細(xì)胞染色專題

關(guān)鍵詞：DAPI，胞漿，胞核，示蹤，細(xì)胞器飛躍的載體干貨|一眼就讓人愛了愛了的各色熒光染料合集在實驗中，為了能夠清楚地觀察到目標(biāo)組織或細(xì)胞，通常會采用染色的方式進(jìn)行直觀驗證。面對形態(tài)各異的組織和細(xì)胞，研究學(xué)者們想到了多種多樣的染色方法以佐證自己的實驗結(jié)果。但是實際操作中也會遇到各種各樣的的困難：選購的染料類不符合染色的細(xì)胞區(qū)域和應(yīng)用類型；歷經(jīng)數(shù)月/年保存下來的樣本形式不符合預(yù)期染色實驗的要求；實驗儀器不符合熒光染料的拍攝要求，導(dǎo)致樣本和染料的浪費；染料的配色不準(zhǔn)確，導(dǎo)致不能實現(xiàn)細(xì)胞的多方位染色。通常，細(xì)胞染色類型主要分為如下五大類，對應(yīng)的染料類型如下：染色類型染料類型細(xì)胞核染色核染料胞漿染色胞漿染料胞膜染色膜染料細(xì)胞示蹤染色細(xì)胞示蹤染料區(qū)室和細(xì)胞器染色細(xì)胞器染料分類品名貨號描述核酸染料Ethidium

Homodimer-1

(EthD-1)

BMD0060溴乙啡錠二聚體是一種紅色的高親和性熒光核酸染料,檢測溶液中或者解體細(xì)胞中的核酸（DNA/RNA），不能穿過活細(xì)胞膜。Hoechst

33258BMD0061細(xì)胞核染色（DNA）

一般是細(xì)胞固定后再染色。Hoechst

33342

BMD0062細(xì)胞核染色（DNA）毒性更小，可活細(xì)胞直接染色。DAPI

BMD00634',6-二脒基-2-苯基吲哚是細(xì)胞核染色（DNA）。細(xì)胞質(zhì)染料Calcein

AM

BMD0064活細(xì)胞染色5(6)-CFDA/5(6)-CFDA,

SE

BMD0066可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞示蹤染料，不僅可用于細(xì)胞增殖的體外實驗，還可用于追蹤細(xì)胞在體內(nèi)的分裂增殖過程(酯酶活性)。細(xì)胞膜染料DiI

(DiIC18(3))

BMD0071橙色，親脂性膜染料DiO(DiOC18(3))

BMD0072綠色，親脂性膜染料DiD

(DiIC18(5))

BMD0073紅色，親脂性膜染料DiR

(DiIC18(7))

BMD0074深紅色，親脂性、近紅外膜染料，配合其他多色使用示蹤染料LiveCellTrackingKitKTA1002對活細(xì)胞示蹤，記錄細(xì)胞的生長、分裂和移動等活動區(qū)室細(xì)胞器染料TraKine?線粒體染色試劑盒KTC4003，KTC4004線粒體染色

TraKine?F-actin染色試劑盒及其染料KTC4008/9，BMD0082/83/84細(xì)胞骨架染色TraKine?

Pro

活細(xì)胞微管染色試劑盒(紅色、綠色)KTC4100，KTC4110活細(xì)胞微管探針TraKine?

Pro

活細(xì)胞溶酶體染色試劑盒(紅色、綠色)KTC4200，KTC4210活細(xì)胞溶酶體探針而樣本制備對于細(xì)胞染色效果也是至關(guān)重要，如下為四種樣本類型的主要處理方法：對于貼壁細(xì)胞，有2種方法：

先將潔凈的蓋玻片在70%乙醇中進(jìn)行浸泡處理，然后用干凈無菌的鑷子放置到培養(yǎng)皿中，用無菌PBS洗去殘留的乙醇。待細(xì)胞接近長成單層后取出蓋玻片，操作小心，防止細(xì)胞脫片（可用多聚賴氨酸浸泡蓋玻片）。將細(xì)胞在培養(yǎng)皿或者孔板內(nèi)鋪板，控制細(xì)胞生長密度后進(jìn)行染色。對于懸浮細(xì)胞，有2種方法：先在懸浮液中進(jìn)行固定步驟，然后把細(xì)胞滴加在載玻片上，干燥后細(xì)胞會緊貼在載玻片上。先在懸浮液中進(jìn)行固定和染色步驟，離心洗脫，然后用移液管移至盒式玻片進(jìn)行后續(xù)染色步驟。對于冷凍切片：切片放置在載玻片上后，可以直接進(jìn)行固定等后續(xù)操作。

對于石蠟切片：免疫熒光中石蠟切片較少，要先進(jìn)行脫蠟和抗原修復(fù)處理。不同染料對儀器類型的選擇性也是千差萬別的，如下為細(xì)胞染色實驗的常用儀器：為了實現(xiàn)細(xì)胞的多方位染色，我們常常需要進(jìn)行多種染料的配合染色，其中最為經(jīng)典的是細(xì)胞器與細(xì)胞核染料的多重染色，如下圖所示：Q1:TraKine?Pro活細(xì)胞微管染色試劑盒（綠色熒光）與Hoechst33342配合染色：1.Hoechst33342與該染料可以配合使用，且都幾乎無毒性，不影響細(xì)胞存活；2.這個tubulin-green染料熒光是比較穩(wěn)定的，熒光激發(fā)累計時長可以到達(dá)350s以上，拍200幀以上的圖片。Hoechst33342的穩(wěn)定性更高一些。Q2:Trakine?pro染料是否可以和普通的染料一起染？是否會影響探針透膜？如果可以，建議染色順序怎樣，染色步驟是否需要調(diào)整？Trakine?pro探針可以和普通探針一起染色，但針對需要用到buffer的探針，要先孵育需要用到buffer的探針，再孵育其它探針。針對不需要buffer的透膜探針，可以和客戶想用的其它探針一起孵育?？偨Y(jié)：當(dāng)想要兩個或三個探針共標(biāo)一個細(xì)胞的時候，所有用到buffer的探針可以一起先孵育（可共用buffer），自身透膜的探針后孵育。細(xì)胞染色技術(shù)還有很大的發(fā)展空間，將來會應(yīng)用到更多的實驗領(lǐng)域，在生物行業(yè)發(fā)展中具有舉足輕重的地位，正持續(xù)獲得越來越多生物學(xué)家的關(guān)注。abbkine的技術(shù)專家為了給廣大讀者提供學(xué)習(xí)生物知識的平臺，經(jīng)過不懈努力，將多種高端生物實驗的干貨整理出來，后期陸續(xù)在微信公眾號中刊登，請廣大熱愛科學(xué)的讀者持續(xù)關(guān)注Abbkine公眾號。Abbkine專注于蛋白學(xué)和細(xì)胞學(xué)領(lǐng)域，致力于創(chuàng)新和研發(fā)各類抗體、蛋白質(zhì)、分析試劑與試劑盒，以期成為生命科學(xué)研究發(fā)展、藥物研發(fā)等領(lǐng)域的關(guān)鍵推動者。我們?yōu)槟峁┑鞍缀兔庖哐芯坑脩糇钕矏鄣漠a(chǎn)品，從免疫學(xué)基礎(chǔ)產(chǎn)品，如蛋白提取定量，到免疫學(xué)實驗的內(nèi)參標(biāo)簽抗體、一抗及二抗等；細(xì)胞研究用戶最喜愛的產(chǎn)品，從用于檢測細(xì)胞狀態(tài)的染料及試劑盒，細(xì)胞器提取試劑盒，細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)染色示蹤及細(xì)胞代謝檢測產(chǎn)品，到用于細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞因子及蛋白類檢測試劑盒，只為助力您的研究事業(yè)！產(chǎn)品推薦BMD0060，BMD0061，BMD0062，BMD0063，BMD0064，B