陰道分泌物檢查

1、.,孕前優(yōu)生健康檢查臨床檢驗操作技術(shù)培訓(xùn),河南省人口和計劃生育科學(xué)技術(shù)研究院,陰道分泌物檢查,.,陰道分泌物,是女性生殖系統(tǒng)分泌的液體，俗稱“白帶”。 主要來自：陰道粘膜、宮頸腺體、前庭大腺及子宮內(nèi)膜的分泌物等參與。 常用于女性生殖系統(tǒng)炎癥、腫瘤的診斷及雌激素水平的判斷。,.,一般性狀檢查,正常陰道分泌物為白色稀糊狀，一般無氣味，量多少不等，與雌激素水平高低及生殖器充血情況有關(guān)。 排卵期白帶量又增多，清澈透明，似稀薄的雞蛋清。排卵期后2-3天白帶渾濁粘稠量少，行經(jīng)前量又增加。妊娠期白帶量較多。,.,白帶異常色、質(zhì)、量,大量無色透明粘白帶：雌激素藥物后卵巢顆粒細(xì)胞瘤。 膿性白帶： 黃色或黃綠色有

2、臭味，多為陰道毛滴蟲或化膿菌感染引起。 泡沫狀膿性白帶，常見于滴蟲性陰道炎。,.,其他膿性白帶常見于慢性宮頸炎、老年性陰道炎、子宮內(nèi)膜炎、宮腔積液、陰道異物等。 豆腐渣樣白帶：為霉菌性陰道炎所特有，常伴有外陰瘙癢,.,血性白帶：白帶內(nèi)混有血液，量多少不等，有特殊臭味。應(yīng)警惕惡性腫瘤的可能，如宮頸癌、宮體癌等。有時某些宮頸息肉、子宮黏膜下肌瘤、宮頸炎、老年性陰道炎、宮內(nèi)節(jié)育器引起的副反應(yīng)等也可在白帶中見血。 黃色水樣白帶：往往由于病變組織的變性、壞死所致。常發(fā)生于子宮內(nèi)膜下肌瘤、子宮頸癌、子宮體癌等。,.,PH值：正常陰道分泌物呈酸性，PH值在45.5，PH值增高見于各種陰道炎、幼女和絕經(jīng)的婦女

3、。 滴蟲性陰道炎PH值增高為5.56.0,.,陰道分泌物取材,女性下生殖道標(biāo)本采集的部位取決于癥狀和所感染的疾?。?1、宮頸和宮頸內(nèi)部：淋病奈瑟氏菌，沙眼衣原體，人乳頭瘤病毒 2、陰道高位拭子：念珠菌，陰道毛滴蟲，細(xì)菌性陰道炎 3、肛門或直腸拭子：淋病奈瑟氏菌，B-群鏈球菌（+陰道拭子）,.,實驗物品,器材：光學(xué)顯微鏡、載玻片、蓋破片 試劑：生理鹽水 標(biāo)本來源： 由婦產(chǎn)科醫(yī)師采集,.,操作步驟：,濕片顯微鏡檢查： 清潔度檢查：將陰道分泌物加一滴生理鹽水涂片，先用低倍鏡觀察，再用高倍鏡檢查。 根據(jù)上皮細(xì)胞、白細(xì)胞（或膿細(xì)胞）、桿菌、球菌的多少分清潔度。,.,陰道分泌物涂片清潔度判斷表,.,臨床意

4、義,清潔度：I-II度，無病原微生物。 陰道分泌物涂片清潔度III-IV度為異常，見于陰道炎，如淋菌性陰道炎、真菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎這三者可分別查到淋病奈瑟菌、真菌和滴蟲。 非特異性陰道炎常見的致病菌為葡萄球菌、鏈球菌、大腸埃希菌等。,.,陰道毛滴蟲檢查,與清潔度檢查同時進行。 低倍鏡觀察時，若發(fā)現(xiàn)有比白細(xì)胞大2-3倍，能活動的小球狀物，再用高倍鏡觀察其形態(tài)。 陰道毛滴蟲呈梨形、透明、無色，前1/3處有一橢圓形細(xì)胞核，一根細(xì)長的軸住由前向后貫穿蟲體并伸出體外，有四根前鞭毛和一根后鞭毛，體側(cè)有波動膜，在25-42度下可活動。,.,陰道毛滴蟲 梨形、有鞭毛、運動,.,陰道霉菌檢查,同陰道毛滴蟲

5、檢查。 混勻并加蓋玻片，先以低倍鏡觀察，若發(fā)現(xiàn)有菌絲樣物，再轉(zhuǎn)高倍鏡檢查。 如見到單個或成群卵圓形、無色透明的孢子，常為芽生或多個連成狀分支狀即可報告 霉菌：“陽性”。,.,真菌菌絲與孢子,.,.,.,.,.,線索細(xì)胞,線索細(xì)胞為陰道鱗狀上皮細(xì)胞黏附大量加德納式菌及其他短小桿菌形成。 高倍鏡下可見該細(xì)胞邊緣呈鋸齒狀，細(xì)胞有溶解，細(xì)胞核模糊不清，其上覆蓋大量加德納式菌及厭氧菌，使其表面毛糙，出現(xiàn)斑點和大量的細(xì)小顆粒。 線索細(xì)胞是診斷細(xì)菌性陰道病的重要指標(biāo)，當(dāng)線索細(xì)胞占全部上皮細(xì)胞的20%以上時報告線索細(xì)胞陽性。,.,線索細(xì)胞濕片與染片,.,.,質(zhì)量控制,陰道分泌物檢查中最重要的是取材正確、送檢及

6、時；否則陰道毛滴蟲會死亡。 陰道毛滴蟲活動的最適溫度為25-42度，遞送標(biāo)本時要注意保溫。 注意因生理鹽水污染，造成對實驗的干擾，生理鹽水應(yīng)一周更換一次。,.,淋病奈瑟氏菌檢測,.,簡介,淋病奈瑟氏菌，屬奈瑟氏菌屬。 奈瑟氏菌屬（Neisseria）是一群觸酶、氧化酶陽性的革蘭氏陰性球菌，包括腦膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、乳糖奈瑟氏菌、灰色奈瑟氏菌、粘液奈瑟氏菌、多糖奈瑟氏菌、微黃奈瑟氏菌、干燥奈瑟氏菌等。,.,淋病奈瑟氏菌為淋病的病原菌，成人感染初期，一般引起男性尿道炎，附睪炎、前列腺炎、咽喉炎;女性尿道炎與子宮頸炎，若未經(jīng)治療，可擴散到兩性生殖系統(tǒng)，引起慢性感染，亦是導(dǎo)致不育及流產(chǎn)的原因之

7、一； 新生兒經(jīng)產(chǎn)道感染可引起淋菌性結(jié)膜炎， 并可逐漸涉及全眼，常致失明。,.,淋病奈瑟氏菌形態(tài)與染色,為革蘭氏陰性雙球菌（粉紅色）。 形態(tài)呈園形，卵園形或腎形，常成對排列，鄰近面扁平或略凹陷，形似一對咖啡豆。 大小為0.6um*0.8um，無芽胞和鞭毛，一般無芽膜，有菌毛。,.,.,培養(yǎng)特性與生化反應(yīng),專性需氧，營養(yǎng)要求高，一般多用 巧克力瓊脂平板，初次分離培養(yǎng)時需在5%-10%二氧化碳條件下，孵育48小時后形成圓形、凸起、灰白色的光滑形菌落，只分解葡萄糖產(chǎn)酸，而部分解麥芽糖等糖類。,.,抵抗力,極弱，對干燥、熱、冷極敏感，在干燥的環(huán)境中，僅存活1-2小時，濕熱55攝氏度僅存活5分鐘。 在患者

8、分泌物污染的衣褲、被褥及廁所上，能存活24小時。 對消毒劑極敏感，如用1：4000硝酸銀作用2分鐘即可殺死淋病奈瑟氏菌；對多種抗生素敏感，但易產(chǎn)生耐藥。,.,免疫性,人體對淋病奈瑟氏菌無自然抵抗力，普遍易感。 病后免疫力不強，體內(nèi)雖出現(xiàn)IgG、IgM抗體，但不能防止再次感染和慢性感染。,.,直接涂片染色,取患者尿道分泌物或?qū)m頸分泌物，新生兒取結(jié)膜分泌物作革蘭氏染色，在多形核白細(xì)胞內(nèi)找到革蘭氏陰性雙球菌。 涂片對有大量膿性分泌物的單純淋菌性前尿道炎患者，此法陽性率在90%左右，可以初步診斷。,.,女性宮頸分泌物中雜菌多，敏感性和特異性較差，陽性率僅為50-60%，且有假陽性。 因此確診淋病奈瑟氏

9、菌必須： 1、直接涂片，鏡檢可見多形核白細(xì)胞內(nèi)有革蘭氏陰性雙球菌。 2、淋病奈瑟氏菌培養(yǎng)陽性。,.,男性慢性淋病由于分泌物中淋病奈瑟氏菌較少，陽性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高檢出率。 咽部涂片發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性雙球菌不能診斷淋病，因為其他奈瑟氏菌屬在咽部是正常菌群。 另外對癥狀不典型的涂片陽性應(yīng)做進一步檢查。,.,白細(xì)胞內(nèi)的革蘭氏陰性雙球菌,.,.,鏡檢與結(jié)果報告,陽性：革蘭氏染色顯微鏡下為革蘭氏陰性雙球菌，呈雙腎形成對排列。 結(jié)果報告：細(xì)胞內(nèi)可見革蘭氏陰性雙球菌。 注意： 鏡檢見到白細(xì)胞內(nèi)或外見到或未見到革蘭氏陰性雙球菌，不能直接報告見到淋病雙球菌。,.,淋球菌檢測的其他方法 培養(yǎng)檢查法,

10、培養(yǎng)法對癥狀很輕或無癥狀的男、女性病人都是較敏感的方法，只要培養(yǎng)陽性就可確診。 國內(nèi)采用巧克力瓊脂培養(yǎng)基，含抗生素，可選擇地抑制其他細(xì)菌生長。在36，70%濕度，含5%-10%CO2環(huán)境中培養(yǎng)，24-48小時觀察結(jié)果。 培養(yǎng)后還需進行菌落形態(tài)，革蘭氏染色，氧化酶試驗和糖發(fā)酵試驗等鑒定。 培養(yǎng)陽性率：男性80%-95%，女性80-90%,.,.,免疫反應(yīng)法,固相酶免疫試驗（EIA）： 可用來檢測臨床標(biāo)本中的淋病奈瑟氏菌抗原，在流行率很高的地區(qū)而又不能做培養(yǎng)或標(biāo)本需要長時間遠(yuǎn)送時使用，可以在婦女人群中用來診斷淋病奈瑟氏菌感染。,.,膠體金法,原理：采用膠體金作為標(biāo)記，交聯(lián)抗-淋病奈瑟氏菌單克隆抗體

11、與泌尿系統(tǒng)標(biāo)本中淋病奈瑟氏菌菌體抗原結(jié)合，形成夾心一步法。,.,操作步驟,準(zhǔn)備試劑，平衡至室溫； 將已取樣棉簽放置采集管中，往采集管中加5-6滴稀釋液； 將測試條有箭頭的一端插入樣品采集液中，約10秒鐘后取出平放，10-20分鐘觀察測試條的顯色結(jié)果； 結(jié)果判定： 陰性：測試區(qū)中只有紅色對照線出現(xiàn)。 陽性：測試區(qū)中有紅色對照線和檢測線先后出現(xiàn)。,.,生化酶法,原理： 淋球菌具有一種特異性酶反應(yīng)測定系統(tǒng)，當(dāng)標(biāo)本中含有此酶時，會發(fā)生生化反應(yīng)，同時伴有氣泡產(chǎn)生。,.,檢驗方法,1取一個本產(chǎn)品所配的反應(yīng)試管，加約2ml（約在試管刻度下1mm處）標(biāo)本（若為尿，直接使用；若為分泌物，需用無菌生理鹽水涮洗至試

12、劑盒所配的反應(yīng)試管中，棄去拭子）。 2直滴加試劑3滴，塞緊管塞，輕輕搖勻； 3放置5分鐘后（輕度病人可延至10分鐘），再輕輕搖勻一次（若已產(chǎn)生氣泡不必再搖），觀察反應(yīng)試管內(nèi) 尿液上部氣泡形成情況，20分鐘后的結(jié)果無效。,.,檢驗結(jié)果的解釋,液面上部形成一層白氣泡或液面上層管壁形成一圈細(xì)小的白氣泡，即可判為陽性； 液面無氣泡或氣泡較少，未形成一圈，即可判為陰性。,.,注意事項,1本產(chǎn)品應(yīng)由專業(yè)檢測人員使用，在室溫（1530）和相對濕度（65%20%）下操作。 2滴加試劑時，試劑滴瓶應(yīng)垂直。 3臨床的診斷與治療，不能依賴單一檢測結(jié)果，由于本產(chǎn)品為一種快速篩選試劑（非確診試劑），靈敏度較高，因此對于

13、檢測結(jié)果陽性者應(yīng)考慮患者的性接觸史及臨床癥狀，綜合判斷，建議選用淋球菌培養(yǎng)基做細(xì)菌培養(yǎng)進行確認(rèn)。 4操作時應(yīng)帶手套，試劑勿與皮膚、眼接觸，一旦接觸可用大量清水沖洗。,.,5每次測試時，應(yīng)注意反應(yīng)試管的管塞是否塞緊，否則影響結(jié)果。 6加入試劑后必須在20分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，否則整個試驗要重做。 7尿液標(biāo)本應(yīng)在1小時內(nèi)測定，否則可能影響結(jié)果，應(yīng)重新取樣。 8陽性試驗用過的反應(yīng)管在處理之前，應(yīng)打開管塞，否則陽性反應(yīng)產(chǎn)生的氣體可能迸開管塞，管內(nèi)液體污染實驗室。 9所用標(biāo)本及其培養(yǎng)廢棄物應(yīng)視為有潛在傳染性的物質(zhì)，應(yīng)按傳染病實驗室操作規(guī)范處理。,.,革蘭氏染液的組成,1、結(jié)晶紫液 2、盧戈氏碘液 3、95%乙

14、醇 4、稀釋石碳酸復(fù)紅溶液,.,革蘭氏染色流程,1、晾干：讓涂片在空氣中自然干燥。 2、固定：讓菌膜朝上，通過火焰2-3次固定（以不燙手為宜）。 3、染色：在固定過的涂片上滴加草酸銨-結(jié)晶紫液，染10秒。用水緩慢沖洗涂片上的染色液，用吸水紙吸干。,.,4、媒染：滴加1滴碘液，染10秒，水洗。 5、脫色：吸水紙吸去殘留水，連續(xù)滴加95%乙醇脫色10-20S至流出液無紫色,立即水洗。 6、復(fù)染：滴加復(fù)紅復(fù)染10S，水洗。至此，革蘭氏染色結(jié)束。,.,注意事項,*染液注意密封，以免凝結(jié)產(chǎn)生沉淀影響使用效果。 *取樣時不論男女尿道及子宮頸均需用拭子插入尿道及子宮頸3cm深取樣送檢，要避免受陰道分泌物污染

15、拭子。,.,*體液標(biāo)本均應(yīng)離心后取下層沉淀液與染液混合，以提高檢出率。 *對于不能及時送檢的樣本應(yīng)常溫保存，不可以冷藏。 *提高責(zé)任心，做到全片檢查。,.,油鏡檢查的方法,（1）上升聚光器，全開虹彩光圈。 （2）用粗調(diào)節(jié)輪提起鏡筒或下降載物臺，轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器將油鏡轉(zhuǎn)至鏡筒正下方。在玻片標(biāo)本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。右手順時針方向慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)輪使鏡筒下降或載物臺上升，與此同時，從顯微鏡的側(cè)面觀察使油鏡侵入油中，直到幾乎與標(biāo)本接觸時為止。注意不要壓到標(biāo)本，以免壓碎玻片，甚至損壞鏡頭。,.,（3）從接目鏡內(nèi)觀察，進一步 調(diào)節(jié)光線，使光線明亮，再用粗 調(diào)節(jié)輪將鏡筒徐徐上升或?qū)⑤d物 臺徐徐下降，直到視野內(nèi)

16、出現(xiàn)物 像為止，然后用細(xì)輪校正焦距。 如油鏡已離開油面而仍未見物象， 必須再從側(cè)面觀察，將油鏡降下， 重復(fù)操作至物象看清為止。,.,顯微鏡的保養(yǎng),1、油鏡使用完畢，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再取一張擦鏡紙，滴上少量的脫油劑擦拭，然后再取另一張新擦鏡紙將鏡頭上殘留的脫油劑擦凈。否則粘固透鏡的膠質(zhì)會被脫油劑溶解，日久鏡片易移位脫落。 2、下降聚光器，打開虹彩光圈，使反光鏡垂直于鏡座，以免積聚灰塵。,.,陰道分泌物沙眼衣原體檢測,.,沙眼衣原體感染癥,沙眼衣原體沙眼、性病淋巴肉芽腫 （Ctrachomatis，CT） 鸚鵡熱衣原 （C.passitaci） 肺炎衣原體 （C.pneumoiae）,.

17、,.,沙眼衣原體包涵體,.,沙眼衣原體檢測的臨床意義,沙眼衣原體（CT）感染可以引起多種疾病。沙眼衣原體是幾種性傳播疾病的病原因子，沙眼衣原體感染已成為主要的性傳播疾病之一，在非淋性尿道炎中約占40-60%。檢測分泌物中的沙眼衣原體，可作為沙眼衣原體所致上生殖道或播散性感染。,.,沙眼衣原體感染可引起男性尿道炎、睪丸炎和附睪炎，女性尿道炎、宮頸炎和輸卵管炎，新生兒包涵體結(jié)膜炎和嬰幼兒階段性肺炎，以及不孕不育、流產(chǎn)等。 所以，國內(nèi)外已將衣原體感染檢測作為生殖泌尿系統(tǒng)癥狀（包括不育、不孕、孕前、產(chǎn)前、人流前等）必檢項目。,.,標(biāo)本的采集,女性子宮頸棉拭標(biāo)本的采集 用一支棉拭或棉球去除外宮頸（子宮頸

18、陰道部）處多余的粘液，然后丟棄。另用一支棉拭深入子宮頸內(nèi)膜，滾動10-30秒。將棉拭放回轉(zhuǎn)載移試管，并在標(biāo)簽上注明病人身份和日期。 帶標(biāo)本的棉拭可在常溫下送檢，不應(yīng)使用轉(zhuǎn)移媒體。如標(biāo)本不在1天內(nèi)接受檢測，應(yīng)將其冷藏（2-8度），不要冷凍，這樣最多可保持5天。,.,男性尿液標(biāo)本的采集 病人在標(biāo)本采集之前一小時內(nèi)不應(yīng)小便。使用潔凈而干燥的容器采集大約20-30毫升的“初射”尿液。 如尿液不能在6小時接受檢測，應(yīng)將其冷藏（2-8度），不要冷凍，這樣最多可保持5天。,.,檢測方法,沙眼衣原體的檢測方法比較多，有培養(yǎng)法、免疫熒光法、PCR法和膠體金法等。,.,膠體金法：又稱免疫層析法 檢測原理：標(biāo)本與提

19、取液在80下加熱10-12分鐘后，即可提取衣原體抗原。,.,條件：離心機、加樣器、加熱器等設(shè)備。 操作步驟： 準(zhǔn)備試劑，平衡至室溫 準(zhǔn)備水浴箱至80 提取衣原體抗原：取0.6ml試劑并加入試管。,.,蝸旋混合至少30S。將重新懸浮的顆粒移至一支試管中，將試管放入水浴鍋（80）加熱10-12分鐘后，取出提取試管，室溫下冷卻5分鐘。 檢測：取出檢測塊將其水平放置。將滴管附件蓋在提取試管上，向檢測塊的標(biāo)本窗滴上5滴提取液。15分鐘后讀取結(jié)果。,.,結(jié)果判定,陽性：控制窗內(nèi)有一條線出現(xiàn)，同時在結(jié)果窗內(nèi)有一條線出現(xiàn)，即表示檢測結(jié)果為陽性。 陰性：控制窗內(nèi)有一條線出現(xiàn)，但結(jié)果窗內(nèi)無線條出現(xiàn)，即表示檢測結(jié)果為陰性。,.,無效結(jié)果：控制窗內(nèi)有一條線出現(xiàn)，即表示檢測過程中操作