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1、實訓(xùn)一 顯微鏡的使用和微生物測微技術(shù),食品微生物學(xué),1,一、實驗?zāi)康?1. 練習(xí)和掌握顯微鏡的使用方法(低倍鏡、高倍鏡、油鏡)。 2. 掌握使用測微尺測定微生物大小的方法,熟悉微生物大小的一般概念。,2,二、實驗原理,(一)顯微鏡的結(jié)構(gòu)、光學(xué)原理和操作方法 1.顯微鏡分機(jī)械系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)兩部分 機(jī)械系統(tǒng)包括:鏡筒、轉(zhuǎn)換器、載物臺、鏡臂、鏡座、粗準(zhǔn)焦螺旋、細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。 光學(xué)系統(tǒng)包括:目鏡、物鏡、聚光器、光源、濾光片、虹彩光圈。,3,雙目光學(xué)顯微鏡,二、實驗原理,4,(二)顯微鏡的光學(xué)原理,1.成像原理 光路:光源虹彩光圈聚光鏡通光孔標(biāo)本(一定要透明)物鏡鏡筒目鏡眼。,二、實驗原理,5,(三)油鏡
2、工作原理,香柏油的折光率(1.51-1.52)與玻璃 片折光率(1.52)相近似,因此在物鏡(玻璃)與標(biāo)本載片(玻璃)之間加入香柏油可以使光線不致因從一個介質(zhì)(玻璃)進(jìn)入到另一折光率不同的介質(zhì)即空氣(折光率為1.0)而引起部分散射,造成亮度不夠而觀察不清,這對透鏡彎曲度較大,直徑較小(通過光線亦較?。┑挠顽R頭是特別重要的。 做法是在用油鏡觀察時要把油鏡頭(100)浸入香柏油中。,二、實驗原理,6,1.物測微尺 物測微尺是一厚玻片,中央有一圓形蓋玻片,中央刻有1mm長的標(biāo)尺,等分為100格,每格100m,用以標(biāo)定目測微尺,在不同放大倍數(shù)下每格的實際長度。,二、實驗原理,(四)測微技術(shù),7,二、實
3、驗原理,8,2.目測微尺的標(biāo)定,將目測微尺裝入目鏡的隔板上,使刻度朝下;把物測微尺放在載物臺上使刻度朝上。用低倍鏡找到目測微尺的刻度,移動物測微尺和目測微尺,使兩者的第一條刻度線重合,順著刻度找到另一條重合刻度線。計算在該放大倍數(shù)下目測微尺每個小格的實際長度。 目測微尺每小格長度(m)=,二、實驗原理,9,用物測微尺標(biāo)定目測微尺,二、實驗原理,10,1.材料 枯草芽孢染色涂片。 金黃色葡萄球菌涂片。 酵母菌染色涂片。 2.用具:顯微鏡、二甲苯、香柏油、鏡頭紙、物測微尺、目測微尺。,三、實驗材料和用具,11,(一)顯微鏡的使用 1.取鏡和安放 右手握住鏡臂,左手托住鏡座。 把顯微鏡放在水平的實驗
4、臺上,略偏左(顯微鏡放在距實驗臺邊緣7厘米左右處)。,四、實驗方法,12,2.低倍鏡的操作 置顯微鏡于固定的桌上,接通電源,打開光源。 將標(biāo)本片放在載物臺上,是觀察的目的物處于圓孔的正中央。 將粗準(zhǔn)焦螺旋向下旋轉(zhuǎn),眼睛在測向注視物鏡,防止物鏡和載玻片相碰。 張開雙眼向物鏡里觀察,如果見到目的物,但不十分清楚,可用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,至目的物清晰為止。注意觀察時兩眼應(yīng)同時睜開。使用單筒顯微鏡,應(yīng)習(xí)慣用左眼觀察,以便繪圖。,四、實驗方法,13,3.高倍鏡的操作 使用高倍鏡前,必須先用低倍鏡觀察,發(fā)現(xiàn)目的物后將它移至視野正中處。 旋動轉(zhuǎn)換器換高倍鏡。如果高倍鏡觸及載玻片立即停止旋動,這說明原來低倍鏡并沒有調(diào)
5、準(zhǔn),目的物并沒有真正找到,必須用低倍鏡重新調(diào)節(jié)。如果高倍鏡下觀察目的物有點(diǎn)模糊,調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,直到視野清晰。調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋時要注意旋轉(zhuǎn)方向與載物臺上升或下降的關(guān)系,防止鏡頭與載玻片強(qiáng)力接觸,損壞鏡頭或載玻片。,四、實驗方法,14,4.油鏡的操作 如果用高倍鏡目的物未能看清,可用油鏡。先用低倍鏡和高倍鏡檢查標(biāo)本片,將目的物移到視野正中。 在載玻片上滴一滴香柏油(或液體石蠟),將油鏡移至正中使油鏡頭浸沒在油中,剛好貼近載玻片。用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋微微向上調(diào)(切忌不用粗準(zhǔn)焦螺旋)即可。 油鏡觀察完畢,用油鏡紙將鏡頭上的油揩凈,另用擦鏡紙蘸少許二甲苯揩拭鏡頭,再用擦鏡紙揩干。,四、實驗方法,15,5.顯微鏡
6、使用注意事項,.顯微鏡應(yīng)置于平坦的桌面上。 .將標(biāo)本片夾在顯微鏡載物臺的十字夾中,注意要正面向上。 .先用低倍鏡再用高倍鏡觀察尋找目的物,此時要控制視野不能太亮,注意區(qū)別鏡頭上的灰塵和目的物。 .在標(biāo)本中央滴加一小滴香柏油,從鏡筒側(cè)面觀察,將油鏡(100)輕輕旋下,使它浸在香柏油內(nèi)。切勿猛烈的將鏡頭壓在標(biāo)本片上,防止損壞物鏡!,四、實驗方法,16,.將眼睛移至目鏡,一邊觀察一邊慢慢旋動粗準(zhǔn)焦螺旋,將載物臺上提。當(dāng)見到物象時,再用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)至圖像清晰。對于單目顯微鏡,使用油鏡時要將聚光器盡量上升,虹彩光圈放大。 .注意在旋動粗準(zhǔn)焦螺旋時,必須特別小心。決不能在觀察時將載物臺很快提升,以免損傷螺
7、旋。 .假如用油鏡時一再看不清目的物,可驗看油中是否存在氣泡。如存在氣泡,可將鏡頭及標(biāo)本片上的油擦去,重新滴加。,四、實驗方法,17,.觀察完畢后,下降載物臺,取下標(biāo)本片,用干凈的擦鏡紙蘸少量的二甲苯,輕揩去載玻片上的香柏油后,立即用干擦鏡紙揩干。 .收存顯微鏡時,應(yīng)將最短的鏡頭對準(zhǔn)透光孔,或?qū)⑽镧R的長鏡頭轉(zhuǎn)成“八”字式,使兩個鏡頭同時擱在載物臺上。切勿將長鏡頭對準(zhǔn)透光孔,以免與聚光器相碰而損壞。鏡臺、鏡身上占有水及污物,必須及時擦去。然后套上顯微鏡罩,對號放入顯微鏡箱中鎖好。,四、實驗方法,18,(二)微生物測微,1.分別在低倍鏡、高倍鏡和油鏡下進(jìn)行目測微尺的標(biāo)定。 2.菌體大小的測量 將物
8、測微尺取下,換上標(biāo)本片,選擇適當(dāng)?shù)奈镧R測量目的物的大小,分別找出菌體的長和寬占目測微尺的格數(shù),再按照目測微尺1格的長度算出菌體的長度和寬度。用目測微尺測量微生物的大小。即可算出標(biāo)本(菌體)的大小。,四、實驗方法,19,1.在低倍鏡、高倍鏡和油鏡下觀察標(biāo)本片 2.測量菌體的大小 在高倍鏡下測量酵母的大小(測1020個菌,求平均值)。 在油鏡下測枯草芽孢桿菌的長與寬,測金黃色葡萄球菌的直徑(測量1020個菌體求平均值)。 在低倍鏡下求出目測微尺每格長度后,再用同法求出在高倍鏡下和油鏡下(物測微尺上需加1滴香柏油)目測微尺每格的長度。,五、實驗內(nèi)容,20,1.繪出油鏡下的枯草芽孢染色涂片、金黃色葡萄球菌涂片,高倍鏡下酵母菌染色涂片。 2.微生物大小的測量的結(jié)果填入下列空白 在低倍鏡下:目鏡測微尺( )格鏡臺測微尺( )格 目鏡測微尺每格( ) m 在高倍鏡下:目鏡測微尺( )格鏡臺測微尺( )格 目鏡測微尺每格 ( ) m,六、實驗報告,21,在油鏡下:目鏡測微尺( )格鏡臺測微尺( )格 目鏡測微尺每格 ( )m 枯草桿菌在油鏡下:長目鏡測微尺( )格 ( )m 寬目鏡測微尺( )格( )m 金黃色葡萄球菌在油鏡下: 直徑目鏡測微尺( )格= ( )m 酵母菌在高倍鏡下:長目鏡測微尺( )格 ( ) m 寬目鏡測
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