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1、DNA粗提取與鑒定,學(xué)習(xí)目標(biāo) 知識(shí)目標(biāo) 1、通過(guò)嘗試對(duì)植物或動(dòng)物組織中的DNA進(jìn)行粗提取,了解DNA的物理化學(xué)性質(zhì)。 2、理解DNA粗提取與鑒定的原理。 能力目標(biāo) 掌握DNA粗提取及鑒定方法,能利用DNA的性質(zhì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和操作。 態(tài)度觀(guān)念目標(biāo) 通過(guò)對(duì)DNA的粗提取的實(shí)驗(yàn)過(guò)程的設(shè)計(jì)及操作,鍛煉科學(xué)的思維方法,培養(yǎng)實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度。,1、雞血細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)材料,一是因?yàn)殡u血細(xì)胞核的DNA含量豐富,材料易得;二是雞血細(xì)胞極易吸水脹破。 2、DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同, 3、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶,其作用是分解蛋白質(zhì),使提取出的DNA純度較高 4、預(yù)冷的乙醇溶液具有以下優(yōu)點(diǎn):一是
2、抑制核酸水解酶活性,防止DNA降解,二是降低分子運(yùn)動(dòng),易于形成沉淀析出,三是低溫有利于增加DNA分子柔韌性,減少斷裂; 5、洗滌劑等去污劑可以溶解細(xì)胞的細(xì)胞壁,破壞細(xì)胞膜,同時(shí)也能使蛋白質(zhì)變性; 6、在6075度條件下加溫處理,蛋白質(zhì)變性,而DNA結(jié)構(gòu)不會(huì)受到破壞,提取純度較高的DNA 7、甲基綠能使DNA染成綠色,根據(jù)以上原理可設(shè)計(jì)提取和純化DNA的方案: 方案一:30mL含DNA的濾液2mol/L NaCl同方向攪拌,DNA溶解加入蒸餾水DNA析出過(guò)濾得到過(guò)濾物放到2mol/LNaCl溶液中溶解DNA-NaCl溶解液 方案二:30mL濾液嫩肉粉(木瓜蛋白酶)靜置1015分鐘DNA濾液 方案
3、三:30mL濾液6075恒溫保溫1015分鐘過(guò)濾獲得DNA濾液,兩種材料的DNA粗提取與鑒定過(guò)程,以雞血為材料 以花菜為材料,釋放組織細(xì)胞中的DNA, 粗提取DNA, 將粗提取的DNA進(jìn)一步純化, 鑒定提取物是DNA,雞血細(xì)胞液中DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)流程圖,2mol/L,雞血細(xì)胞液中DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)流程圖,5、過(guò)濾取紗布上的濾物,紗布過(guò)濾,6、再次溶解DNA,2mol/LNaCl溶液,取濾物,雞血細(xì)胞液中DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)流程圖,7、加冷酒精使DNA析出(純化),冷酒精,雞血細(xì)胞液中DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)流程圖,DNA的鑒定,總結(jié):,1. 下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說(shuō)法正確的是 A氯化鈉的濃度越低,對(duì)DNA的溶解度越大 B人血也可代替雞血進(jìn)行實(shí)驗(yàn) C檸檬酸鈉的主要作用是加速血細(xì)胞破裂 DDNA不能溶于酒精 2. 在破碎雞血細(xì)胞時(shí),要先加入20ml的蒸餾水,其作用是 A. DNA溶解于水 B 血細(xì)胞破裂,DNA釋放 C稀釋血液,防止凝固 D 有利于攪拌 3. 若選擇的實(shí)驗(yàn)材料為植物細(xì)胞,破碎細(xì)胞時(shí)要加入一定量的洗滌劑和食鹽,加入食鹽的目的是 A. 利于DNA的溶解 B. 分離DNA和蛋白質(zhì) C. 溶解細(xì)胞膜 D. 溶解蛋白質(zhì) 4. 在DNA粗提取實(shí)驗(yàn)中,向在溶解DNA的
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