富血小板血漿的臨床應(yīng)用課件

1、富血小板血漿的臨床應(yīng)用,唐 都 醫(yī) 院 穆 士 杰,1,學(xué)習(xí)交流PPT,目 錄,2,學(xué)習(xí)交流PPT,概 念,富血小板血漿,富血小板血漿凝膠, Platelet-rich plasma,PRP, Platelet-rich plasma gel,PRG,全血通過梯度離心分層后得到的富含血小板的血漿部分，它含有多種較豐富的生物活性因子。,PRP被凝血酶等激活物激活后形成的膠凍狀物，它具有完整的三維結(jié)構(gòu)和良好的組織相容性的纖維蛋白支架。,3,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP發(fā)展歷史,Harkedeng 首次分離制備出PRP，將其用于 心外科手術(shù)后患者，取得良好的療效。,Okuda等發(fā)現(xiàn)血漿中提取的富血小板血漿

2、含 多種生長(zhǎng)因子。,Hood等在PRP中加入凝血酶和鈣離子，提出了 PG概念，將其所形成的凝膠狀物質(zhì)用于組織修復(fù)。,Whitman率先將自體PRP用于口腔頜面外科 手術(shù)修補(bǔ)骨組織。,4,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP制備方法,原理 根據(jù)血液成分在離心過程中的沉降速率不同來提取。 制備方法 無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，都需兩次離心。 全自動(dòng)制備法、手工制備法。,影 響 PRP 血小板,抗凝劑 離心力 離心時(shí)間 離心次數(shù) 凝膠激活劑,5,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP制備方法,全自動(dòng)法（血漿分離置換法） 利用血成分分離耗材分離制備得到血小板血漿。 特點(diǎn) 自動(dòng)化程度高、血小板純度濃度高,6,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP制備方法,手工制備

3、法 都為兩步法，但離心力、離心時(shí)間略有不同。 一般認(rèn)為 初次200g離心10min,二次1200g離心10min,制備PRP中血小板計(jì)數(shù)約為全血6.17倍，效果較好。 （血液離心后分3層：由下至上-紅細(xì)胞層、血小板濃縮物層、貧血小板血漿層） 用中間層再次分離。,7,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP成分特點(diǎn),PRP,纖維蛋白,白細(xì)胞,高濃度血小板,其它,8,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP成分特點(diǎn),血小板 成人：平均195*109/L，PRP約為全血3-17倍。 血小板結(jié)構(gòu)圖 作用 生理性止血-通過黏附反應(yīng)作用起到初期止血功能。 組織修復(fù)-通過黏附于血管壁和插入內(nèi)皮細(xì)胞之間來修復(fù)血管內(nèi)皮，保持其完整性。 調(diào)控炎癥和

4、免疫反應(yīng)-通過調(diào)節(jié)其表面粘附及表面受體的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)，如介導(dǎo)白細(xì)胞作用。,9,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP成分特點(diǎn)-血小板,凝血酶,血小板源性生長(zhǎng)因子,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子,胰島素樣生長(zhǎng)因子,表皮生長(zhǎng)因子,血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子,成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子,血小板,10,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP成分特點(diǎn)-血小板,血小板源性生長(zhǎng)因子（PDGF） 一種促細(xì)胞分裂蛋白，第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)存在于血小板中，是趨化作用最強(qiáng)的骨生長(zhǎng)因子之一。 作用 可促進(jìn)血管生成、活化巨噬細(xì)胞，刺激成纖維細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等中胚層細(xì)胞的增殖和活性，,11,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP成分特點(diǎn)-血小板,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子- （TGF-） 以旁分泌或自分泌

5、方式作用于成纖維細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞、成骨前體細(xì)胞和破骨細(xì)胞。 TGF免疫染色圖 作用： 參與體內(nèi)多種炎癥反應(yīng)和組織修復(fù)，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)分泌，提高成纖維細(xì)胞增殖能力，刺激膠原蛋白1和纖維連接蛋白的生物合成以及骨基質(zhì)的沉積，抑制破骨細(xì)胞形成和骨吸收發(fā)生。,12,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP成分特點(diǎn)-血小板,胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF） 作用： 趨化成纖維細(xì)胞，刺激蛋白質(zhì)合成。 刺激骨細(xì)胞增殖、分化，促進(jìn)軟骨和骨基質(zhì)生成。,13,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP成分特點(diǎn)-血小板,表皮生長(zhǎng)因子（EGF） 作用： 新生血管重要的誘導(dǎo)因子。 可促進(jìn)創(chuàng)口愈合、參與血管生成。 刺激內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂和細(xì)胞遷移。 還可增加血管通透性

6、。,14,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP成分特點(diǎn)-血小板,血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF） 是高度保守的同源二聚體糖蛋白。二條分子量各為24kDa的單鏈以二硫鍵組成二聚體。 作用： 能直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，增加血管通透性。 誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的增生和遷移，啟動(dòng)血管生成反應(yīng)。,15,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP成分特點(diǎn)-血小板,成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGFs） 作用： 參與血管形成、損傷愈合和胚胎發(fā)育等過程，是關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞最具顯著效應(yīng)的有絲分裂刺激原和形態(tài)原之一。,16,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP成分特點(diǎn)-白細(xì)胞,白細(xì)胞：參與機(jī)體免疫和防御功能 幫助機(jī)體清除局部病原體、增強(qiáng)抗感染能力；幫助機(jī)體清除局

7、部壞死組織，加快組織修復(fù)。 受血小板分泌生長(zhǎng)因子趨化，本身可分泌生長(zhǎng)因子直接參與組織修復(fù)。,17,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP成分特點(diǎn)-其它,其它成分如： 纖維連接蛋白（FN） 血小板反應(yīng)蛋白（TSP） 骨連接蛋白（ON） 玻璃體連接蛋白（VN） 作用： 對(duì)傷口感染、促進(jìn)組織修復(fù)及增加新生血管內(nèi)膜的形成發(fā)揮重要作用。,18,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP,優(yōu)點(diǎn)一,優(yōu)點(diǎn)二,來源豐富、取材方便、操作簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉,具有自源性，不會(huì)出現(xiàn)免疫排斥反應(yīng)，沒有異體移植 傳播疾病風(fēng)險(xiǎn),19,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP,優(yōu)點(diǎn)三,優(yōu)點(diǎn)四,含高濃度多種生長(zhǎng)因子，且比例接近正常人，具備最佳 協(xié)同效應(yīng)，（避免單一因子不能良好誘導(dǎo)創(chuàng)面愈

8、合）,PRP凝膠具有極好粘附性，使用時(shí)可較好的黏附在創(chuàng)面 上而不流失，避免損失，保證局部較高的生長(zhǎng)因子濃度。,20,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP,優(yōu)點(diǎn)五,優(yōu)點(diǎn)六,因含有較多的白細(xì)胞和單核細(xì)胞，可起到防止感染作用。,避免了異體和人工合成組織的致畸危險(xiǎn)，同時(shí)各種因子 表達(dá)良好，避免了誘導(dǎo)腫瘤形成的可能。,21,學(xué)習(xí)交流PPT,PRP臨床應(yīng)用及研究,骨缺損修復(fù) 軟骨損傷修復(fù) 預(yù)防骨感染,急性創(chuàng)面 慢性難愈合傷口 皮膚脂肪組織液化,急性運(yùn)動(dòng)損傷 慢性運(yùn)動(dòng)損傷,頜骨相關(guān)疾病 牙周病 上頜竇手術(shù),燒傷創(chuàng)面 脂肪移植 皮膚組織再生,骨科,運(yùn)動(dòng) 損傷,普外科,口腔頜 面外科,22,學(xué)習(xí)交流PPT,23,學(xué)習(xí)交流PP

9、T,實(shí)驗(yàn)方法： 將患者因正畸拔出的患牙傳代培養(yǎng)，取第5代細(xì)胞作為試驗(yàn)用牙周膜成纖維細(xì)胞來源； 人病牙制成1mm厚根片；2次離心法制備PRP；觀察不同濃度PRP（A組10%、B組15%、C組20%、D組30%、對(duì)照組無PRP） 對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞在脫礦的病變牙根表面附著情況及膠原形成情況。,研究一,24,學(xué)習(xí)交流PPT,研究一,結(jié)論： PRP可促進(jìn)牙周細(xì)胞在病變牙根表面的附著，其中20%濃度最佳。 PRP可促進(jìn)牙周細(xì)胞外基質(zhì)膠原的形成。,25,學(xué)習(xí)交流PPT,口腔頜面外科相關(guān)研究,Whitman用PRP聯(lián)合骨移植治療骨缺損獲得成功。 Suba等應(yīng)用磷酸三鈣復(fù)合PRP治療犬牙槽骨缺損，發(fā)現(xiàn)PRP

10、可明顯促進(jìn)骨再生。,Lekovic研究發(fā)現(xiàn)PRP能促進(jìn)牙槽骨再生。 張麗等的研究證實(shí)PRP聯(lián)合植骨術(shù)治療牙周鄰面骨缺損效果優(yōu)于單純植骨術(shù)。,Philippart等將PRP混合物充填于上頜竇中，6個(gè)月組織學(xué)觀察顯示有活躍的骨新生活動(dòng)。 Rodrignez等在上頜竇區(qū)植入PRP及種植體，移植成功率達(dá)92.9%，表明PRP可加快骨再生速度，提高骨再生質(zhì)量。,頜骨相關(guān) 研究,牙周病,上頜竇 手術(shù),26,學(xué)習(xí)交流PPT,27,學(xué)習(xí)交流PPT,研究二,方法： 選擇股骨干骨不連、骨缺損2需行骨移植治療的40例患者，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(脫蛋白牛松質(zhì)骨+PRP)及對(duì)照組(脫蛋白牛松質(zhì)骨)，每組20例。 術(shù)后7和1、

11、2、3、6、12個(gè)月定期攝線片檢查，參照Lane-Sandhu的線評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分,并比較兩組骨痂灰度、愈合情況及愈合速度。,28,學(xué)習(xí)交流PPT,研究二,結(jié)果： 如表1（線評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)）評(píng)分，在傷口愈合天數(shù)及傷口引流量上，實(shí)驗(yàn)組明顯少于對(duì)照組。 如表2、3在術(shù)后實(shí)驗(yàn)組的成骨率、成骨速率明顯高于對(duì)照組，說明PRP有較好的促進(jìn)骨缺損修復(fù)的作用。,29,學(xué)習(xí)交流PPT,骨科相關(guān)研究,Marx等發(fā)現(xiàn)復(fù)合PRP的移植骨修復(fù)速度比單純用移植骨修復(fù)快1.62-2.16倍。 Bielecki等用PRP經(jīng)皮注射治療骨不連取得良好療效。,Drengk等研究顯示PRG作為細(xì)胞支架能明顯促進(jìn)軟骨細(xì)胞遇見充質(zhì)干細(xì)胞的增生和向

12、軟骨細(xì)胞分化。 Wu等認(rèn)為PRP可以作為軟骨細(xì)胞的載體，治療關(guān)節(jié)軟骨缺損。,Bielecki的研究顯示血小板-白細(xì)胞凝膠在體外可抑制金葡、大腸桿菌生長(zhǎng)，提示PRP可作為“生物抗菌制劑”。,骨缺損 修復(fù),軟骨損傷 修復(fù),預(yù)防骨 感染,30,學(xué)習(xí)交流PPT,運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué),31,學(xué)習(xí)交流PPT,研究三,方法： 患者11例跟腱有炎癥19處，每次制備患者自體PRP2ml行跟鍵周圍注射。 每周1次，5次為1個(gè)療程，治療期間患者停用一切藥物及其他的藥物輔助治療。 患者隨訪3一8個(gè)月，平均6個(gè)月，觀察療效。,結(jié)果： 跟腱有炎癥的地方19處，治療后痊愈5處，顯效13處，治療有效率94.74%。 結(jié)論： PRP對(duì)跟腱

13、炎療效肯定，是一種安全有效的方法。,32,學(xué)習(xí)交流PPT,運(yùn)動(dòng)損傷相關(guān)研究,33,學(xué)習(xí)交流PPT,運(yùn)動(dòng)損傷相關(guān)研究,34,學(xué)習(xí)交流PPT,普外科,35,學(xué)習(xí)交流PPT,研究四,方法： 抽取難愈合傷口患者靜脈血，與氯化鈣、凝血酶混合后制成PRP凝膠敷于患者創(chuàng)面，凡士林紗布填塞。 每7天換1次，3次一療程。 評(píng)估治療后傷口變化情況。,36,學(xué)習(xí)交流PPT,研究四,結(jié)果： 29例患者在三次使用PRP后傷口明顯縮小，大部分壞死組織清除，組織色澤紅潤(rùn)血供良好，無明顯滲液和膿液。3例效果不明顯。 治療3個(gè)月：10例傷口完全愈合，形成瘢痕組織；11例創(chuàng)面覆蓋率75%，9例50%-75%，2例50%；治愈率3

14、1.2%，顯效率93.8%。 結(jié)論： PRP修復(fù)慢性難愈合傷口是一種有效、實(shí)用的治療方法。,37,學(xué)習(xí)交流PPT,普外科相關(guān)研究,Bhanot S的研究指出，PRP可加速表皮化生長(zhǎng)，減輕創(chuàng)傷后局部腫脹和疼痛，減少術(shù)后傷口滲出。 Man D將PRP凝膠用于皮瓣移植術(shù)，發(fā)現(xiàn)血管創(chuàng)出血被凝膠封閉，提高了手術(shù)成功率。,Carter CA等用PRP修復(fù)馬小腿傷口發(fā)現(xiàn)，PRP加快上皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)傷口膠原合成以及血管再生。 郭彥杰等應(yīng)用PRP創(chuàng)面內(nèi)注射治療下肢慢性難愈合傷口，療效顯著。 夏江霓等對(duì)慢性潰瘍患者應(yīng)用PRP凝膠治療，發(fā)現(xiàn)PRP能更好的促進(jìn)傷口處肉芽組織形成。,Giorgio研究認(rèn)為PRP可激發(fā)

15、細(xì)胞增殖分化和微血管的形成，增強(qiáng)局部組織自我修復(fù)能力，從而有利于切口愈合。 劉曉韜的研究顯示，應(yīng)用PRP注入脂肪液化切口深部的患者愈合時(shí)間明顯減少，提示PRP可以減輕疼痛、術(shù)后出血，減少術(shù)后并發(fā)癥。,急性創(chuàng)面,慢性難 愈合傷口,手術(shù)切口脂肪液化,38,學(xué)習(xí)交流PPT,燒傷整形科,39,學(xué)習(xí)交流PPT,研究五,方法： 10只裸鼠隨機(jī)選擇一側(cè)背部皮下組織作為PRP組(0.5 mL人顆粒脂肪+0.1 mLPRP)受區(qū)，一側(cè)作為對(duì)照組(0.5 mL 人顆粒脂肪+0.1 mL 磷酸鹽緩沖液)受區(qū)。 于植入后10、90d處死后取出移植物進(jìn)行大體形態(tài)觀察、體積測(cè)定及組織學(xué)檢測(cè)。,40,學(xué)習(xí)交流PPT,研究五

16、,結(jié)果： 術(shù)后90dPRP組移植物存留量明顯多于對(duì)照組，且周圍血供更豐富，觸之質(zhì)地較柔軟，更接近正常脂肪組織。 在術(shù)后10、90d，PRP組存留體積均大于對(duì)照組。,41,學(xué)習(xí)交流PPT,研究五,脂肪移植物組織結(jié)構(gòu)觀察（蘇木精-伊紅染色，X100） 對(duì)照組 PRP組,10d,90d,結(jié)果： 術(shù)后10、90d PRP組脂肪細(xì)胞均維持較好形態(tài)，細(xì)胞間隙保持較好，僅有少量脂肪空泡形成。 對(duì)照組移植90d后組織結(jié)構(gòu)較混亂，大量結(jié)締組織及脂肪空泡形成，部分出現(xiàn)壞死，僅少量細(xì)胞能夠維持正常的形態(tài)。,42,學(xué)習(xí)交流PPT,研究五,結(jié)果：定量比較發(fā)現(xiàn)，在各時(shí)間點(diǎn)，PRP組均比對(duì)照組具有更多正常脂肪細(xì)胞面積及微血

17、管數(shù)量，比對(duì)照組具有更少脂肪空泡面積，說明PRP明顯改善了移植脂肪組織的組織學(xué)質(zhì)量。,43,學(xué)習(xí)交流PPT,44,學(xué)習(xí)交流PPT,其它,45,學(xué)習(xí)交流PPT,研究六,方法： 健康大耳白兔10只雙側(cè)面神經(jīng)上頰支橫斷后置入硅膠神經(jīng)再生導(dǎo)管(自制) ，采用雙側(cè)自身對(duì)照，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)。 實(shí)驗(yàn)側(cè)注入PRP，對(duì)照側(cè)注入生理鹽水；8周后進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)分析評(píng)價(jià)面神經(jīng)恢復(fù)再生情況。,46,學(xué)習(xí)交流PPT,研究六,47,學(xué)習(xí)交流PPT,結(jié)果：面神經(jīng)損傷后8周兔實(shí)驗(yàn)側(cè)及對(duì)照側(cè)均能引出清晰穩(wěn)定的面神經(jīng)復(fù)合動(dòng)作電位，面神經(jīng)損傷兔實(shí)驗(yàn)側(cè)動(dòng)作電位潛伏期明顯短于對(duì)照側(cè)，而波幅則高于對(duì)對(duì)照側(cè)，說明PRP能促進(jìn)面神經(jīng)功能

18、的恢復(fù)。,研究六,48,學(xué)習(xí)交流PPT,研究六,結(jié)果： 顯微圖像分析也表明，面神經(jīng)損傷后8周實(shí)驗(yàn)組有髓軸突數(shù)目，直徑及面積明顯高于對(duì)照組。表明發(fā)生面神經(jīng)損傷后，早期應(yīng)用PRP有利于面神經(jīng)的修復(fù)和再生。,49,學(xué)習(xí)交流PPT,研究七,方法： 離心法分離兔全血獲得PRP。 采用5%PRP作用于兔角膜基質(zhì)細(xì)胞，CCK-8 ( 細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)試劑盒) 法檢測(cè) PRP促角膜基質(zhì)細(xì)胞增殖的作用。 PRP與凝血酶激活劑以 9:1的比例制備富血小板凝膠，對(duì)制備的富血小板凝膠進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)、對(duì)角膜基質(zhì)細(xì)胞的作用、黏附性、生物相容性等多方面觀察與評(píng)價(jià)。,50,學(xué)習(xí)交流PPT,結(jié)果： 培養(yǎng)后測(cè)定3組細(xì)胞吸光度OD值可見，對(duì)照組OD值隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而不增加，增殖基本停滯; PRP組增加速度較FBS組及對(duì)照組快。表明，PRP與 FBS一樣具有促角膜基質(zhì)細(xì)胞增殖的作用。,研究七,51,學(xué)習(xí)交流PPT,結(jié)果：組織學(xué)切片HE染色發(fā)現(xiàn)，制備的富血小板凝膠呈典型的多孔性結(jié)構(gòu)，凝膠內(nèi)大量的纖維交織，呈有序排列，形成支架，角膜基質(zhì)細(xì)胞接種在富血