免疫學(xué)診斷試驗(yàn).ppt

1、，臨床常用免疫學(xué)檢查，第一節(jié)概述臨床應(yīng)用1。為臨床確定診斷提供依據(jù)。2.臨床診斷參考價(jià)值高。3.判斷機(jī)體免疫功能高低和免疫耐受。1、細(xì)胞免疫及相關(guān)分子檢查1。免疫細(xì)胞T細(xì)胞T細(xì)胞子集和功能B細(xì)胞表面指示表面受體子集NK細(xì)胞巨噬細(xì)胞其他細(xì)胞，2。CD分子3 .細(xì)胞因子白細(xì)胞介素干擾素TNF CSF G-CSF；GM-CSF；m-CSF；EPO生長(zhǎng)因子，第二，免疫活性物質(zhì)和體液免疫球蛋白檢測(cè)IgG IgAIgMIgES-IgE M蛋白檢查冷球蛋白檢查尿液本周蛋白質(zhì)檢查3，補(bǔ)體，免疫復(fù)合物CH50C3C4 CIC，4，自身免疫性疾病的免疫學(xué)檢查1。ANA 2 .抗雙鏈DNA抗體抗微托線粒體抗體抗平滑

2、肌抗體抗中性細(xì)胞質(zhì)抗體RF CRP，5，腫瘤免疫檢查6，移植免疫學(xué)檢查7，感染免疫學(xué)檢查1。病毒性肝炎2。AIDS 3 .免疫功能檢查免疫功能檢查分為細(xì)胞免疫功能檢查和體表功能檢查。有助于理解患者的免疫狀態(tài)，細(xì)胞的各種功能。為了深入研究和了解機(jī)體免疫系統(tǒng)的生理病理變化，將提供有利于特定疾病的發(fā)病機(jī)制和臨床診斷和治療的信息。下面簡(jiǎn)要介紹臨床上常用的部分免疫檢查節(jié)目。1.IgG，IgA，IgM測(cè)定免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)是一組具有抗體活性的蛋白質(zhì)。氣體中存在的血液、體液、外分泌液和某些細(xì)胞的膜分為IgG、IgA、IgM、IgD、IgE 5類別。牙齒中IgG、IgA、IgM含

3、量多，單向免疫擴(kuò)散法、免疫比濁法、速度散射比濁法測(cè)定很常見(jiàn)。參考值取決于年齡、性別、地區(qū)和其他因素。IgG:6 . 9416 . 18g/l IgA:0 . 683 . 78g/l IgM:0 . 602 . 63g/l林爽意義1。降低Ig含量：減少一個(gè)或多個(gè)ig水平，點(diǎn)從各種先天性或獲得性免疫缺陷病中可見(jiàn)。繼發(fā)性往往與免疫抑制劑應(yīng)用、射線、蛋白質(zhì)損失、營(yíng)養(yǎng)不良等有關(guān)。細(xì)胞毒性藥物治療后也可以看到。2 .Ig含量增加：(1)多克隆性增加，各種慢性感染，慢性肝病，SLE，RA，SS等一些自身免疫性疾病，結(jié)節(jié)病等。(2)單克隆性增加，又稱“M”蛋白，主要見(jiàn)于免疫增殖性疾病(如多發(fā)性骨髓瘤、中鏈病、

4、斜頸病、巨球蛋白血癥等)。注意事項(xiàng)Ig水平與年齡、性別有一定關(guān)系，Ig含量因檢查方法的不同而不同，參考值也不同，在判斷結(jié)果時(shí)必須綜合考慮。如果有“M蛋白”牙齒，可以進(jìn)一步進(jìn)行血清或尿液免疫傳記電泳，以檢測(cè)斜頸和中鏈。2 .血清總IgE測(cè)定IgE是血清含量最低的免疫球蛋白，與過(guò)敏疾病和寄生蟲感染有關(guān)。目前有多種檢查方法，包括ECLIA、間接血細(xì)胞凝固檢查、RIA、電化學(xué)發(fā)光法(Electrochemiluminescence Immuno Assay)參考值0.1-150IU/ml，臨床意義1。IgE增加：IgE型多發(fā)性骨髓瘤、特應(yīng)性哮喘、特應(yīng)性皮炎、過(guò)敏性鼻炎、寄生蟲感染、熱帶嗜酸細(xì)胞增多癥、

5、SLE、RA、部分霉菌病等。減少Ige:通常沒(méi)有意義。原發(fā)性無(wú)病種球蛋白血癥，惡性腫瘤及細(xì)胞毒治療后可見(jiàn)。州的年齡、性別可能影響IgE總水平。一般男性比女性高。新生兒水平低，青春期水平最高，30多歲后逐漸減少。不同種族的血清總IgE水平也有差異。混血人種比白人高34倍，黑人水平更高，黃種人水平也更高。總IgE水平高不一定表示過(guò)敏。過(guò)敏的總IgE也不一定高。因此，在評(píng)估總體IgE結(jié)果時(shí)，必須考慮上述因素。，3 .特異性IgE抗體(sIgE)檢測(cè)過(guò)敏患者的血清中，具有變性特異性的IgE稱為特異性IgE，牛奶過(guò)敏者有針對(duì)牛奶過(guò)敏原的IgE。對(duì)艾蒿花粉過(guò)敏的人有針對(duì)牙齒花粉的IgE，牙齒抗體只能與牙齒

6、過(guò)敏原理性結(jié)合。4 .血清補(bǔ)體測(cè)定補(bǔ)體是血清中具有酶活性的蛋白質(zhì)組。它由20多種蛋白質(zhì)組成。機(jī)體受到醫(yī)院微生物攻擊時(shí)，如果存在抗體，補(bǔ)體會(huì)參與滅virus或殺bacteria的免疫反應(yīng)。在自身免疫疾病中，complement還可以參與破壞自己的組織或細(xì)胞，引起免疫病理?yè)p傷。測(cè)定血清補(bǔ)體活性或其單補(bǔ)體成分含量對(duì)許多疾病的診斷和鑒別診斷、療效觀察及發(fā)病機(jī)制的研究具有一定的臨床意義。(a)總補(bǔ)體活性測(cè)定(50% hemolytic unit of complement，CH50) Complement發(fā)生對(duì)溶血素(抗體)敏感的SRBC破裂，可能發(fā)生溶血，補(bǔ)體活性與溶血程度呈正相關(guān)根據(jù)生產(chǎn)50%溶血所

7、需的最小補(bǔ)充量，可以計(jì)算血清總補(bǔ)體的活性。參考值75160 U/ml臨床意義增加：在各種急性炎癥、組織損傷、心肌梗塞、部分惡性腫瘤等方面常見(jiàn)。減少：見(jiàn)于各種免疫復(fù)合性物性疾病，如SLE、急、慢性腎小球腎炎、自身免疫性溶血性貧血。還可以看到病毒性肝炎、DIC、蛋白質(zhì)損失性腸病、嚴(yán)重燙傷、急性骨髓性白血病等。注意事項(xiàng)測(cè)定對(duì)象血清新鮮，沒(méi)有溶血。測(cè)量方法有試管法、微量板法、近年來(lái)又有生化儀器法等。方法不同，參考值也不同。(2)補(bǔ)體C3測(cè)量(Complement 3，C3) C3是補(bǔ)體系統(tǒng)各組中含量最高的組，是激活補(bǔ)體傳統(tǒng)路徑和迂回路徑的關(guān)鍵成分。檢測(cè)方法主要有RID、免疫濁度、速度散射濁度等。參考值

8、0.8-1.55g/L，臨床意義1。增加C3:見(jiàn)于部分急性炎癥、傳染病早期及部分惡性腫瘤等。2.減少C3:見(jiàn)于SLE、RA、急性腎小球腎炎、肝病、冷球蛋白血癥等。狼瘡腎炎血清中C3含量降低，病情好轉(zhuǎn)后含量恢復(fù)正常。(3)，補(bǔ)體C4測(cè)量(Complement 4，C4) C4是多功能1-球蛋白和補(bǔ)體系統(tǒng)的主要成分。在補(bǔ)體的傳統(tǒng)激活途徑中發(fā)揮重要作用。分解的產(chǎn)物對(duì)補(bǔ)體的激活、促進(jìn)吞咽、防止免疫復(fù)合物沉積、毒素中和等有很大作用。檢測(cè)方法與C3測(cè)量方法相同。參考值0.160.47g/L臨床意義1。上升：在風(fēng)濕病熱的急性發(fā)作期、結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周圍炎、皮炎、心肌梗塞、升綜合征和各種類型的關(guān)節(jié)炎中可見(jiàn)。2.減少

9、：見(jiàn)于自身免疫性疾病，如SLE、RA、慢性活動(dòng)性肝炎、多發(fā)性硬化癥、IgA型腎病等。在SLE中，C4含量明顯下降，比C3早減少。5 .循環(huán)免疫復(fù)合物(Circulating immunocomplex，CIC，)CIC是體內(nèi)自由抗原和抗體結(jié)合的產(chǎn)物。復(fù)合物可分為大、中、小三種。大的復(fù)合物(19s)可以被吞噬細(xì)胞去除。中間復(fù)合物(約19s)存在于腎基膜、皮膚基底膜、血管內(nèi)膜、關(guān)節(jié)滑膜等局部病變部位。只有小的復(fù)合物(19s)脫離血液和體液，成為可溶解的CIC。CIC測(cè)定對(duì)免疫復(fù)合物病、自身免疫病、肝病的診斷、療效觀察、預(yù)后判斷都具有重要意義。測(cè)試方法有聚乙烯乙二醇沉淀法、C1q結(jié)合法等多種。PEG

10、會(huì)引起蛋白質(zhì)沉淀，蛋白質(zhì)分子越大，沉淀所需的PEG濃度就越小。CIC分子量大，抗原-抗體結(jié)合后，結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，低濃度PEG在液相中析出，PEG抑制CIC解體，將CIC聚合成更大的凝聚物沉淀，用分光光度法測(cè)定波長(zhǎng)450nm處的吸光度。通過(guò)計(jì)算濁度值，可以知道CIC的存在和含量。參考值PEG沉淀法：10U/ml臨床意義1。CIC陽(yáng)性在SLE、RA等自身免疫病中很常見(jiàn)，還可以看到血清素、慢性活動(dòng)性肝炎、細(xì)菌感染、傳染病、惡性腫瘤等。2.動(dòng)態(tài)檢測(cè)CIC的變化，監(jiān)測(cè)疾病的發(fā)展、判斷效能和預(yù)后。參考值取決于方法。牙齒方法快速簡(jiǎn)便，但特異性不好，只適合檢查。低密度脂蛋白的濁度增加，所以空腹要取血。高球蛋白血

11、癥和標(biāo)本反復(fù)冷凍，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。6 .T淋巴細(xì)胞亞群(T cell subpopulation)測(cè)量T cell牙齒功能不同，可分為T輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞等多個(gè)子群組。t抑制/細(xì)胞毒性細(xì)胞等。根據(jù)t細(xì)胞表面分化抗原(CD)CD3；中選擇所需的構(gòu)件。CD4；CD8等。同一CD表型的細(xì)胞功能可能不同。例如，CD8細(xì)胞有T抑制細(xì)胞和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞。t細(xì)胞各子群的相互協(xié)調(diào)穩(wěn)定地調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫反應(yīng)反應(yīng)。使用抗CD抗原(如抗CD3、抗CD4、抗CD8等)的單克隆抗體，外周血單核細(xì)胞檢查，根據(jù)每個(gè)單抗的陽(yáng)性率判定每個(gè)T cell亞型，并計(jì)算CD4/CD8的比例。測(cè)量方法包括IFA、IEA、APAAP方法、流

12、式細(xì)胞法等。參考值(IFA法)總T細(xì)胞(CD3)53-88%；CD4細(xì)胞32-60%；CD8細(xì)胞是20%到40%。CD4 /CD8 1.5-2.0。(流式細(xì)胞術(shù))總T細(xì)胞(CD3)955-2860/L；CD4細(xì)胞27-51%，550-1440 l；CD8細(xì)胞是15-44%，320-1250l。CD4 /CD8 0.64-2.85。T cell子組(臨床意義)可以引起許多林爽疾病，特別是免疫功能受損的患者的異常變化。測(cè)量T cell的變化對(duì)了解疾病的發(fā)病機(jī)制，指導(dǎo)臨床治療，控制疾病的發(fā)生有重要意義。1.SLE、RA、自身免疫性溶血性貧血、乙型肝炎患者經(jīng)常出現(xiàn)CD8細(xì)胞數(shù)量和功能下降，有時(shí)CD4細(xì)

13、胞升高，CD4 /CD8比例升高。2 .免疫缺陷病患者CD4 /CD8比例減少，例如AIDS患者，CD4明顯減少，經(jīng)常出現(xiàn)CD4 /CD8比例反轉(zhuǎn)。經(jīng)常用作艾滋病毒感染者的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。3.感染性疾病患者的免疫抑制功能得到提高，CD8細(xì)胞的數(shù)量和功能異常提高。病毒感染后，CD3，CD4細(xì)胞減少，CD8細(xì)胞增加，CD4 /CD8比例降低。4 .腫瘤患者CD3、CD4細(xì)胞明顯減少，CD8牙齒明顯增加，CD4 /CD8比例明顯降低。因此，可以了解機(jī)體的免疫狀態(tài)，并指導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)劑及治療藥物的應(yīng)用。5.支氣管哮喘患者在過(guò)敏原刺激后，外周血CD4 T細(xì)胞迅速減少，支氣管肺泡灌洗液中CD3，CD4，CD8 T細(xì)

14、胞增加。過(guò)敏性鼻炎患者CD3、CD4、CD8 T細(xì)胞均低于正常人。6.血液系統(tǒng)疾病T cell子組也相應(yīng)改變。例如再生障礙性貧血，粒細(xì)胞減少癥時(shí)CD4細(xì)胞減少，CD8細(xì)胞增加，CD3 /CD8比例減少。注意事項(xiàng)、T cell子組檢測(cè)方法很多，參考值也不同，因此在判斷結(jié)果時(shí)必須全面考慮，并結(jié)合林爽和其他檢查。、還可以利用商法測(cè)量B細(xì)胞、NK細(xì)胞等。流式細(xì)胞法，B細(xì)胞絕對(duì)值為90-560/l，百分比為5-18%，NK細(xì)胞的絕對(duì)對(duì)數(shù)為150-1100/l，百分比為7-40%。中國(guó)人的NK細(xì)胞價(jià)值比其他種族高。第四節(jié)自體免疫病和風(fēng)濕病的免疫學(xué)檢查、自體免疫病(AID)是指因過(guò)度、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)的自體免疫反

15、應(yīng)，導(dǎo)致組織器官受損、相應(yīng)器官病變或林爽癥狀的疾病。風(fēng)濕病是與關(guān)節(jié)、軟骨、肌肉等結(jié)合組織相關(guān)的慢性疾病。實(shí)驗(yàn)室檢查，特別是免疫學(xué)檢查，對(duì)AID和風(fēng)濕病的診斷很重要。某些檢查可以用作診斷指標(biāo)之一。部分檢查可以用作疾病進(jìn)展和預(yù)后判斷的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。部分檢查可以用作藥物療效的評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。隨著免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展和分子生物學(xué)的應(yīng)用，各種自身抗體檢查在臨床上的應(yīng)用越來(lái)越多。作為臨床醫(yī)生，要熟悉這些檢查的意義，結(jié)合林爽及其他檢查，客觀地利用這些指標(biāo)，幫助診斷，了解病情，指導(dǎo)治療。這里只介紹臨床上常用的部分自體抗體檢查。，1 .抗核抗體(Antinuclear antibody，ANA)測(cè)定ANA是抗核各種成分的

16、自身抗體，沒(méi)有從屬和器官特異性。ANA可分為抗DNA抗體、抗組蛋白抗體、抗組蛋白抗體、抗核抗體和其他細(xì)胞成分抗體。牙齒抗體共同形成ANA光譜。常用的檢測(cè)方法包括IFA、ELISA、免疫印跡法、RIA、免疫斑點(diǎn)法、膠體金標(biāo)記斑點(diǎn)免疫滲透法等。其中，IFA是更廣泛使用的方法。一般使用大鼠肝切片或Hep-2細(xì)胞作為底物抗原片段，放入患者血清后，患者血清中的ANA可以與細(xì)胞中相應(yīng)的抗原成分結(jié)合。加上熒光標(biāo)記項(xiàng)IgG，在熒光顯微鏡下可以看到細(xì)胞核內(nèi)明亮的綠色熒光。參考值1:10或陰性臨床醫(yī)生的ANA陽(yáng)性在多種疾病中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)常用于風(fēng)濕及自身免疫性疾病的診斷。SLE患者的陽(yáng)性率為95以上，療效總是1: 80

17、以上。其他風(fēng)濕癥，例如RA、系統(tǒng)性硬化、皮炎、干燥綜合征(SS)、混合結(jié)締組織病(MCTD)，也可以培養(yǎng)。肝病，病毒感染等其他也可能是低效力的陽(yáng)性。ANA陽(yáng)性，在熒光顯微鏡下一般分為4茄子類型。(1)均勻，SLE作為對(duì)DNA和粗蛋白復(fù)合物的抗體；在中常見(jiàn)。(2)外圍型或膜型，主要是針對(duì)雙鏈DNA的抗體，一般只在SLE活動(dòng)期間可見(jiàn)。(3)斑點(diǎn)型是對(duì)可提取的核抗原(ENA)的抗體，見(jiàn)于SLE、MCTD等許多風(fēng)濕疾病中。(4)核型，主要是針對(duì)RNA的抗體，主要見(jiàn)于系統(tǒng)硬化癥。(。注意事項(xiàng)正常人中，尤其是老年人中，可能有低價(jià)ANA，服用口服避孕藥的女性也能檢測(cè)到ANA。(a)抗Sm抗體Sm是患者Smith的縮寫。Sm抗原屬于SnRNP，由5個(gè)RNA和多肽組成，抗原表位于29KD，28KD，13.5KD多肽上，抗Sm抗體是酸性糖蛋白，是SLE的標(biāo)記抗體。(b)抗nRNP(u1RNP)抗體u1RNP由u1RNA和蛋白質(zhì)組成，抗原表位于73KD，32KD，17.5KD多肽上，是MLTD的重要血清標(biāo)記。(c)抗SSA抗體SS是干燥綜合征的縮寫。牙齒抗體也稱為航路抗體。S