生物安全柜的選擇、使用及維護

1、生物安全柜的選擇、使用及維護,李 仁 清 博士 北京市疾病預(yù)防控制中心 2007年10月,依 據(jù),GB 194892007實驗室生物安全通用要求 實驗室生物安全手冊（第三版，2004） ISO 151902003醫(yī)學(xué)實驗室安全要求 YY0569-2005 生物安全柜（2005.7.18） JG170-2005 生物安全柜（2005.3.25） 實驗室生物安全指南（第三版，2004） 生物危害一級防護：生物安全柜的選擇、安裝和使用（第二版，2000.9） 微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全手冊（第四版，1999.4）,目 的,掌握生物安全柜的選擇、放置、使用和維護 熟悉生物安全柜的檢測方法,需要解決

2、的六個問題,為什么選擇生物安全柜？ 選擇什么樣的生物安全柜？ 怎樣放置生物安全柜？ 怎樣使用生物安全柜？ 怎樣維護生物安全柜？ 怎樣檢測生物安全柜？,選擇生物安全柜的理由,工作對象具有生物危害 原代培養(yǎng)物、菌毒種以及診斷性標本等 -具有潛在感染性的實驗材料 屬于人間傳染的病原微生物名錄中第一、二、三和四類微生物,人間傳染的病原微生物名錄,類與級對應(yīng)表,-GB19489-2004實驗室生物安全通用要求,第一類,第二類,第三類,第四類,選擇生物安全柜的理由,容易產(chǎn)生氣溶膠的工作行為 對液體或半流體進行搖動、傾注或攪拌操作時， 將液體滴加到固體表面上或另一種液體中時， 在對瓊脂板劃線接種、用吸管接種

3、細胞培養(yǎng)瓶， 采用多道加樣器將感染性試劑的混懸液轉(zhuǎn)移到微量培養(yǎng)板中， 對感染性物質(zhì)進行勻漿及渦旋振蕩， 對感染性液體進行離心， 進行動物操作時。,選擇生物安全柜的理由,生物安全柜能夠阻止工作中所產(chǎn)生的氣溶膠對外環(huán)境或者操作者本身產(chǎn)生危害，還可以減少樣本之間由于氣溶膠產(chǎn)生的交叉污染。,生物安全柜基本工作原理,定向氣流： 風(fēng)幕 HEPA濾器： 一種一次性使用， 框架內(nèi)有多重褶迭 的干性過濾材料的過濾器，對0.3微米氣溶膠的過濾效 能達到99.97%。 保證排出氣體和內(nèi)循環(huán)氣體的無菌狀態(tài)。,生物安全柜的選擇,要素： 樣品的生物危害 第一、二、三和四類病原微生物 保護樣品 I級生物安全柜不保護樣品 其

4、他 是否涉及到揮發(fā)性、放射性核素或化學(xué)品,生物安全柜的選擇（一）,生物安全柜的選擇（二）,II級A2型生物安全柜,生物安全柜的選擇（三）,生物安全柜的寬度：工作需要；空間 費用：安全柜本身；運輸費用；附件費用（支架，紫外燈，椅子等）；排風(fēng)和送風(fēng)系統(tǒng)： 風(fēng)機和管道（II級B2） 認證： NSF 49 美國 EN12469 歐洲 YY05692005 中國,生物安全柜放置,五個遠離點（氣流） 門 風(fēng)扇 空調(diào) 開著的窗戶 人員活動頻繁的區(qū)域 擺放要求 穩(wěn)固的平臺或支架 兩側(cè)、后面和上端留30cm,視頻,反面,教材,生物安全柜的使用要求,個人防護要求 柜內(nèi)物品的擺放 紫外燈 明火 工作前準備 工作中操

5、作及溢出處理 工作結(jié)束后處理,生物安全柜的使用,個人防護要求： 在使用生物安全柜時必須穿個人防護服，戴手套（手套應(yīng)套在隔離衣的外面） 最好帶口罩和帽子，根據(jù)需要帶防護眼罩或者面罩。,視頻,生物安全柜的使用,生物安全柜內(nèi)物品擺放原則 按照從潔凈區(qū)到污染區(qū)的方向擺放 所有物品盡可能放在工作臺后部 將廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶等體積較大的物品放在柜內(nèi)某一側(cè) 前進氣格柵不能被紙、儀器設(shè)備或者其他物品阻擋,生物安全柜的使用,生物安全柜的使用,對紫外燈的三點要求： 每周進行清潔，除去可能影響殺菌效果的灰塵和污垢 每次生物安全柜的認證，要檢查紫外線強度，以確保有適當(dāng)?shù)墓獍l(fā)射量 房間中有人時一定要

6、關(guān)閉紫外燈，以保護眼睛和皮膚，避免因不慎暴露而造成傷害,生物安全柜的使用,避免使用明火，原因有三： 明火可造成生物安全柜的氣流紊亂，干擾氣流模式 可損壞HEPA過濾器 處理揮發(fā)性物品和易燃物品時易造成危險,生物安全柜的使用,工作前需要準備的內(nèi)容： 首先紫外燈照射30分鐘 關(guān)紫外燈，打開安全柜的日光燈和風(fēng)機，用消毒劑對生物安全柜的內(nèi)表面進行消毒擦拭 將實驗中需要用到的物品集中用消毒劑擦拭后放在臺面相應(yīng)位置上（切記勿阻擋風(fēng)口?。?等待5min，凈化工作區(qū)的空氣污染物,視頻,生物安全柜的使用,工作時操作規(guī)范： 雙臂垂直緩慢進入前面的開口，在生物安全柜中等待大約一分鐘，以使安全柜調(diào)整完畢后才可對物品進

7、行處理。 所有操作應(yīng)在離前窗10cm以外的工作區(qū)進行。 廢棄物應(yīng)丟棄在生物安全柜內(nèi)的處理容器中,視頻,生物安全柜的使用,操作時注意事項： 避免胳膊在前開口處快速移動和頻繁進出。 盡量避免污染的物品進入潔凈區(qū)。 在生物安全柜內(nèi)進行操作時，不能進行文字工作。 盡量減少操作者身后的人員活動。,視頻,生物安全柜的使用,溢出處理： GB194892007實驗室生物安全通用要求中生物安全柜內(nèi)溢出時的處理方法 滴狀溢出或體積不足1 mL 的，可簡單地用消毒劑擦洗。,生物安全柜的使用,大量溢出，則要做特殊的處理： 1、 使生物安全柜保持開啟狀態(tài)。 2、 在溢出物上覆蓋浸有消毒劑的吸水材料，作用大約10分鐘以發(fā)

8、揮消毒作用。 3、 在安全柜內(nèi)對污染的手套消毒后，脫下手套。如果衣服已經(jīng)污染，也要先脫下消毒。穿戴干凈的手套和衣服作如下進一步的清潔工作。,生物安全柜的使用,4、 用消毒劑噴灑或擦拭安全柜內(nèi)壁、工作表面以及前視窗的內(nèi)側(cè)。作用20 min后，擦干消毒劑并將擦拭物置于生物危害袋中。 5、 如果溢出情況需要浸泡接液槽，則不得現(xiàn)場清理接液槽。應(yīng)報告實驗室主管后采用適當(dāng)?shù)臍怏w消毒方式。,生物安全柜的使用,6、 將所有清理用物品以及防護服進行高壓消毒。用消毒肥皂和水洗手和暴露皮膚。 7、 立即通知實驗室主管。如果溢出物流入安全柜內(nèi)，可能需要對安全柜進行更為廣泛的消毒處理。,視頻,生物安全柜的使用,工作結(jié)束

9、后的要求： 將安全柜繼續(xù)運行至少3min來完成“凈化”過程。 將柜內(nèi)物品移出前，應(yīng)使用有效的消毒劑擦拭 每天實驗結(jié)束后，對生物安全柜的內(nèi)壁和臺面進行擦拭。 等待5分鐘后，關(guān)閉前窗，關(guān)燈，關(guān)風(fēng)機，紫外燈照射30分鐘。,視頻,生物安全柜的維護,保持生物安全柜表面清潔和無污染狀態(tài) 用70%酒精或者合適的消毒劑擦拭內(nèi)壁和工作臺面； 如果使用漂白劑等腐蝕性消毒劑后，需要用無菌水再次進行擦拭除去殘余的消毒劑； 定期抬起工作臺面對其下面的區(qū)域進行清潔； 消毒后，用玻璃清潔器對前窗玻璃和紫外燈進行清潔。,生物安全柜的維護,定期保養(yǎng)： 用濕布擦拭內(nèi)壁和工作臺面； 每年按需要更換紫外燈和日光燈； 每年至少認證一次

10、 醫(yī)學(xué)實驗室安全要求 YY0569-2005 生物安全柜 實驗室生物安全手冊（第三版，2004）,視頻,生物安全柜的維護,生物安全柜的污染清除 甲醛、過氧化氫熏蒸等方法 應(yīng)由有資質(zhì)的專業(yè)人員來進行 在以下情況下需要進行熏蒸： 在檢查和維修之前 在更換HEPA濾器之前 在移動安全柜之前 安全柜被嚴重地污染 變換使用目的 長時間未用 需要熏蒸的其它時間,生物安全柜的維護,甲醛熏蒸步驟之一-準備 電爐兩個；福爾馬林；氨水；100mL燒杯4個；膠帶；透明塑料薄膜、75%酒精等。 使用75%酒精對生物安全柜內(nèi)、外表面進行消毒清潔； 將生物安全柜和放置在同一房間內(nèi)的冰箱、CO2培養(yǎng)箱等儀器用膠帶紙進行密封

11、處理。,視頻,生物安全柜的使用,甲醛熏蒸步驟之二-熏蒸 將電爐放在生物安全柜中，連接電源 用兩個燒杯分取福爾馬林20mL、水50mL，置電爐上 關(guān)閉視窗，用膠帶封嚴窗門 開啟電源，水和福爾馬林同時被加熱，待福爾馬林揮發(fā)完畢時，關(guān)閉電源, 保持密閉狀態(tài)，過夜,視頻,生物安全柜的使用,甲醛熏蒸步驟之三-中和 取氨水36mL、水50mL，分放于2個燒杯中，置電爐上 再次將生物安全柜門密封 開啟電源，待氨水揮發(fā)完后，關(guān)閉電源 密閉過夜,視頻,生物安全柜的熏蒸,生物安全柜的熏蒸,生物安全柜的檢測,什么情況下需要檢測？ 應(yīng)該由什么人來進行檢測？ 需要進行哪些內(nèi)容的檢測？,生物安全柜的檢測,生物安全柜的檢測

12、的情況發(fā)生在： 最初的購買安裝完畢 年檢 移動 修理,生物安全柜的檢測,生物安全柜的檢測應(yīng)由有資質(zhì)的單位檢測 在美國必須有美國NSF授權(quán)的單位；沒有NSF授權(quán)，也得有以下經(jīng)歷的： 有過檢測經(jīng)驗；參加過技術(shù)課程或者廠商培訓(xùn)會；參加過象CETA水平的商業(yè)會議；檢測設(shè)備擁有的校準證書 在我國有檢測資質(zhì)的單位： 國家食品藥品監(jiān)督管理局 醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心和軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,生物安全柜的檢測,安全柜防護效果的評估涉及到以下內(nèi)容： 安全柜的完整性 人員、產(chǎn)品及交叉污染保護 HEPA過濾器的泄漏 向下氣流的速度 正面氣流的速度 負壓換氣次數(shù) 氣流的煙霧模式 警報和互鎖系統(tǒng) 電氣安全 光照度,還包括紫外線強度、噪聲水平、震動性、集液槽泄漏、柜體穩(wěn)定性（包括柜體抗翻倒、柜體抗變形、工作臺面抗變形、柜體抗向前傾倒）、溫升、電機與風(fēng)機等性能的測試。,生物安全柜的檢測,人員、產(chǎn)品和交叉污染保護測試 下降氣流流速測試 流入氣流流速測試 工作舒適度有關(guān)標準：噪音、照度和震動測試 高效過濾器完整性測試 柜體泄漏的測試 氣流煙