實訓(xùn)一 顯微鏡的使用和微生物測微技術(shù)ppt課件.ppt

1、實訓(xùn)一 顯微鏡的使用和微生物測微技術(shù),食品微生物學(xué),1,一、實驗?zāi)康?1. 練習(xí)和掌握顯微鏡的使用方法（低倍鏡、高倍鏡、油鏡）。 2. 掌握使用測微尺測定微生物大小的方法，熟悉微生物大小的一般概念。,2,二、實驗原理,（一）顯微鏡的結(jié)構(gòu)、光學(xué)原理和操作方法 1.顯微鏡分機(jī)械系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)兩部分 機(jī)械系統(tǒng)包括：鏡筒、轉(zhuǎn)換器、載物臺、鏡臂、鏡座、粗準(zhǔn)焦螺旋、細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。 光學(xué)系統(tǒng)包括：目鏡、物鏡、聚光器、光源、濾光片、虹彩光圈。,3,雙目光學(xué)顯微鏡,二、實驗原理,4,（二）顯微鏡的光學(xué)原理,1.成像原理 光路：光源虹彩光圈聚光鏡通光孔標(biāo)本（一定要透明）物鏡鏡筒目鏡眼。,二、實驗原理,5,(三)油鏡

2、工作原理,香柏油的折光率（1.51-1.52）與玻璃 片折光率（1.52）相近似，因此在物鏡（玻璃）與標(biāo)本載片（玻璃）之間加入香柏油可以使光線不致因從一個介質(zhì)（玻璃）進(jìn)入到另一折光率不同的介質(zhì)即空氣（折光率為1.0）而引起部分散射，造成亮度不夠而觀察不清，這對透鏡彎曲度較大，直徑較小（通過光線亦較?。┑挠顽R頭是特別重要的。 做法是在用油鏡觀察時要把油鏡頭（100）浸入香柏油中。,二、實驗原理,6,1.物測微尺 物測微尺是一厚玻片，中央有一圓形蓋玻片，中央刻有1mm長的標(biāo)尺，等分為100格，每格100m，用以標(biāo)定目測微尺，在不同放大倍數(shù)下每格的實際長度。,二、實驗原理,(四)測微技術(shù),7,二、實

3、驗原理,8,2.目測微尺的標(biāo)定,將目測微尺裝入目鏡的隔板上，使刻度朝下；把物測微尺放在載物臺上使刻度朝上。用低倍鏡找到目測微尺的刻度，移動物測微尺和目測微尺，使兩者的第一條刻度線重合，順著刻度找到另一條重合刻度線。計算在該放大倍數(shù)下目測微尺每個小格的實際長度。 目測微尺每小格長度(m)=,二、實驗原理,9,用物測微尺標(biāo)定目測微尺,二、實驗原理,10,1.材料 枯草芽孢染色涂片。 金黃色葡萄球菌涂片。 酵母菌染色涂片。 2.用具：顯微鏡、二甲苯、香柏油、鏡頭紙、物測微尺、目測微尺。,三、實驗材料和用具,11,（一）顯微鏡的使用 1.取鏡和安放 右手握住鏡臂，左手托住鏡座。 把顯微鏡放在水平的實驗

4、臺上，略偏左（顯微鏡放在距實驗臺邊緣7厘米左右處）。,四、實驗方法,12,2.低倍鏡的操作 置顯微鏡于固定的桌上，接通電源，打開光源。 將標(biāo)本片放在載物臺上，是觀察的目的物處于圓孔的正中央。 將粗準(zhǔn)焦螺旋向下旋轉(zhuǎn)，眼睛在測向注視物鏡，防止物鏡和載玻片相碰。 張開雙眼向物鏡里觀察，如果見到目的物，但不十分清楚，可用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，至目的物清晰為止。注意觀察時兩眼應(yīng)同時睜開。使用單筒顯微鏡，應(yīng)習(xí)慣用左眼觀察，以便繪圖。,四、實驗方法,13,3.高倍鏡的操作 使用高倍鏡前，必須先用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后將它移至視野正中處。 旋動轉(zhuǎn)換器換高倍鏡。如果高倍鏡觸及載玻片立即停止旋動，這說明原來低倍鏡并沒有調(diào)

5、準(zhǔn)，目的物并沒有真正找到，必須用低倍鏡重新調(diào)節(jié)。如果高倍鏡下觀察目的物有點(diǎn)模糊，調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，直到視野清晰。調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋時要注意旋轉(zhuǎn)方向與載物臺上升或下降的關(guān)系，防止鏡頭與載玻片強(qiáng)力接觸，損壞鏡頭或載玻片。,四、實驗方法,14,4.油鏡的操作 如果用高倍鏡目的物未能看清，可用油鏡。先用低倍鏡和高倍鏡檢查標(biāo)本片，將目的物移到視野正中。 在載玻片上滴一滴香柏油（或液體石蠟），將油鏡移至正中使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片。用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋微微向上調(diào)（切忌不用粗準(zhǔn)焦螺旋）即可。 油鏡觀察完畢，用油鏡紙將鏡頭上的油揩凈，另用擦鏡紙蘸少許二甲苯揩拭鏡頭，再用擦鏡紙揩干。,四、實驗方法,15,5.顯微鏡

6、使用注意事項,.顯微鏡應(yīng)置于平坦的桌面上。 .將標(biāo)本片夾在顯微鏡載物臺的十字夾中，注意要正面向上。 .先用低倍鏡再用高倍鏡觀察尋找目的物，此時要控制視野不能太亮，注意區(qū)別鏡頭上的灰塵和目的物。 .在標(biāo)本中央滴加一小滴香柏油，從鏡筒側(cè)面觀察，將油鏡（100）輕輕旋下，使它浸在香柏油內(nèi)。切勿猛烈的將鏡頭壓在標(biāo)本片上，防止損壞物鏡！,四、實驗方法,16,.將眼睛移至目鏡，一邊觀察一邊慢慢旋動粗準(zhǔn)焦螺旋，將載物臺上提。當(dāng)見到物象時，再用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)至圖像清晰。對于單目顯微鏡，使用油鏡時要將聚光器盡量上升，虹彩光圈放大。 .注意在旋動粗準(zhǔn)焦螺旋時，必須特別小心。決不能在觀察時將載物臺很快提升，以免損傷螺

7、旋。 .假如用油鏡時一再看不清目的物，可驗看油中是否存在氣泡。如存在氣泡，可將鏡頭及標(biāo)本片上的油擦去，重新滴加。,四、實驗方法,17,.觀察完畢后，下降載物臺，取下標(biāo)本片，用干凈的擦鏡紙蘸少量的二甲苯，輕揩去載玻片上的香柏油后，立即用干擦鏡紙揩干。 .收存顯微鏡時，應(yīng)將最短的鏡頭對準(zhǔn)透光孔，或?qū)⑽镧R的長鏡頭轉(zhuǎn)成“八”字式，使兩個鏡頭同時擱在載物臺上。切勿將長鏡頭對準(zhǔn)透光孔，以免與聚光器相碰而損壞。鏡臺、鏡身上占有水及污物，必須及時擦去。然后套上顯微鏡罩，對號放入顯微鏡箱中鎖好。,四、實驗方法,18,（二）微生物測微,1.分別在低倍鏡、高倍鏡和油鏡下進(jìn)行目測微尺的標(biāo)定。 2.菌體大小的測量 將物

8、測微尺取下，換上標(biāo)本片，選擇適當(dāng)?shù)奈镧R測量目的物的大小，分別找出菌體的長和寬占目測微尺的格數(shù)，再按照目測微尺1格的長度算出菌體的長度和寬度。用目測微尺測量微生物的大小。即可算出標(biāo)本（菌體）的大小。,四、實驗方法,19,1.在低倍鏡、高倍鏡和油鏡下觀察標(biāo)本片 2.測量菌體的大小 在高倍鏡下測量酵母的大小(測1020個菌，求平均值)。 在油鏡下測枯草芽孢桿菌的長與寬，測金黃色葡萄球菌的直徑(測量1020個菌體求平均值)。 在低倍鏡下求出目測微尺每格長度后，再用同法求出在高倍鏡下和油鏡下(物測微尺上需加1滴香柏油)目測微尺每格的長度。,五、實驗內(nèi)容,20,1.繪出油鏡下的枯草芽孢染色涂片、金黃色葡萄球菌涂片，高倍鏡下酵母菌染色涂片。 2.微生物大小的測量的結(jié)果填入下列空白 在低倍鏡下：目鏡測微尺（ ）格鏡臺測微尺（ ）格 目鏡測微尺每格（ ） m 在高倍鏡下：目鏡測微尺（ ）格鏡臺測微尺（ ）格 目鏡測微尺每格 （ ） m,六、實驗報告,21,在油鏡下：目鏡測微尺（ ）格鏡臺測微尺（ ）格 目鏡測微尺每格 （ ）m 枯草桿菌在油鏡下：長目鏡測微尺（ ）格 （ ）m 寬目鏡測微尺（ ）格（ ）m 金黃色葡萄球菌在油鏡下： 直徑目鏡測微尺（ ）格= （ ）m 酵母菌在高倍鏡下：長目鏡測微尺（ ）格 （ ） m 寬目鏡測