免疫毒性及評價分析

1、免疫毒性及其評價,2010.6,免疫毒性及其評價,2,免疫毒理學(xué)： Immunotoxicology,研究外源性因素對機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的有害作用及其機(jī)理。,2010.6,免疫毒性及其評價,3,免疫毒理學(xué)（Immunotoxicology）：是毒理學(xué)與免疫學(xué)間的邊緣學(xué)科，也是毒理學(xué)的一個新分支，它是研究外源化學(xué)物質(zhì)（xenobiotics）和物理因素對機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的有害作用及其機(jī)理。,2010.6,免疫毒性及其評價,4,免疫毒理學(xué)的主要研究內(nèi)容,（一）闡明免疫毒性及其機(jī)制 （二）進(jìn)行免疫毒性的危險度評價 （三）完善和發(fā)展免疫毒性評價方法,2010.6,免疫毒性及其評價,5,外源化學(xué)物質(zhì)對免疫

2、系統(tǒng)的影響：,外源化學(xué)物質(zhì)對免疫系統(tǒng)的影響表現(xiàn)在三個方面，即免疫抑制、超敏反應(yīng)和 自身免疫反應(yīng)。,2010.6,免疫毒性及其評價,6,外源化學(xué)物質(zhì)對免疫系統(tǒng)的影響：,免疫抑制（immunosuppression 、 immunodepression） 超敏反應(yīng)（hypersensitivity） 自身免疫（autoimmunity）,2010.6,免疫毒性及其評價,7,外源化學(xué)物質(zhì)對免疫系統(tǒng)的影響,2010.6,免疫毒性及其評價,8,型超敏反應(yīng)即速發(fā)型超敏反應(yīng),2010.6,免疫毒性及其評價,9,吸入,花粉、塵螨、真菌孢子、動物毛屑。,過敏性哮喘,型超敏反應(yīng)即速發(fā)型超敏反應(yīng),表現(xiàn)：,過敏性鼻炎

3、,2010.6,免疫毒性及其評價,10,“麩質(zhì)過敏癥(Celiac Disease)”，又稱乳糜瀉。 麩質(zhì)過敏癥的病人容易出現(xiàn) 嚴(yán)重腹瀉、腹痛、脹氣、糞便酸臭的癥狀。,型超敏反應(yīng)即速發(fā)型超敏反應(yīng),2010.6,免疫毒性及其評價,11,表現(xiàn)： 溶血性貧血 粒細(xì)胞減少癥 血小板減少性紫癜,型超敏反應(yīng)（細(xì)胞毒型或溶細(xì)胞型）：,2010.6,免疫毒性及其評價,12,慢性腎小球腎炎 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 “農(nóng)民肺”（超敏性肺炎）：“蘑菇工人肺” “麥芽工人肺” “紙漿工人肺”,型超敏反應(yīng)（免疫復(fù)合物型）：,2010.6,免疫毒性及其評價,13,接觸性皮炎,型超敏反應(yīng)（遲發(fā)型超敏反應(yīng)）：,2010.6,免疫毒性

4、及其評價,14,山梨酸鉀-無色至白色鱗片狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，無臭或稍有臭味。在空氣中不穩(wěn)定。能被氧化著色。分子量150.22。有吸濕性。易溶于水、乙醇。,型超敏反應(yīng)即遲發(fā)型超敏反應(yīng),2010.6,免疫毒性及其評價,15,引起免疫抑制的外源化學(xué)物：,2010.6,免疫毒性及其評價,16,2010.6,免疫毒性及其評價,17,寂靜的春天 蕾切爾卡遜 著 有這樣一個村鎮(zhèn)，那里的一切生物同其周圍的環(huán)境看來相處的非常和諧： 它坐落在象棋盤般排列整齊的繁榮的農(nóng)場的中央，周圍是莊稼地，小山下果樹 成林。春天，繁花點(diǎn)綴在綠色的原野上；秋天，透過松林的屏風(fēng)，橡樹、楓樹 和白樺樹散射出火火焰般的彩色光輝；冬天，道

5、路兩旁也是美麗的，無數(shù)的小 鳥飛來，潔凈而清涼的小溪從山中流出，形成了生活著鱔魚的綠蔭池塘！ 小鎮(zhèn)一直是這個樣子，直到許多年前的一天，第一批居民來到這里修建房 舍，挖井筑倉，情況才發(fā)生了變化。從那時起，一個奇怪的陰影就籠罩了這個 地區(qū)，一切都發(fā)生了變化，不祥的朕兆降臨到村落里：神秘莫測的疾病襲擊了 成群的小雞，牛羊紛紛病倒、死亡，到處是死神的幽靈；農(nóng)夫們訴說著他們多 病的家庭，醫(yī)生們則為病人中出現(xiàn)的新病感到困惑不安。一種奇怪的寂靜籠罩 了這個地方。園中覓食的鳥兒不見了，曾經(jīng)蕩漾著烏鴉、鴿子的合唱的早晨沒 有了，只有一片寂靜覆蓋著田野、樹林和沼地。曾經(jīng)是多么吸引人的小路的兩 旁，現(xiàn)在排列著仿佛是

6、火災(zāi)浩劫后的焦黃枯萎的植物。甚至小溪也失去了生命， 因?yàn)樗械挠暌呀?jīng)死亡。 這里已被生命所拋棄，留下的只是一個寂靜的春天，無聲無息.,2010.6,免疫毒性及其評價,18,中文名稱 滴滴涕(DDT),英文名稱 2,2-bis(4-Chlorophenyl)-1,1,1-trichloroethane 別 名 2,2-雙(4-氯苯基)-1,1,1-三氯乙烷(即p,p-DDT)； 侵入途徑：吸入、食入、經(jīng)皮吸收。,2010.6,免疫毒性及其評價,19,可誘發(fā)超敏反應(yīng)的外源性化學(xué)物質(zhì)：,2010.6,免疫毒性及其評價,20,常春藤聯(lián)盟由美國東北部之八所學(xué)校組合而成：布朗大學(xué)、哥倫比亞大學(xué)、康奈爾大學(xué)

7、、達(dá)特茅斯學(xué)院、哈佛大學(xué)、賓夕法尼亞大學(xué)、普林斯頓大學(xué)、及耶魯大學(xué)。,2010.6,免疫毒性及其評價,21,常春藤聯(lián)盟各校?；?2010.6,免疫毒性及其評價,22,哈佛一角,2010.6,免疫毒性及其評價,23,2010.6,免疫毒性及其評價,24,哥倫比亞大學(xué),2010.6,免疫毒性及其評價,25,康乃爾大學(xué),2010.6,免疫毒性及其評價,26,布朗大學(xué),2010.6,免疫毒性及其評價,27,可致自身免疫病的外源性化學(xué)物質(zhì),2010.6,免疫毒性及其評價,28,免疫毒性的主要特點(diǎn),（一）免疫系統(tǒng)易感性 （二）毒性反應(yīng)復(fù)雜性 1.反應(yīng)的選擇性 2.反應(yīng)呈雙相性 3.免疫毒性劑量-反應(yīng)關(guān)系的

8、復(fù)雜性,2010.6,免疫毒性及其評價,29,（一）免疫系統(tǒng)易感性,例如： 1. 如小鼠長期接觸低劑量甲基汞、四乙基鉛或砷酸鈉，在未出現(xiàn)其他系統(tǒng)毒性時就可表現(xiàn)出免疫功能改變 。 2. 原蘇聯(lián)學(xué)者研究大氣和水體中化學(xué)污染物的毒性時，發(fā)現(xiàn)許多污染物引起變態(tài)反應(yīng)的濃度比出現(xiàn)一般毒性作用的濃度低若干數(shù)量級。,2010.6,免疫毒性及其評價,30,（二）毒性反應(yīng)復(fù)雜性,1.反應(yīng)的選擇性 很多外來化合物可選擇性地?fù)p傷免疫系統(tǒng)的不同部位或免疫細(xì)胞的不同亞類。 例如：皮質(zhì)類固醇損傷輔助T細(xì)胞，而環(huán)孢菌素對各類T細(xì)胞均有損傷作用。,2010.6,免疫毒性及其評價,31,（二）毒性反應(yīng)復(fù)雜性,2.反應(yīng)呈雙相性 同

9、一外源性化學(xué)物質(zhì)在不同的染毒方式下（染毒劑量、途徑及檢測時間等）對機(jī)體免疫可產(chǎn)生免疫抑制或免疫增強(qiáng)兩種效應(yīng)， 例如：在抗原致敏前后給實(shí)驗(yàn)動物腹腔注射鎘，對動物抗體生成細(xì)胞（PFC）分別產(chǎn)生促進(jìn)及抑制效應(yīng)。,2010.6,免疫毒性及其評價,32,外源性化學(xué)物質(zhì)免疫毒性的檢測,2010.6,免疫毒性及其評價,33,一、免疫毒性檢測方法,（一）免疫病理學(xué)檢查 （二）免疫功能評價 （三）超敏反應(yīng)與自身免疫反應(yīng)的檢測,2010.6,免疫毒性及其評價,34,觀察試驗(yàn)動物免疫器官（胸腺、骨髓、脾臟、和淋巴結(jié)）的大體形態(tài)、臟器系數(shù)，常規(guī)染色后進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。,（一）免疫病理學(xué)檢查,2010.6,免疫毒性及

10、其評價,35,（一）免疫病理學(xué)檢查,1.觀察免疫器官的大體形態(tài)、大小/重量 和臟器系數(shù)。 2. 組織病理學(xué)檢查 3. 檢測淋巴細(xì)胞表面標(biāo)記,2010.6,免疫毒性及其評價,36,熒光激活細(xì)胞分類儀（fluorescence activated cell sotor, FACS）是用于流式細(xì)胞術(shù)的一種自動分析儀器，它將高度特異性的單克隆抗體與流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合在一起 。 目前用這種技術(shù)對T、B淋巴細(xì)胞、NK等細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群即T輔助細(xì)胞（Th）及T抑制細(xì)胞（Ts）之比進(jìn)行檢測。,檢測淋巴細(xì)胞表面標(biāo)記,2010.6,免疫毒性及其評價,37,熒光激活細(xì)胞分類儀（fluorescence activa

11、ted cell sotor, FACS）是用于流式細(xì)胞術(shù)的一種自動分析儀器，它將高度特異性的單克隆抗體與流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合在一起 。,2010.6,免疫毒性及其評價,38,因此T淋巴細(xì)胞亞群的檢測對控制這些疾病的發(fā)生、發(fā)展、了解發(fā)病機(jī)制、指導(dǎo)臨床治療都有極其重要的理論意義和臨床意義，它已成為臨床檢驗(yàn)的一項(xiàng)重要指標(biāo)。,2010.6,免疫毒性及其評價,39,常用的三種方法： （1）淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) （2）細(xì)胞毒性T細(xì)胞殺傷試驗(yàn)（CTL ） （3）遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)（DTH）,3. 細(xì)胞免疫功能評價,2010.6,免疫毒性及其評價,40,（1）淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn),淋巴細(xì)胞在體外經(jīng)絲裂原刺激后可發(fā)生增殖，

12、是檢測B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞功能的一個重要方法。 常用的絲裂原有： 植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）主要刺激T淋巴細(xì)胞； 金黃色葡萄球菌（SAE）、大腸桿菌脂多糖（LPS）主要刺激B淋巴細(xì)胞。,2010.6,免疫毒性及其評價,41,（1）淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn),觀察淋巴細(xì)胞增殖的方法主要有： 形態(tài)學(xué)方法 放射性核素?fù)饺敕?比色法,2010.6,免疫毒性及其評價,42,形態(tài)學(xué)方法,T淋巴細(xì)胞在體外經(jīng)有絲分裂原（植物血凝素，PHA）或特異性抗原刺激后，可發(fā)生由小淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變成體積較大、代謝旺盛，并能進(jìn)行分裂的淋巴母細(xì)胞。母細(xì)胞化過程中可產(chǎn)生一系列變化如細(xì)胞變大、細(xì)胞漿擴(kuò)大，出現(xiàn)空泡、核仁明顯

13、、核染色質(zhì)疏松等。通過母細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，可以了解機(jī)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)。 形態(tài)學(xué)方法簡便易行，便于基層實(shí)驗(yàn)室推廣采用，但判讀結(jié)果受主觀因素影響較大。,2010.6,免疫毒性及其評價,43,原理： 淋巴細(xì)胞在體外經(jīng)絲裂原刺激后可發(fā)生增殖，是檢測B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞功能的一個重要方法。,淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn),2010.6,免疫毒性及其評價,44,放射性核素?fù)饺敕?原理 T淋巴細(xì)胞在絲裂原刺激下發(fā)生增殖，DNA和RNA合成明顯增加，如在培養(yǎng)液中加入3H胸腺嘧啶核苷（3HTdR），通過其摻入到淋巴細(xì)胞DNA合成的量來判斷淋巴細(xì)胞增殖的程度。,2010.6,免疫毒性及其評價,45,放射性核素?fù)饺敕?方法評注 該方法是一種檢測淋巴細(xì)胞增殖客觀、靈敏的方法，但需有較昂貴的液體閃爍儀，并有同位素污染的問題，在應(yīng)用上有一定困難。在整個實(shí)驗(yàn)中應(yīng)避免同位素污染。,2010.6,免疫毒性及其評價,46,比色法,顏色反應(yīng)法（MTT 法） T淋巴細(xì)胞經(jīng)絲裂原刺激后，發(fā)生增殖，在細(xì)胞培養(yǎng)68h后加入MTT 增殖細(xì)胞通過線粒體水解酶將MTT 分解為蘭紫色結(jié)晶被稱作甲臢（formazan）,根據(jù)顏色深淺來判斷細(xì)胞的增殖。 MTT： 3 (4,5 dimethy1-thiazo1-zyl) 2.5-diphenyl tetrazolium bromide)，四甲基偶氮唑鹽,2010.6,免疫毒性及