紫外分光法C(藥學(xué)).ppt

1、第三節(jié) 紫外-可見分光光度分析方法,一、定性分析 二、定量分析,一、定性分析,（一）定性鑒別 (生色團和助色團及其共軛） 原則：吸收光譜完全相同，則可能是同一種化合物； 如兩者有明顯差別，則肯定不是同一種化合物。 定性鑒別的依據(jù)吸收光譜的特征 吸收光譜的形狀 吸收峰的數(shù)目 吸收峰的位置（波長） 吸收峰的強度 相應(yīng)的吸光系數(shù),續(xù)前,1對比吸收光譜的特征值,續(xù)前,2對比吸光度或吸光系數(shù)的比值：,例：,續(xù)前,3對比吸收光譜的一致性,醋酸潑尼松 醋酸氫化可的松 醋酸可的松 同一測定條件下， 與標(biāo)準(zhǔn)對照物譜圖或標(biāo)準(zhǔn)譜圖 進行對照比較,續(xù)前,（二）純度檢查,1純度檢查（雜質(zhì)檢查）,1）峰位不重疊： 找使主

2、成分無吸收，雜質(zhì)有吸收直接考察雜質(zhì)含量 2）峰位重疊： 主成分強吸收，雜質(zhì)無吸收 / 弱吸收與純品比較，E 雜質(zhì)強吸收 主成分吸收與純品比較，E，光譜變形,續(xù)前,2雜質(zhì)限量的測定：,例：腎上腺素中微量雜質(zhì)腎上腺酮含量計算 2mg/mL -0.05mol/L的HCL溶液， 310nm下測定 規(guī)定 A3100.05 即符合要求的雜質(zhì)限量0.06%,二、定量分析,（一）單組分的定量方法,1吸光系數(shù)法 2標(biāo)準(zhǔn)曲線法 3對照法,續(xù)前,1吸光系數(shù)法（絕對法）,練習(xí),例：維生素B12 的水溶液在361nm處的百分吸光系數(shù)為207，用1cm比色池測得某維生素B12溶液的吸光度是0.414，求該溶液的濃度 。,

3、解：,練習(xí),例：精密稱取B12樣品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm處測定吸光度為0.507，求B12的百分含量？,解：,練習(xí),例：,解：,續(xù)前,2標(biāo)準(zhǔn)曲線法,示例,蘆丁含量測定,續(xù)前,3對照法：外標(biāo)一點法,注：當(dāng)樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的 稀釋倍數(shù)相同時,練習(xí),例： 維生素B12的含量測定 精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀釋至10.00mL；另配制對照液，精密稱定對照品25.00mg，加水稀釋至1000mL。在361nm處，用1cm吸收池，分別測定吸光度為0.508和0.518，求B1

4、2注射液注射液的濃度以及標(biāo)示量的百分含量（該B12注射液的標(biāo)示量為100g / mL）。,解：,1）對照法,練習(xí),2）吸光系數(shù)法,4、測定弱酸（堿）離解常數(shù)：,例題：配制某弱酸的HCl 0.5mol/L,NaOH 0.5mol/L和鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液（pH=4.00）的3種溶液，其濃度均為含該弱酸0.001g/100ml。在max=590nm處分別測出其吸光度如表。求該弱酸的pKa. pH A(max=590nm) 主要存在形式 4 0.430 HIn與In- 堿 1.024 In- 酸 0.002 HIn,解：,續(xù)前,（二）多組分的定量方法,三種情況： 1兩組分吸收光譜不重疊（互不干擾）

5、 兩組分在各自max下不重疊分別按單組分定量,續(xù)前,2兩組分吸收光譜部分重疊,續(xù)前,3兩組分吸收光譜完全重疊混合樣品測定,（1）解線性方程組法 （2）等吸收雙波長消去法 （3）系數(shù)倍率法,(1)解線性方程組法,步驟：,(2)等吸收雙波長法,步驟：,消除a的影響測b,續(xù)前,消去b的影響測a,注：須滿足兩個基本條件 選定的兩個波長下干擾組分具有等吸收點 選定的兩個波長下待測物的吸光度差值應(yīng)足夠大,(3)系數(shù)倍率法,前提： 干擾組分b不成峰形 無等吸收點,續(xù)前,步驟：b曲線上任找一點1 另一點2,優(yōu)點：同時將待測組分和干擾組分放大信號K倍， 提高了待測組分測定靈敏度,練習(xí),解：,1取咖啡酸，在165

6、干燥至恒重，精密稱取10.00mg，加少量 乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至200mL容量瓶中，加水至刻度線。取此溶 液5.00mL，置于50mL容量瓶中，加6mol/L的HCL 4mL，加 水至刻度線。取此溶液于1cm比色池中，在323nm處測定吸 光度為0.463，已知該波長處的 ，求咖啡酸百分 含量.,練習(xí),解：,2精密稱取0.0500g樣品，置于250mL容量瓶中，加入 0.02mol/L HCL溶解，稀釋至刻度。準(zhǔn)確吸取2mL，稀釋至 100mL。以0.02mol/L HCL為空白,在263nm處用1cm吸收池 測定透光率為41.7%，其摩爾吸光系數(shù)為12000，被測物分 子量為100.0，試計算2

7、63nm處 和樣品的百分含量。,4.導(dǎo)數(shù)光譜法 導(dǎo)數(shù)技術(shù) derivative technology 導(dǎo)數(shù)分光光度法 derivative spectrophotometry, DS 優(yōu)點：多組分同時測定； 渾濁樣品分析； 消除背景干擾； 復(fù)雜光譜辨析等,（1）基本原理 根據(jù)Lambet-Beer定律：,一階導(dǎo)數(shù)方程：,導(dǎo)數(shù)光譜法的定量依據(jù) ： 吸光度的n階導(dǎo)數(shù)與待測組分的濃度成線性關(guān)系。,導(dǎo)數(shù)光譜的繪制： 將吸光度（或透光度T）對波長求一階 導(dǎo)數(shù)，并將一階導(dǎo)數(shù)信號對波長作圖，便得 到一階導(dǎo)數(shù)曲線（光譜）。以類似的方法可 獲得二階、三階、四階導(dǎo)數(shù)光譜曲線。,導(dǎo)數(shù)光譜的特征： 零階導(dǎo)數(shù)曲線極大處

8、，相應(yīng)的奇數(shù)階（n=1,3,5)導(dǎo)數(shù)曲線通過零點;零階曲線的拐點處，奇階導(dǎo)數(shù)曲線為極大或極小值。 零階導(dǎo)數(shù)的峰值對應(yīng)于偶階導(dǎo)數(shù)曲線的極值；極大和極小隨導(dǎo)數(shù)階數(shù)上升而交替出現(xiàn)；零階曲線的拐點在偶階導(dǎo)數(shù)中通過零點。 隨著導(dǎo)數(shù)階數(shù)的增加，譜帶變銳，帶寬變窄，曲線的極值增多。 極值數(shù)=導(dǎo)數(shù)階數(shù)+1,導(dǎo)數(shù)光譜法定量數(shù)據(jù)的測量: 基線法 峰-谷法 峰-零法,b,5、其它分光光度法簡介： 示差分光光度法：準(zhǔn)確測定高濃度或低濃度。 原理： 假設(shè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為Cs，待測液濃度為Cx 則,定量依據(jù)：,測定方法： 高吸光度示差測量 用比待測溶液濃度稍低的參比溶液調(diào)節(jié)透光率為100%，再測定待測溶液的吸光度。,100%,T=0,例題：8.57g/LKMnO4溶液與525nm波長下，以蒸餾水為參比溶液，測得其T%=21.6，然后，將上述溶