病理檢驗技術(shù)（第3版）課件 第6章 組織制片技術(shù)

組織制片技術(shù)第六章學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握常用固定液的配制和應(yīng)用。2.熟練進行洗滌、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、封片等操作。3.熟悉組織切片制作的基本程序。4.了解常用組織切片的種類。思維導(dǎo)圖我們將切片制作所采用的一系列技術(shù)，稱為組織病理學(xué)技術(shù)或病理組織制片技術(shù)。病理組織制片技術(shù)一般包括以下基本技術(shù)流程：取材、固定、洗滌、脫水、透明、浸蠟（透蠟）、包埋、切片、展片、貼片、烤片、染色、封片等。第一節(jié)組織塊的處理一

取材

按照病理檢驗的目的和要求，切取適當(dāng)大小和數(shù)量的組織塊，用于制作組織切片的過程稱為取材。

（一）取材的配合

病理檢驗技術(shù)員取材時的職責(zé)是：配合病理醫(yī)師對病變組織進行肉眼檢查，準(zhǔn)確記錄病理醫(yī)生檢查時描述的病理改變，按照病理檢驗的需要，選擇和確定取材的部位和塊數(shù)。

病理檢驗技術(shù)人員要及時對切取的組織進行編號或標(biāo)記，并在病理送檢單上做好記錄，以便病理醫(yī)生鏡檢時核對。取材后的標(biāo)本應(yīng)加足固定液，按編號存放，以備復(fù)查之用。

（二）注意事項

1.避免組織結(jié)構(gòu)變形2.組織塊大小適當(dāng)3.及時取材

4.標(biāo)明包埋方向5.染色、包裹小標(biāo)本6.充分暴露病灶7.確定取材部位

8.清除多余組織

9.重復(fù)取材（補取）

10.認(rèn)真核對

組織取材第一節(jié)組織塊的處理二固定和固定液將組織浸入某些化學(xué)試劑，使組織細(xì)胞內(nèi)所含物質(zhì)盡量保持在生活狀態(tài)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過程，稱為固定。所使用的化學(xué)試劑稱為固定液。（一）固定目的

1.防止自溶和腐敗2.凝固或沉淀細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)

3.硬化組織

4.增加組織的折光率

常用固定方法有以下幾種。

1.浸泡固定法

將標(biāo)本直接放入固定液中進行固定的方法，稱為浸泡固定法。2.注射、灌注固定法

將固定液注射或灌注到血管或腔道內(nèi)，使組織、器官被充分固定的方法稱為注射、灌注固定法。注射固定法常用于體積過大組織的固定，而灌注固定法則用于整個臟器或尸體的固定。

3.微波固定法

將組織塊浸入固定液，置于醫(yī)用微波儀內(nèi)，在微波的作用下加速組織固定的方法，稱為微波固定法。

4.蒸汽固定法

用固定液加熱后產(chǎn)生的蒸汽對組織進行固定的方法，稱為蒸汽固定法。主要用于可溶性物質(zhì)、小而薄的標(biāo)本、膜性組織及血液或細(xì)胞涂片的固定。常用的固定液有甲醛、三聚甲醛和鋨酸等。（三）常用固定液一種好的固定液，應(yīng)具有以下特性：①滲透力強，能迅速滲入組織內(nèi)部；②不會使組織

過度收縮或膨脹；③能硬化、固化組織，使細(xì)胞成分的形態(tài)和位置與生活狀態(tài)時相似；④使組織對染料產(chǎn)生較強的親和力，并產(chǎn)生較佳的折光率。固定液可分為單純固定液和混合固定液兩類。單純固定液

是指由一種化學(xué)物質(zhì)組成的固定液。此類固定液包括：甲醛、乙醇、乙酸、重鉻酸鉀、苦味酸、丙酮、氯化汞、鉻酸、鋨酸等，2.混合固定液

是指由多種化學(xué)物質(zhì)混合組成的固定液。（1）中性甲醛液：免疫組化最常用的固定液。固定時間一般為6～24小時。此液中甲醛的濃度為6%-8%。配方：40%甲醛150～200ml

磷酸二氫鈉4g

磷酸氫二鈉13g

蒸餾水

800～850ml（2）乙醇-醋酸-甲醛液（AAF液）：AAF液兼有固定和脫水的作用，經(jīng)過AAF液固定后的組織塊可直接移入95%乙醇進行脫水。配方：95%或無水乙醇85ml

醋酸

5ml40%甲醛10ml（3）乙醇-甲醛液（AF液）：由乙醇和甲醛混合而成，兼有固定及脫水作用，適用于皮下組織中肥大細(xì)胞的固定。固定后的組織塊不必經(jīng)低濃度逐級乙醇脫水，可直接移入95%乙醇脫水，也不用水洗，縮短了脫水時間。配方：95%或無水乙醇

90ml、

40%甲醛

10ml（4）

Bouin液：是一種常規(guī)用于活檢標(biāo)本固定的良好固定液，適用于大多數(shù)組織的固定，尤其適用于結(jié)締組織染色。配方：飽和苦味酸水溶液

75ml40%甲醛水溶液25ml

醋酸

5ml即三者的比例依次為15：5：1。（5）

Zenker液：適用于一般組織固定，胞核和胞質(zhì)染色均清晰，對免疫球蛋白染色最好，也可用于病毒包涵體、某些腫瘤標(biāo)本的固定。配方：重鉻酸鉀2.5g

氯化汞

5g

加蒸餾水至100ml

醋酸

5ml（用時加入）（四）固定的注意事質(zhì)1.及時固定

2.固定容器宜大

3.固定液應(yīng)足量

4.防止組織變形

5.確定恰當(dāng)?shù)墓潭〞r間

組織固定第一節(jié)組織塊的處理三洗滌、脫水和透明（一）洗滌組織經(jīng)過固定處理后，用水或乙醇等將未與組織結(jié)合的固定液及沉淀物清洗掉的過程，稱為洗滌。1.洗滌的目的

洗滌的目的是為了去掉未與組織結(jié)合的固定液及沉淀物。組織脫水前需用流水沖洗固定后的組織塊（使用特殊固定液除外），對陳舊性標(biāo)本一定要用流水徹底沖洗，盡可能降低組織的酸性程度，并減少甲醛色素。對使用混合固定液固定的組織更應(yīng)及時沖洗，不可擱置太久，以有利于后續(xù)各程序的進行。2.洗滌的方法（1）含水固定液的洗滌方法：常用的含水固定液是甲醛溶液，用自來水沖洗即可。尸檢組織、大塊組織水洗時間約為4小時，小塊組織沖洗時間為2～4小時。固定時間短的新鮮標(biāo)本，可縮短水洗時間。固定時間較長的組織，則需要長時間流水沖洗。對穿刺組織、腦等細(xì)小易碎的組織，為不損壞組織，以浸泡方式洗滌為宜，浸泡時應(yīng)反復(fù)多次換水，浸泡時間應(yīng)根據(jù)具體情況而定。（2）含乙醇固定液的洗滌方法：用乙醇或乙醇混合液固定的組織，一般不需要洗滌。如果需要洗滌，應(yīng)使用與固定液中的乙醇濃度相近或略低的乙醇洗滌，不可用濃度相差太大的乙醇沖洗，也不能直接用水沖洗。（3）特殊固定液的洗滌方法：使用的固定液不同，洗滌的方法也不一樣。鉻酸、鋨酸固定液，用流水沖洗12～24小時，應(yīng)注意洗滌干凈，否則會影響染色。重鉻酸鉀固定液，用流水沖洗12～24小時，或用亞硫酸鈉溶液沖洗，也可用1%氨水溶液洗滌?？辔端峁潭ㄒ?，無論是乙醇溶液或水溶液，都應(yīng)用流水徹底沖洗，并用50%或70%乙醇浸洗，以洗掉組織內(nèi)苦味酸所留的黃色。浸洗時可將少量碳酸鋰飽和水溶液滴入乙醇中，直至乙醇不變色為止。氯化汞固定液，含氯化汞固定液固定的組織，常常形成菱形結(jié)品（氯化亞汞）或不規(guī)則的物質(zhì)（金屬汞），使組織變脆，影響制片和染色質(zhì)量，因此，必須進行脫汞處理，以除去含汞的沉淀物。（二）脫水將組織內(nèi)的水分用某些化學(xué)試劑置換出來的過程稱為脫水。所使用的化學(xué)試劑稱為脫水劑。1.脫水的目的

組織塊經(jīng)固定和水洗后，含有大量水分，而水與苯、二甲苯等透明劑不混溶，故組織在透明前必須用能與透明劑相混溶的脫水劑（如乙醇等），把組織內(nèi)的水分置換出來，為下一步的透明做準(zhǔn)備。2.常用的脫水劑

脫水劑能同時以任何比例與水和透明劑混合。常用的脫水劑有乙醇、正丁醇、丙酮等，其中以乙醇最為常用。3.脫水方法

一般把脫水劑配成各種濃度，自低到高濃度依次進行，使組織中所含水分逐漸減少，直至被脫水劑取代。4.自動脫水機

（三）透明用某些化學(xué)試劑（如二甲苯等）將組織中的脫水劑置換出來，以利于浸蠟和包埋，因組織塊浸入這些試劑后常呈半透明狀，故稱透明（或媒浸）。所使用的化學(xué)試劑稱為透明劑。1.透明的目的

透明是制片過程中很重要的環(huán)節(jié)。大多數(shù)脫水劑不能和包埋劑（如石蠟）混溶，而透明劑既可與脫水劑混溶，又能和包埋劑（如石蠟）混溶，能起到橋梁作用。脫水后的組織必須通過透明劑置換出脫水劑后才能使石蠟浸入組織塊，以達(dá)到包埋組織的目的。當(dāng)組織被透明劑充分浸漬時，光線可透過，組織呈現(xiàn)不同程度的透明狀態(tài)。如果組織經(jīng)過透明處理后不透明，可能與組織脫水不徹底有關(guān)，需重新脫水。需要特別指出的是，用火棉膠包埋的組織，常用乙醚處理，組織不呈半透明狀。2.常用的透明劑

可使用的透明劑較多，有苯、甲苯、二甲苯、三氯甲烷、汽油、香柏油等，多數(shù)透明劑對人體有害，使用時應(yīng)注意防護。

3.常用透明方法

將脫水后的組織塊先用乙醇-二甲苯混合液處理或直接浸入透明劑中

置換透明劑2～3次即能達(dá)到透明目的。透明時間的長短取決于標(biāo)本的種類和組織塊的厚薄，一般活檢標(biāo)本透明15～20分鐘即可。若組織不呈透明狀，主要原因是組織脫水不徹底，可能與組織太厚、透明時間不夠及組織本身性質(zhì)有關(guān)。全自動脫水機第一節(jié)組織塊的處理四浸蠟經(jīng)過透明的組織塊在熔化的石蠟中浸漬，使組織中的透明劑被完全置換出來的過程，稱為浸蠟（透蠟），用于浸蠟的石蠟被稱為浸透劑。用其他浸透劑（如明膠、火棉膠、碳蠟等）滲入組織內(nèi)部置換透明劑的過程稱為浸透或透入。臨床病理檢驗中使用最普遍的浸透劑為石蠟，故有“浸蠟”之稱。全自動脫水機（一）浸蠟的目的浸蠟的目的是用石蠟等支持物去置換，替代組織中的透明劑，使組織具有一定的硬度，有利于切片。（二）浸透劑的種類常用的浸透劑有石蠟、明膠、火棉膠、樹脂、碳蠟等，它們既是浸透劑，又是包埋劑。（三）浸蠟的方法石蠟是最常使用的浸蠟劑。石蠟有高熔點和低熔點之分，一般使用的是熔點為56℃以上的石蠟。要顯示酶和保存抗原活性時，則需使用熔點為54℃以下的石蠟。常規(guī)制片普遍用熔點為56℃～58℃的石蠟。組織塊的厚度不同，使用的化學(xué)藥品不同，脫水、透明、浸蠟時間也不盡相同處理步驟操作步驟時間/h<2mm2～4mm4～6mm脫水70%乙醇13380%乙醇13390%乙醇

13395%乙醇Ⅰ11.5295%乙醇Ⅱ123無水乙醇Ⅰ11.52無水乙醇Ⅱ123透明二甲苯Ⅰ0.512二甲苯Ⅱ0.51.52浸蠟石蠟Ⅰ0.51.52石蠟Ⅱ123石蠟Ⅲ123表

不同厚度組織塊的脫水、透明、浸蠟操作步驟及時間處理步驟操作步驟時間/min脫水丙酮Ⅰ5丙酮Ⅱ30丙酮Ⅲ30透明三氯甲烷Ⅰ30三氯甲烷Ⅱ30浸蠟石蠟Ⅰ15石蠟Ⅱ20石蠟Ⅲ20表

活檢組織脫水、透明、浸蠟時間處理步驟操作步驟時間/h尸檢組織活檢組織脫水70%乙醇4～101～280%乙醇4～101～290%乙醇

4～101～295%乙醇Ⅰ4～101～295%乙醇Ⅱ4～101～2無水乙醇Ⅰ2～40.5～1無水乙醇Ⅱ2～40.5～1透明二甲苯Ⅰ1～215～30分鐘二甲苯Ⅱ0.5～115分鐘浸蠟石蠟Ⅰ0.5～10.5～1石蠟Ⅱ1～21～2石蠟Ⅲ1～21～2表

尸檢、活檢組織脫水、透明及浸蠟時聞第一節(jié)組織塊的處理五包埋用石蠟或其他包埋劑將組織包成一定形狀，使其具有一定的硬度和韌度，便于切成薄片的過程稱為包埋。用于包埋的物質(zhì)分水溶性（如碳蠟、明膠等）和非水溶性（如石蠟、火棉膠等）兩類。（一）包埋的目的用包埋劑將經(jīng)過浸透劑浸透的組織塊包起，可使組織具有一定的硬度和韌性，有利于切成薄片，也有利于組織塊的妥善保存。包埋機（二）包埋方法不同的包埋劑，其包埋方法也不相同，常用的包埋方法有以下幾種。1.石蠟包埋法

石蠟包埋法為切片技術(shù)中最常用的包埋法。用石蠟包埋的組織塊常稱為蠟塊，蠟塊經(jīng)編號處理后易于收藏保存。石蠟包埋法又可分為下列幾種。（1）常規(guī)石蠟包埋：（2）胃鏡標(biāo)本的包埋（3）體液標(biāo)本的包埋（4）快速石蠟包埋法2.火棉膠包埋法

3.碳蠟包埋法4.明膠包埋法5.石蠟半薄切片包埋法包埋蠟塊固體石蠟與熔蠟箱包埋框與包埋模具（三）注意事頂不同的包埋劑，有不同的包埋方法和要求，注意事項也不盡相同，以下是一些帶共性的問題值得注意。（1）確定包埋面：①實質(zhì)性臟器的組織及腫瘤組織，一般以組織塊最大面作為包埋面②囊、管狀結(jié)構(gòu)的組織：如血管和各種囊腫壁等，以橫斷而為包埋面。③有被覆上皮的組織，如皮膚和消化道、呼吸道、泌尿道等自然管道，其包埋面應(yīng)垂直于上皮面，橫斷面朝下包埋。若在同一蠟塊中包埋數(shù)塊管壁組織，組織塊應(yīng)平行豎埋，且黏膜面（或內(nèi)膜）的方向應(yīng)一致。④有特殊要求的組織按預(yù)先標(biāo)記的包埋面包埋。（2）同一蠟塊內(nèi)包埋多個組織塊時，組織的性質(zhì)應(yīng)相同（如同屬軟組織），組織塊的大小、厚薄要相近，且包埋方向要一致，組織塊間的距離不能太大。（3）難切的組織（如皮膚、骨等）及需切連片的組織均應(yīng)單獨包埋。（4）神經(jīng)，脊髓及需要定向包埋的組織應(yīng)注意組織塊的相互關(guān)系。（5）操作應(yīng)迅速（尤在室溫較低的情況下），以防組織塊變冷、蠟液凝結(jié)或產(chǎn)生氣泡。若組織塊與蠟液不能很好地凝固在一起，將使組織與蠟分離而影響切片。（6）若將管腔或空洞標(biāo)本與小標(biāo)本包埋在一個蠟塊內(nèi)時，不能將小標(biāo)本放入管腔或空洞標(biāo)本內(nèi)。第二節(jié)切片機具與切片一

切片機切片機是切制病理切片的專用機器，能將各種組織切成數(shù)微米厚的薄片，用于顯微鏡察。（一）切片機的種類及使用1.按結(jié)構(gòu)分類

根據(jù)結(jié)構(gòu)的不同，切片機可分為（1）旋轉(zhuǎn)式切片機（2）滑動式切片機（3）冰凍切片機（4）振動式切片機2.按用途分類

根據(jù)用途的不同，切片機可分為石蠟切片機、火棉膠切片機及冰凍切片機等。輪轉(zhuǎn)式切片機冰凍切片機（二）切片機的維護切片機是一種精密儀器，必須嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。每次使用后，都應(yīng)充分擦拭，確保清潔，并涂以優(yōu)質(zhì)機油加以保護，防止生銹。不用時套上機罩，避免切片機各部件受灰塵和有機溶劑污染，不要隨意拆卸零件，有故障及時送修，以免影響切片的準(zhǔn)確度。很少使用的切片機也應(yīng)注意經(jīng)常維護和保養(yǎng)，防止生銹、長霉。第二節(jié)切片機具與切片二

切片刀切片刀是切片機的重要部件，是切制良好切片的重要設(shè)施。若切片刀不鋒利、刀刃有缺口或彎曲，以及保養(yǎng)不良等常造成切片困難，切出的切片質(zhì)量難以保證。（一）切片刀的種類切片刀的長短不一，一般有4cm、8cm、14cm、18cm、20～24cm等多種規(guī)格。根據(jù)結(jié)構(gòu)式樣又可將切片刀分為四種。1.平凹型（a型）

又稱單面凹型2.平楔型（c型）

也稱雙平型3.雙凹型（d型）4.薄型

（二）刀背套與刀柄刀片固定裝置第二節(jié)切片機具與切片三

磨刀與被刀磨刀有手工磨刀和磨刀機磨刀兩種方法。1.手工磨刀（2）注意事項：①磨石表面要平滑，刀刃平貼石面。②兩手用力要均勻，大小一致。③推動刀的速度不宜快，刀在磨石上要平穩(wěn)前進。④刀刃要全部均勻磨到，保持刀刃平直。⑤應(yīng)把磨石全部磨到，以免磨石表面變成馬鞍形狀。

2.被刀

磨好的切片刀有時需用被刀帶做進一步處理，使刀鋒更加鋒利并耐用。按磨刀的方式用專門的皮帶對磨好的切片刀進行處理的方法，稱為被刀（或蓖刀）。用于被刀的專用皮帶稱為被刀帶。自動磨刀機3.磨刀機磨刀

用磨刀機磨刀可克服手工磨刀費時費力的缺點。第二節(jié)切片機具與切片四

切片（一）石蠟切片用切片機將蠟塊切成適宜厚度的薄片的過程稱為石蠟切片。切片厚度一般為4～6μm，也可切到1～2μm，需觀察病變的連續(xù)性時可切連片。蠟塊若保管得當(dāng)，可長期保存。石蠟切片是病理檢驗中最常用的一種制片方法。1.切片前的準(zhǔn)備（1）蠟塊準(zhǔn)備（2）切片用品準(zhǔn)備：切片刀、載玻片、展片烤片儀、配制蛋白甘油、其他用品：準(zhǔn)備好大、中號優(yōu)質(zhì)狼毫毛筆、眼科彎鑷、記號筆（鉆石筆或鉛筆）、冰塊等。攤片烤片機2.切片制作過程

石蠟切片多使用旋轉(zhuǎn)式切片機，操作步驟如下：（1）將切片刀安裝于刀架上，調(diào)整好刀的角度，一般為20°～30°。（2）將蠟塊固定在切片機組織塊夾具上。（3）調(diào)整組織塊夾具的調(diào)節(jié)螺旋，使蠟塊切面與刀口平行。向前推動刀架使切片刀靠近蠟塊，調(diào)整至合適位置，一般刀刃與蠟塊切面的夾角呈5°～10°，并旋緊固定螺旋。（4）先用較大進刀量（約20μm）粗切蠟塊，待組織最大切面暴露，再將厚度調(diào)至要求厚度（一般為4～6μm）。（5）左手持毛筆，右手旋轉(zhuǎn)切片機旋轉(zhuǎn)輪。連續(xù)轉(zhuǎn)動旋轉(zhuǎn)輪，切下的蠟片相連成帶狀，需要將其展平整才能裱貼在載玻片上，此過程稱為展片。展片時，左手用毛筆輕輕托起蠟帶下端，右手用眼科彎鑷將蠟帶夾起，正面向上輕放于供展片的溫水中，并用鑷子幫助展平。展片困難時，可先將蠟帶放入30%乙醇中初展，再用載玻片撈起蠟帶放入溫水中。待蠟帶中的組織完全展平后，即可將其撈出，稱為撈片。（6）直接用載玻片撈片，選擇的蠟帶應(yīng)完整、無劃痕、厚薄均勻，蠟帶與玻片之間不能有氣泡。貼片時要注意切片的整齊美觀，一般載玻片右側(cè)留著寫編號，切片貼附于載玻片左側(cè)1/3與2/3交界處。（7）貼片后，立即寫上編號，在空氣中略微晾干即可烤片。（8）將載玻片在烤片儀上烘烤片刻或直接放入60℃烤箱烘烤30分鐘。3.注意事項（1）切片機應(yīng)安放平穩(wěn)，各個零件和螺絲應(yīng)旋緊。切片刀、蠟塊應(yīng)固定牢固。若有振動會使切片出現(xiàn)皺褶、橫紋或厚薄不均。（2）切片刀不鋒利或有缺口，會使切片卷起或皺起，不能連成蠟帶。刀口不清潔，附有蠟屑時，易造成切片斷裂、破碎、不完整。（3）切片刀與蠟塊切面的傾斜角以5°～10°為宜，過大則切片上卷，不易連成蠟帶；過小則切片易皺起。（4）由于切片機切組織時是由下往上切，易使組織出現(xiàn)刀紋裂縫。為得到完整的切片，放置蠟塊時應(yīng)將組織硬脆難切的部分（如皮膚組織的表皮、胃腸組織的漿膜面）放在上端。（5）對小標(biāo)本的蠟塊進行粗切時，設(shè)置的厚度不能過大，速度宜慢，不要修切得太多，以免將主要病變部位甚至整個組織塊修切掉。（6）搖動旋轉(zhuǎn)輪的轉(zhuǎn)動速度不可過快，用力應(yīng)均勻、平穩(wěn)，以40～60r/min為宜。若遇硬化過度的組織及肝、腦脾等，動作尤應(yīng)輕柔，避免產(chǎn)生振動而使切片出現(xiàn)碎裂現(xiàn)象。（7）在切片過程中，由于切片刀與蠟塊相互摩擦?xí)a(chǎn)生熱量，導(dǎo)致蠟塊溫度升高（在夏季尤甚），往往造成切片困難。可用冰塊涂抹切片刀和蠟塊切而，使石蠟保持合適的硬度以利于切片。（8）展片溫度一般為42℃～48℃，烤片溫度一般60℃～70℃。并應(yīng)及時清除水中的蠟屑等雜物，止污染切片。（9）血凝塊、血栓等易脫片的組織，應(yīng)使用預(yù)先涂有蛋白甘油的載玻片撈片或在展片儀水盒內(nèi)加入適量的蛋白甘油，防止脫片。蛋白甘油應(yīng)薄而均勻地涂滿載玻片的大部分（約2/3）。（10）對血凝塊和皮膚組織應(yīng)及時烤片，烤片溫度應(yīng)稍低；腦組織切片撈出后應(yīng)直立晾干，再行烤片，否則會產(chǎn)生氣泡。4.常規(guī)石蠟切片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

中華醫(yī)學(xué)會《臨床技術(shù)操作規(guī)范病理學(xué)分冊》對常規(guī)石蠟包埋—HE染色切片質(zhì)量提出了基本要求，制定了評判切片質(zhì)量的基本標(biāo)準(zhǔn)（切片質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn)：①甲級片：≥90分（優(yōu)）；②乙級片：75～89分（良）；③丙級片：60～74分（基本合格）；④≤59分（不合格）。（二）快速石蠟切片在不具備制作冷凍切片或組織太小、太碎而不能制作冷凍切片的情況下，可采用快速石蠟切片法進行術(shù)中快速病理診斷，一般10～15分鐘即可出片。1.切片制作方法（1）取材：組織取材應(yīng)薄，厚度一般不超過2mm。為保證充分脫水，組織塊固定后還要進行修切，使其厚度為1.5mm左右。（2）包埋：采用固體蠟包埋法，即用加熱的無齒鑷在預(yù)制的蠟塊上熔出相應(yīng)的小孔，將組織塊放入其內(nèi)，燙平蠟塊表面，冷卻硬化后即可切片。（3）切片：按常規(guī)石蠟切片的方法進行切片、撈片、貼片。（4）脫蠟：貼片后用酒精燈對切片略加烘烤，使切片上的石蠟熔化，水分烤干后，移入二甲苯脫蠟，經(jīng)95%乙醇浸洗后移入水中，進行水化處理。（5）染色：切片水化后即可進行快速HE染色。應(yīng)先在切片上滴加蘇木素液將組織覆蓋，然后用酒精燈加熱約30秒，水洗，之