免疫凝集反應(yīng)及臨床應(yīng)用

1、免疫凝集反應(yīng)及臨床應(yīng)用,劉 靜 2014.11.26,.,細(xì)菌、螺旋體、紅細(xì)胞或細(xì)胞性抗原等顆粒性抗原，或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后，它們與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生特異性反應(yīng)，在一定條件下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。,凝集反應(yīng)定義,.,反應(yīng)階段： 抗原抗體的特異性結(jié)合階段 出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象,凝集反應(yīng),反應(yīng)特點： IgM的作用比IgG大數(shù)百倍 IgG與抗原結(jié)合后，常不出現(xiàn)凝集反應(yīng)，稱不完全抗體,.,可見反應(yīng)形成,.,電解質(zhì)：稀釋液或緩沖液（8.5g/L NaCl） pH：pH6pH9（ pH3為細(xì)菌抗原的等電點） 溫度：1540，37最適（ 4特例 ） 反應(yīng)時間：不同反應(yīng)時

2、間不同 外力：震蕩或攪拌,環(huán)境因素,.,分類：直接與間接凝集反應(yīng),.,顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。 包括： 玻片凝集試驗 試管凝集試驗,直接凝集反應(yīng) direct agglutination,.,玻片凝集試驗： 定性 已知抗體檢測抗原 簡便、快速 菌種的診斷或分型 ABO血型的鑒定,.,試管凝集試驗： 半定量 已知抗原檢測抗體 易引起抗原的非特異性凝集 肥達(dá)試驗,.,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,棄掉0.5,試管凝集試驗原理,結(jié)果,1 2 3 4 5 6 7,菌液,.,+,很小的凝集顆粒,混濁,-,無凝集現(xiàn)象,與對照相同,+,小、部分凝集塊,中

3、等混濁,+,大多凝集管底,輕度混濁,+,大的凝集塊,清亮,凝集程度,沉淀,上清,試管凝集試驗結(jié)果判斷,.,管底沉淀,凝集程度,最高稀釋比例,待測血清的滴度,試管凝集試驗 結(jié)果判斷,.,將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象,間接凝集反應(yīng) indirect agglutination,.,RBC、白陶土、活性炭、某些細(xì)菌、聚苯乙烯膠乳顆粒 良好載體有如下幾點基本要求：在生理鹽水或緩沖液無自凝傾向；大小均勻；比重與介質(zhì)相似，短時間內(nèi)不能沉淀；無化學(xué)或血清學(xué)活性；吸附抗原（或抗體）后，不影響其活性。 目前應(yīng)用最廣的是人的O型紅細(xì)胞

4、和綿羊紅細(xì)胞。而后者應(yīng)用更廣，因為其來源方便。另外綿羊紅細(xì)胞的表面有大量的（約1 000個以上）糖蛋白受體，極易吸附某些抗原物質(zhì)，吸附性能好。,載體種類,.,正向間接凝集試驗 反向間接凝集試驗 間接凝集抑制試驗 協(xié)同凝集試驗,間接凝集反應(yīng),.,用抗原致敏載體-檢測抗體,正向間接凝集反應(yīng),.,反向間接凝集反應(yīng),用抗體致敏載體-檢測抗原,.,間接凝集抑制反應(yīng),用抗原致敏載體-檢測抗原,有凝集顆粒為陰性,.,反向間接凝集試驗，載體為金黃色葡萄球菌 金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁成分A蛋白，和IgG的Fc段結(jié)合，使Fab段暴露在菌體表面， Fab段仍然保持正常的抗體活性。 利用這種特性可以將特異性IgG結(jié)合在

5、菌體上，形成致敏顆粒，檢測特異性抗原。,協(xié)同凝集反應(yīng),.,原理圖,IgG,SPA,SPA- IgG,待測抗原,SPA- IgG-待測抗原凝集顆粒,混合,加入,.,間接血凝試驗 膠乳凝集試驗 明膠凝集試驗,按載體分類間接凝集試驗,.,以紅細(xì)胞為載體的間接凝集試驗。 將已知抗原(或抗體）致敏紅細(xì)胞，與相應(yīng)抗體（或抗原）特異結(jié)合，出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。,間接血凝試驗,.,紅細(xì)胞,抗原,致敏,致敏紅細(xì)胞,紅細(xì)胞凝集,間接血凝試驗,待測抗體,間接血凝試驗原理,.,-：紅細(xì)胞沉積于孔底 +：紅細(xì)胞沉積于孔底，周圍有散在少量凝集 +：紅細(xì)胞形成凝集，面積較小，邊緣較松散 +：紅細(xì)胞形成片層凝集，面積略多于+

6、+：紅細(xì)胞形成片層凝集，均勻布滿孔底，或邊緣皺縮如花邊狀,血凝試驗強(qiáng)度,.,與一般間接血凝試驗不同之處為反應(yīng)中的紅細(xì)胞是未經(jīng)致敏的受檢者新鮮紅細(xì)胞 主要試劑材料為抗紅細(xì)胞單克隆抗體，能與紅細(xì)胞結(jié)合，但不引起凝集反應(yīng) 這種抗體與另一特異性抗體連接成的雙功能抗體可用于檢測標(biāo)本中的抗原 如與特異性抗原連接，則可用于檢測標(biāo)本中的抗體 反應(yīng)中的標(biāo)本為受檢者的全血 HIV抗體、HBV抗原檢測,自身紅細(xì)胞凝集試驗,.,膠乳凝集試驗,以聚苯乙烯膠乳為載體顆粒的間接凝集反應(yīng) 膠乳為人工合成的載體，性能比紅細(xì)胞穩(wěn)定，均一性好 但與蛋白質(zhì)結(jié)合能力以及聚集性能不如紅細(xì)胞 因此作為間接凝集反應(yīng)，膠乳凝集的敏感度不及血凝

7、試驗,.,明膠凝集試驗,以明膠為載體顆粒的間接凝集反應(yīng) 用粉紅色明膠顆粒吸附病毒抗原或重組抗原 當(dāng)致敏明膠顆粒與樣品血清作用時，若血清含有抗病毒抗體則可形成肉眼可見的粉紅色凝集 常用于抗HIV-1抗體和抗精子抗體的檢測 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA),.,抗球蛋白參與的血凝試驗,.,抗球蛋白參與的血凝試驗,又稱Coombs試驗，利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合的特異性抗體，使紅細(xì)胞凝集 用于檢測抗紅細(xì)胞不完全抗體 不完全抗體：能與顆?？乖喂探Y(jié)合，但一般不出現(xiàn)可見反應(yīng)，多為7S的IgG 診斷免疫性溶血性貧血的主要方法,.,抗球蛋白參與的血凝試驗,分為兩種方法： 直接Coombs試驗 間接Coombs試驗,.,直接Coombs試驗,檢測紅細(xì)胞上的不完