞基可用作臨床篩選，并可作半定量，用于療效觀察。一、直接凝集反響(directagglutination)一、梅毒快速血漿反響素試驗(yàn)〔RPR〕2、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)本方法能快速簡(jiǎn)單地測(cè)定梅毒病人血清中的反響素，可用于梅毒診斷和監(jiān)測(cè)梅毒病人療效。2、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)結(jié)果：免疫微球凝集為陰性可用作臨床篩選，并可作半定量，用于療效觀察。結(jié)果：免疫微球凝集為陰性梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)：用梅毒螺旋體作為抗原檢測(cè)血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其敏感性和特異性均高于非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，但不能用作療效觀察的指標(biāo)。梅毒的免疫性〔二〕另一種具有抗體性質(zhì)的物質(zhì)叫反響素〔reagin〕，是梅毒螺旋體破壞人體組織過(guò)程中釋放出的一種抗原性心磷脂刺激機(jī)體所產(chǎn)生的抗體。反響素一般在感染后5～7周產(chǎn)生。經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。梅毒感染的實(shí)驗(yàn)室診斷〔一〕非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)〔二〕梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)〔三〕梅毒確認(rèn)試驗(yàn)

非梅毒螺旋體血清試驗(yàn)這類(lèi)試驗(yàn)的抗原分為心磷脂、卵磷脂和膽固醇的混懸液，用來(lái)檢測(cè)抗心磷脂抗體。由于這些試驗(yàn)具有相同的標(biāo)準(zhǔn)化抗原，所以敏感性相似?？捎米髋R床篩選，并可作半定量，用于療效觀察。非特異性類(lèi)脂抗體測(cè)定1、性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)〔VDRL〕2、不加熱血清反響素試驗(yàn)〔USR〕3、快速血漿反響素試驗(yàn)〔RPR〕4、甲苯胺紅試驗(yàn)〔TRUST〕梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)：用梅毒螺旋體作為抗原檢測(cè)血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其敏感性和特異性均高于非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，但不能用作療效觀察的指標(biāo)。1、梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)〔TPHA〕2、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)〔TPPA)3、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)〔TP-ELISA〕

特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)梅毒確認(rèn)試驗(yàn)〔三〕

1、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)〔FTA-ABS〕2、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)〔westernblottest〕一、梅毒快速血漿反響素試驗(yàn)〔RPR〕[實(shí)驗(yàn)原理]梅毒患者血清中存在著能與VDRL(類(lèi)脂質(zhì))抗原發(fā)生凝集反響的反響素，本試劑利用這一原理，將VDRL抗原吸附于活性炭顆粒外表，當(dāng)待測(cè)血清中存在反響素時(shí)，即與其發(fā)生凝集反響，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的黑色凝塊。一、梅毒快速血漿反響素試驗(yàn)〔RPR〕[用途]本方法能快速簡(jiǎn)單地測(cè)定梅毒病人血清中的反響素，可用于梅毒診斷和監(jiān)測(cè)梅毒病人療效。HCG是一種不隨胎盤(pán)重量增加而分泌增長(zhǎng)的胎盤(pán)激素經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。凝集反響的類(lèi)型2、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)可用作臨床篩選，并可作半定量，用于療效觀察。3，先兆流產(chǎn)和不完全流產(chǎn)的診斷和監(jiān)測(cè)經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。B、反向：診斷試劑為抗體致敏的載體顆粒及相應(yīng)抗原，用于檢測(cè)標(biāo)本中是否存在與致敏抗體相同的抗體。反響素一般在感染后5～7周產(chǎn)生。6，血凝抑制試驗(yàn)：載體不同，吸附于RBC上一、直接凝集反響(directagglutination)4、甲苯胺紅試驗(yàn)〔TRUST〕在免疫學(xué)技術(shù)中，凝集反響可分為直接凝集反響和間接凝集反響兩大類(lèi)。一、梅毒快速血漿反響素試驗(yàn)〔RPR〕假設(shè)試驗(yàn)出現(xiàn)明顯的凝集為陰性反響，即HCG陰性；定性實(shí)驗(yàn)呈弱陽(yáng)性或陽(yáng)性者必須做定量實(shí)驗(yàn)才能了解患者血清中的抗體滴度，具體方法如下：將待檢血清用生理鹽水作倍比稀釋〔原血清，1：2，1：4，1：8，1：16，1：32〕然后對(duì)每個(gè)稀釋按定性實(shí)驗(yàn)方法再進(jìn)行測(cè)定并判斷結(jié)果。感染梅毒4周左右產(chǎn)生IgG型抗梅毒螺旋體抗體，即使經(jīng)足量抗梅治療，梅毒螺旋體抗原消失后很長(zhǎng)時(shí)間，IgG抗體仍可通過(guò)記憶細(xì)胞的作用繼續(xù)產(chǎn)生，甚至終生在血清中可測(cè)出是指細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集。二、間接凝集抑制反響

又稱為膠乳凝集抑制試驗(yàn)而β亞基與這些激素有較大的差異，不存在于其他激素中，決定了生物活性和免疫活性的高特異性。2、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)條件：在23?c—29?c度的環(huán)境下進(jìn)行。1、性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)〔VDRL〕本法快速、敏感性和特異性高1，ELISA：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)載體不同可分：二、間接凝集抑制反響

又稱為膠乳凝集抑制試驗(yàn)3，先兆流產(chǎn)和不完全流產(chǎn)的診斷和監(jiān)測(cè)RapidPlasmaReagin〔RPR〕2、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)〔TPPA)試劑與器材RPR試劑梅毒陽(yáng)性對(duì)照梅毒陰性對(duì)照紙片專(zhuān)用滴管，針頭，橡皮頭操作方法

1.分別吸取30微升梅毒陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照均勻鋪加在紙卡的兩個(gè)圓圈中。2.另吸取30微升待檢血清均勻鋪加在紙卡的另一個(gè)圓圈中。3.用專(zhuān)用針頭，滴管吸取RPR試劑，分別垂直滴加30微升于上述血清中。4.用RPR旋轉(zhuǎn)儀水平轉(zhuǎn)動(dòng)卡8分鐘，100轉(zhuǎn)/分鐘然后3分鐘內(nèi)在光線充足處判斷結(jié)果。結(jié)果判斷1.陰性反響〔—〕：可見(jiàn)均勻的抗原顆粒而無(wú)凝集物。2.弱陽(yáng)性反響〔+——++〕：可見(jiàn)較小的黑色凝集物。3.陽(yáng)性反響〔+++——++++〕：可見(jiàn)中等或較大的黑色凝塊，溶液清亮。實(shí)驗(yàn)討論1.實(shí)驗(yàn)條件：在23?c—29?c度的環(huán)境下進(jìn)行。2.RPR試劑在使用前應(yīng)充分搖勻。3.血清中參加試劑后充分振蕩使其混勻。4.定性實(shí)驗(yàn)呈弱陽(yáng)性或陽(yáng)性者必須做定量實(shí)驗(yàn)才能了解患者血清中的抗體滴度，具體方法如下：將待檢血清用生理鹽水作倍比稀釋〔原血清，1：2，1：4，1：8，1：16，1：32〕然后對(duì)每個(gè)稀釋按定性實(shí)驗(yàn)方法再進(jìn)行測(cè)定并判斷結(jié)果。實(shí)驗(yàn)討論5.本實(shí)驗(yàn)只為過(guò)篩試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)呈弱陽(yáng)性或陽(yáng)性反響者，需結(jié)合臨床進(jìn)行綜合分析判斷，同時(shí)再做特異性密螺旋體實(shí)驗(yàn)加以確診。二、間接凝集抑制反響

又稱為膠乳凝集抑制試驗(yàn)

妊娠試驗(yàn)—HCG測(cè)定HCG：

人絨毛膜促性腺激素，胎盤(pán)合體滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌的一種糖蛋白激素妊娠4-10周分泌量最大HCG是一種不隨胎盤(pán)重量增加而分泌增長(zhǎng)的胎盤(pán)激素HCG的結(jié)構(gòu)

結(jié)構(gòu)中包括α與β兩個(gè)非共價(jià)鍵結(jié)合的亞基。α亞基與LH，F(xiàn)SH，及TSH的亞基相似，能與這些激素產(chǎn)生交叉免疫反響而β亞基與這些激素有較大的差異，不存在于其他激素中，決定了生物活性和免疫活性的高特異性。臨床上采用高效的抗HCGβ亞基現(xiàn)試劑盒為HCG-β試劑陰性反響〔—〕：可見(jiàn)均勻的抗原顆粒而無(wú)凝集物。經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。用RPR旋轉(zhuǎn)儀水平轉(zhuǎn)動(dòng)卡8分鐘，100轉(zhuǎn)/分鐘然后3分鐘內(nèi)在光線充足處判斷結(jié)果?！踩趁范敬_認(rèn)試驗(yàn)專(zhuān)用滴管，針頭，橡皮頭感染梅毒后，首先產(chǎn)生IgM型抗梅毒螺旋體抗體，可用作臨床篩選，并可作半定量，用于療效觀察。結(jié)果：免疫微球凝集為陰性由于這些試驗(yàn)具有相同的標(biāo)準(zhǔn)化抗原，所以敏感性相似。將的可溶性抗原〔或抗體〕吸附或耦聯(lián)到與免疫無(wú)關(guān)的載體顆粒外表,形成致敏顆粒,再與相應(yīng)抗體〔或抗原〕作用,在適宜的電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)肉眼所見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，稱之。在免疫學(xué)技術(shù)中，凝集反響可分為直接凝集反響和間接凝集反響兩大類(lèi)。檢測(cè)乙型肝炎外表抗原〔HBsAg〕的間接血凝試驗(yàn)。〔二〕梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)本試驗(yàn)簡(jiǎn)便、快速、敏感性和特異性高、本錢(qián)低。2、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)〔TPPA)HCG檢測(cè)方法

1，ELISA：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)2，單克隆抗體膠體金試驗(yàn)3，化學(xué)發(fā)光免疫法4，放射免疫技術(shù)5，膠乳凝集抑制實(shí)驗(yàn)6，血凝抑制試驗(yàn)：載體不同，吸附于RBC