GB-T15400-1994 飼料中色氨酸測(cè)定方法--分光光度法

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

飼料中色氨酸測(cè)定方法

分光光度法

GB/T15400一94

Determinationoftryptophaninfeedstuffs

-Spectrophotometry

1主題內(nèi)容與適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)定飼料中色氨酸的原理和方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、混合飼料、濃縮飼料和單一飼料。

2引用標(biāo)準(zhǔn)

GB6433飼料粗脂肪測(cè)定方法

3原理

飼料中蛋白質(zhì)經(jīng)堿水解后，降解成多膚和游離的氨基酸，在酸性介質(zhì)中，氧化劑存在下，色氦酸U91

環(huán)與對(duì)二甲氨基苯甲醛反應(yīng)生成藍(lán)色化合物，在一定范圍內(nèi)顏色深淺與色氨酸含量成正比。

4試劑

除注明者外均為分析純。水為蒸餾水。

4.1硫酸(GB625)溶液、c(1/2H2SO4)=21.2mot/L

墾取589ml硫酸徐徐加入約350mL水中，冷卻后用水稀釋至1L.

4.21%對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液:

1.0g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶于21.2mot/L硫酸((4.1)中并定容100mL,

4.30.2%亞硝酸鈉(GB633)溶液(m/V),

4.4lo/氫氧化鉀(GB2306)溶液(m/V)

4.Sl,色氨酸，色譜純。

4.61,色氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:

準(zhǔn)確稱取25.0mgL一色氨酸于小燒杯中，加少量0.1MOl/I氫氧化鉀溶液使之溶解，定量地轉(zhuǎn)移

到250ml棕色容量瓶中，用水定容，濃度為100pg/mL

注:本標(biāo)準(zhǔn)溶液4℃冰箱中保存，一個(gè)月內(nèi)使用，濃度不變.

5儀器、設(shè)備

分析天平:感量。.1mg,

分光光度計(jì)。

離心機(jī):轉(zhuǎn)速4000r/min,

實(shí)驗(yàn)室用粉碎機(jī)

51525354

國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局1994一12一30批準(zhǔn)

1995一07一01實(shí)施

GB/T15400一94

培養(yǎng)箱。

容覺(jué)瓶:25ml-,50mL,250mL,

10in[-具塞試管。

刻度吸管:。.5mL,2ml-5mL,25ml。

試樣的制備

‘︺八匕7口OU

樂(lè)樂(lè)55.6

6.1選取有代表性的試樣，按四分法縮分至200g，粉碎，全部通過(guò)。.25mm孔徑篩(6。目)

6.2按GB6433脫脂并測(cè)定脂肪含量。脫脂樣品風(fēng)干后，混勻，裝入密封容器內(nèi)備用。

了分析步驟

了門皿作曲線的繪制

7.1.1吸取色氨酸濃度為100pg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液(4.6)5.00,7.50,10.00,12.50,15.00,17.50mL分

別置于25ml,棕色容量瓶中用水定容，搖勻。溶液濃度分別為20,30,40,50,60,70pg/m工一。

7.1.2吸取各濃度溶液(7.1.1)1mL，分置具塞試管(5.7)中，空白管加1mL水。向每支試管內(nèi)加入氫

氧化鉀溶液((4.4)1ml，混勻，將試管放入冷水盆中，加5mL對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液((4.2).從冷水盆中

取出試管，搖勻，在室溫(20-30'C，下同)放置30min,

7.1.3向上述每支試管內(nèi)加。.2mL亞硝酸鈉溶液(4.3)，搖勻，室溫放置25min,

7.1.4以空白管調(diào)零，在590nm波長(zhǎng)下，以1cm光徑測(cè)定各溶液吸光度值。

7.1.5以色氨酸濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線，或列出回歸方程式

7.2樣品測(cè)定

7.2.1稱樣:按附表A建議的稱樣量稱取脫脂試樣兩份，精確至0_lmg,

7.2.2水解:將試樣置于50mL容量瓶((5.6)中，在輕輕振搖中緩慢加入25ml氫氧化鉀溶液(4.4),

使試樣濕潤(rùn)且不粘壁，置于4011℃培養(yǎng)箱(3.5)中水解16^18h,

7.2.3離心:取出水解液冷卻至室溫后，用水定容，播勻，取部分水解液以4000r/min轉(zhuǎn)速離心

15min,

7.2.4顯色:取2mL上清液置具塞試管((5.7)中，并將試管放入冷水盆中，加入5mL對(duì)二甲氨基苯甲

醛溶液(4.2)，搖勻。每個(gè)試樣另取2mL上清液于具塞試管((5.7)中，加5m1硫酸溶液((4.1)作為樣品

空白，搖勻，室溫放置30min。然后向每支試管內(nèi)加入。.2mL亞硝酸鈉溶液((4.3)，搖勻，室溫放置

25min,

7.2.5比色:以樣品空白調(diào)零，在590nm波長(zhǎng)處1cm光徑測(cè)定樣品溶液的吸光度值。

8分析結(jié)果的表述

計(jì)算公式

色氨酸(脫脂樣)(%)

AX25

MX10'X100

一

色氨酸(原樣)(%)

AX25X(1一F)

一MX10,

X100

?！撝嚇淤|(zhì)量,mg;

A—從工作曲線上查得色氨酸含量,Kg;

F-月旨肪分率。

結(jié)果的表示

1中2

樂(lè)式8.

Ga/T15400一94

兩個(gè)平行樣品的測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留二位小數(shù)。

試樣脂肪含量小于4%時(shí)，式(1)和(2)所得結(jié)果在允許偏差之內(nèi)

8.3重復(fù)性

兩個(gè)平行樣品測(cè)定值的相對(duì)偏差，當(dāng)色氨酸含量小于。.1%時(shí).

大于3%;大于。50%時(shí)，不大于2%0

不大于4%;0.10%一0.50%時(shí)，不

GB/T15400一94

At

錄樣

附稱

(參考件)

根據(jù)樣品蛋白質(zhì)、色氨酸含量確定稱樣量，經(jīng)試驗(yàn)研究建議不同飼料稱樣量如下:

蛋白質(zhì)含量，%飼料種類稱樣量,mg

10以下高粱、玉米

650--700

11^20

小麥、大麥、糠數(shù)、糠餅、配合料、混合料、各種葉粉等

450^-500

21^30

干面抽、千粉渣、豆腐渣、雜豆、糟渣類350^-400

31^-40

棉仁餅、菜籽餅、蓖麻餅、向日葵餅、濃縮料

200^-250

41^50

蝦粉、豆餅、芝麻餅、醉母、豆粕、花生餅、國(guó)產(chǎn)魚粉

180^200

50以上

魚粉、血粉、肉骨粉、蠶蛹、羽毛粉

160-180

附加說(shuō)明