國家自然科學(xué)基金研究方案撰寫技巧課件

1、國家自然科學(xué)基金 研究方案撰寫技巧,1,學(xué)習(xí)交流PPT,NSFC項(xiàng)目申請書內(nèi)容,簡表、摘要 立項(xiàng)依據(jù) 研究方案 研究條件與基礎(chǔ) 經(jīng)費(fèi)預(yù)算,2,學(xué)習(xí)交流PPT,NSFC研究方案: 330分,1. 研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題（80分） 范圍合適：3-5個內(nèi)容：n重點(diǎn)突出：1-2個重點(diǎn)：關(guān)鍵問題選擇準(zhǔn)確： 2. 技術(shù)路線（90分） 設(shè)計(jì)合理：方法可行：成熟可靠; 可重復(fù)性強(qiáng) 3. 研究方法及手段（90分） 方法先進(jìn)：技術(shù)成熟可靠：有創(chuàng)新： 4. 研究的預(yù)期目標(biāo)（70分）：可以達(dá)到，留有余地。 發(fā)表論文：申請專利：可應(yīng)用產(chǎn)品的開發(fā)：,3,學(xué)習(xí)交流PPT,摘要的主要內(nèi)容是研究方案,如：“用方法進(jìn)行研究，

2、探索/證明問題，對闡明機(jī)制 揭示規(guī)律有重要意義，為奠定基礎(chǔ)提供思路 ”,4,學(xué)習(xí)交流PPT,立論依據(jù)、研究方案與研究基礎(chǔ)的系 立論依據(jù)：闡述背景和理由，回答“為什么” 研究方案：是申請書的核心，回答“怎么做” 研究基礎(chǔ)：展示積累和實(shí)力，建立“信任感”,5,學(xué)習(xí)交流PPT,研究方案,研究目標(biāo)、研究內(nèi)容和擬解決關(guān)鍵問題 研究方法、技術(shù)路線 年度研究計(jì)劃及預(yù)期進(jìn)展,6,學(xué)習(xí)交流PPT,1. 研究目標(biāo),撰寫要求： 有限目標(biāo)，與研究內(nèi)容相呼應(yīng) 如：探索問題，明確關(guān)系，揭示規(guī)律， 闡明原理（機(jī)制），建立方法等,7,學(xué)習(xí)交流PPT,【研究目標(biāo)】,篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確 部分基因在白內(nèi)障形成中的

3、作用，從晶狀體上 皮變化的角度闡明白內(nèi)障的發(fā)生機(jī)理，為防治白內(nèi)障提供線索。,8,學(xué)習(xí)交流PPT,研究目標(biāo),1個目標(biāo): 解決科學(xué)問題和學(xué)術(shù)性問題 關(guān)鍵問題12個，并與目標(biāo)一致 問題：目標(biāo)“大、平、淺” 沒有做到“專、精、深” 應(yīng)提倡“小題大做”,9,學(xué)習(xí)交流PPT,2、研究內(nèi)容,存在問題：內(nèi)容過多，一個研究周期難以完成；內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo)。 撰寫要求：內(nèi)容要適當(dāng)，確保研究周期內(nèi)完成； 與目標(biāo)相輔相成，為研究目標(biāo)服務(wù)。篇幅要適度，注意與技術(shù)路線區(qū)別。,10,學(xué)習(xí)交流PPT,研究內(nèi)容: 相對集中的有限目標(biāo) 和研究目的要一致，要有能支持新思路相應(yīng)的新內(nèi)容，體現(xiàn)出創(chuàng)新點(diǎn)和特色。 深入的文獻(xiàn)調(diào)

4、研：凝煉出的科學(xué)問題是什么？ 采用什么創(chuàng)新的方法、途徑、思路解決這個科學(xué)問題？ 解決這個科學(xué)問題對學(xué)術(shù)界和臨床有什么意義？ 對社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展有何潛在的指導(dǎo)價值？,11,學(xué)習(xí)交流PPT,3. 研究方法,（1）病例納入與排除方法 （2）（臨床）檢測指標(biāo)與標(biāo)本采集 （2）基本研究方法 （3）特殊研究方法 （4）統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,12,學(xué)習(xí)交流PPT,材料或研究對象 模型與目標(biāo)及內(nèi)容相吻合；材料 可靠，對象可控制；自擬處方 要論證。 分 組(方 案) 設(shè)計(jì)和樣本量要符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求， 對照要嚴(yán)格。 方 法 在保證準(zhǔn)確、可靠的前提下，盡 可能要有創(chuàng)新。 指 標(biāo) 針對性強(qiáng)是第一位。盡量采用最 新的專一性強(qiáng)的指標(biāo)并

5、要論證其 可行性和適用性。,13,學(xué)習(xí)交流PPT,介紹技術(shù)方法的技巧 成熟的方法要簡要介紹，重點(diǎn)闡明應(yīng)用于本研究的依據(jù) 新方法要詳細(xì)介紹其原理，并闡明可以應(yīng)用于本研究 的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 注意：必須對所運(yùn)用的技術(shù)方法原理、流程及在實(shí)際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚。,14,學(xué)習(xí)交流PPT,研究方法常見問題 過于簡單：在實(shí)驗(yàn)方案中只有方法名稱而無具體步驟。 過于繁雜：大量羅列一些常規(guī)的實(shí)驗(yàn)方法。 撰寫要求：以研究項(xiàng)目的需求為前提，盡量采用目前 最先進(jìn)的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體 現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中。,15,學(xué)習(xí)交流PPT,4、擬解決的關(guān)鍵問題 什么是關(guān)鍵問題 ？ -研究過程中對達(dá)預(yù)

6、期目標(biāo)有重要影響的 某些研究內(nèi)容或因素。 -為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或 研究手段。 撰寫要求：找出關(guān)鍵問題，寫出解決辦法。,16,學(xué)習(xí)交流PPT,技術(shù)路線：路線圖，簡單明了,17,學(xué)習(xí)交流PPT,5、技術(shù)路線 存在問題： 不清楚，不詳細(xì)，不可行。 撰寫要求： 清晰、詳細(xì)、注意邏輯性。 撰寫方法： 以時間順序?yàn)橹骶€設(shè)計(jì)技術(shù)路線 以研究內(nèi)容為主線設(shè)計(jì)技術(shù)路線 分大小標(biāo)題，突出邏輯關(guān)系。 詳細(xì)地寫清楚每個具體步驟。,18,學(xué)習(xí)交流PPT,研究目標(biāo)、研究內(nèi)容、研究方法、 技術(shù)路線及其關(guān)系 1、首先要確定研究目標(biāo)：國內(nèi)外現(xiàn)狀分析中提出的 具體科學(xué)問題就是項(xiàng)目的研究目標(biāo)2、依據(jù)目標(biāo)確定研究內(nèi)容，根

7、據(jù)內(nèi)容選擇研究方法3、研究內(nèi)容與技術(shù)路線的區(qū)別： 研究內(nèi)容：重點(diǎn)回答觀察什么指標(biāo)、階段目標(biāo)。 技術(shù)路線：重點(diǎn)回答怎么做的操作流程。,19,學(xué)習(xí)交流PPT,6、可行性分析 理論分析：學(xué)術(shù)可行性 研究手段、方法分析：技術(shù)可行性 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：前期基礎(chǔ) 對所具備的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行分析 對項(xiàng)目組成員搭配及其運(yùn)用技術(shù)方法的能力分析,20,學(xué)習(xí)交流PPT,7、創(chuàng)新性 對創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進(jìn)性是有根本區(qū)別的。 原始創(chuàng)新： 填補(bǔ)空白或修改傳統(tǒng)的理論； 新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。 跟蹤創(chuàng)新： 在前人工作基礎(chǔ)上補(bǔ)充、完善現(xiàn)有理論； 對原有技術(shù)方法修改后產(chǎn)生112的效果。,21,學(xué)習(xí)交流PPT,8、年度研究計(jì)劃及

8、預(yù)期研究結(jié)果 年度研究計(jì)劃： 按年度列出：研究內(nèi)容及其階段目標(biāo)；擬組織 的重要學(xué)術(shù)交流活動、國際合作與交流計(jì)劃等。 預(yù)期研究結(jié)果： 理論成果：建立/豐富/補(bǔ)充/填補(bǔ) . 技術(shù)方法：建立/完善 . 專 利：可望獲得 論 文：國際、國內(nèi) 人才培養(yǎng)：青年科技骨干、博碩研究生,22,學(xué)習(xí)交流PPT,研究方案寫作要點(diǎn),條理清楚 邏輯性 目標(biāo)明確 重要性 論據(jù)充分 科學(xué)性 方法可行 可行性 基礎(chǔ)良好 優(yōu)越性,23,學(xué)習(xí)交流PPT,案例分享,題目： 溫腎健脾針法對脾腎兩虛型肥胖腸道脂代謝核心菌群的調(diào)控機(jī)理,24,學(xué)習(xí)交流PPT,【摘 要】,腸道菌群不僅轉(zhuǎn)化膽汁酸影響脂肪吸收，而且與體重及肥胖關(guān)系密切。中醫(yī)將

9、單純性肥胖分為脾虛濕阻、脾腎兩虛等型，針?biāo)幘锌隙ǒ熜?，但缺乏諸如調(diào)節(jié)腸道菌群等微觀機(jī)理研究。本課題擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50例，比較其腸道菌群構(gòu)成與脂代謝特征、大便膽酸鹽譜及短鏈脂肪酸譜、大便能量與膳食纖維殘存量、血液脂代謝關(guān)鍵激素(Leptin,insulin, Cholecystokinin)及FIAF酶含量，以期揭示脾腎兩虛型肥胖證之能量收獲及脂代謝核心菌群，及其導(dǎo)致機(jī)體脂質(zhì)異常和肥胖的關(guān)聯(lián)機(jī)制。以溫腎健脾針法治療至肥胖癥狀及BMI指標(biāo)明顯改善；采用前述方法檢測療效前30名每2周收集的血清與大便樣本，獲得溫針法對腸道菌群及其脂代謝的動態(tài)調(diào)控模式。本項(xiàng)目可望揭示脾腎

10、兩虛型肥胖與腸道菌群之能量與脂代謝異?？哼M(jìn)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)溫腎健脾針法的全新治療機(jī)理，拓展中醫(yī)藥肥胖治療理論，并為多學(xué)科攻克肥胖作出奠基性貢獻(xiàn)。,25,學(xué)習(xí)交流PPT,研究意義,腸道菌群與機(jī)體能量及脂質(zhì)代謝關(guān)系密切，肥胖患者腸道含有促進(jìn)能量收獲與脂肪貯存的核心菌群。但不同證型肥胖患者是否有特定的核心菌群？脾腎兩虛型肥胖相關(guān)核心菌群有何特征？針刺減肥作用機(jī)理之中，是否包括并如何調(diào)整腸道菌群？本課題擬完成這些十分重要的探索性研究。具體研究意義有三： （1）揭示脾腎兩虛型肥胖證能量及脂代謝核心菌群，開啟針刺減肥研究新領(lǐng)域； （2）建立溫腎健脾針法經(jīng)由調(diào)整腸道脂代謝相關(guān)的核心菌群而減肥的新學(xué)說； （3）

11、構(gòu)建針?biāo)帨p肥與腸道菌群研究新平臺，促進(jìn)肥胖機(jī)理研究與藥物研發(fā)。,26,學(xué)習(xí)交流PPT,研究目標(biāo),揭示脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進(jìn)能量收獲與脂代謝的腸道核心菌群，闡明溫腎健脾針法通過調(diào)整脂代謝菌群而治療肥胖的新機(jī)制，建立證候與腸道菌群研究平臺。,27,學(xué)習(xí)交流PPT,2.1 研究內(nèi)容,基于上述目標(biāo)，本項(xiàng)目擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50名，以及療效評分前30名患者治療中采集樣本，完成下述研究： 2.2.1篩查促進(jìn)脂肪代謝的腸道核心菌群。篩查對脂肪代謝起促進(jìn)、抑制或雙向作用的代表性菌屬，然后采用自動菌種鑒定儀進(jìn)一步鑒定到種。這三方面代表性細(xì)菌，組成與脂代謝直接相關(guān)的腸道核心菌群。

12、2.2.2分析膽汁酸譜、短鏈脂肪酸譜等大便脂代謝相關(guān)分子種類與含量。 2.2.3 檢測單位大便卡路里殘存率、膳食纖維含量。 2.2.4測試肥胖相關(guān)激素(leptin,insulin, Cholecystokinin)與FIAF酶含量。 2.2.5體外試驗(yàn)該核心菌群的能量收獲效率。 2.2.6整合研究，揭示患者能量與脂代謝核心菌群特征，以及針刺減肥新機(jī)理。,28,學(xué)習(xí)交流PPT,2.3 擬解決的關(guān)鍵問題,宿主的生存環(huán)境、生活方式、遺傳背景、生理病理狀態(tài)、免疫功能、疾病史與用藥史等多種因素，都可影響特定個體的腸道菌群。如何排除眾多干擾因素，獲得脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進(jìn)能量收獲與脂肪代謝的腸道核

13、心菌群，是本項(xiàng)目擬解決的關(guān)鍵問題。本項(xiàng)目擬采取下述四種方法，針對性地排除干擾因素，解決此關(guān)鍵問題 （1）嚴(yán)格病例納入。采用中西醫(yī)肥胖診斷權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)，病證結(jié)合納入病例。 （2）巧妙設(shè)計(jì)對照。 （3）強(qiáng)化檢測指標(biāo)的互補(bǔ)性、相互驗(yàn)證性。 （4）設(shè)計(jì)體外驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。,29,學(xué)習(xí)交流PPT,圖2. 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線流程簡圖,30,學(xué)習(xí)交流PPT,3.2 研究方法和技術(shù)要點(diǎn)簡述,3.2.1 典型脾腎兩虛型肥胖證患者的納入、治療與療效判斷標(biāo)準(zhǔn) 為保障試驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)意義，同時考慮不超過20%的退出率，確定樣本量為50例。由經(jīng)過培訓(xùn)的中醫(yī)與西醫(yī)診斷學(xué)專家，納入符合脾腎兩虛型肥胖證患者，以及年齡、性別、生活狀況等相匹配

14、的健康對照。,31,學(xué)習(xí)交流PPT,3.2.1.2治療方法,脾腎兩虛型肥胖針灸治療上，以溫腎健脾為主。故多選用脾經(jīng)、腎經(jīng)、任脈和背部膀胱經(jīng)的腧穴。因?yàn)榕R床顯著的個體差異，本項(xiàng)目僅在此提出治則，具體的治療方案隨臨臨床癥狀體征而靈活應(yīng)用（胡玲香等，2007）。但一般遵循如下基本原則： 腧穴選擇：主穴之體穴主要取天樞、神闕、中極、關(guān)元、足三里、太溪、豐隆、三陰交、脾俞、腎俞等，均取雙側(cè)；耳穴：內(nèi)分泌、大腸、三焦、腦點(diǎn)等。脾腎兩虛型配穴常取脾俞、腎俞、太白，等。 針法選擇：選用溫針或溫補(bǔ)法為主。 操作方法：在本校附屬醫(yī)院針灸科診斷室以常規(guī)方法，完成操作。隔日針灸1次，10次為一療程，20天后觀察療效。

15、休息3日，繼續(xù)第2療程治療。針刺治療時間選擇在飯后1小時后進(jìn)行。,32,學(xué)習(xí)交流PPT,3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法簡介,3.2.2.1 核心菌群的篩查 采用選擇性培養(yǎng)基，從待測大便樣品中篩選出與脂代謝密切相關(guān)的菌屬。擬采用下述培養(yǎng)基（丁維俊等,2007）：雙歧桿菌屬：BS培養(yǎng)基(但用申請者改進(jìn)的以新鮮番茄汁代替多種維生素)。乳桿菌屬：LBS培養(yǎng)基;按標(biāo)準(zhǔn)配方自制。類桿菌屬：KV培養(yǎng)基;將購自上海生物制品所的厭氧菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基(NO：98404)滅菌后冷卻至55，加入兔血(5)、卡那霉素(100g/m1)、硫酸鏈霉素(5g/m1)及Vk1(0.1)，傾注平皿。柔嫩梭菌屬：MRS培養(yǎng)基; M. Smith

16、ii菌:MBC培養(yǎng)基（補(bǔ)充3g/L formate,3g/L acetate, 0.006% Na2S)；B.thetaiotaomicron菌：Shaedler培養(yǎng)基；均按Martin等（2007）介紹的腸道菌選擇培養(yǎng)基配方自制。實(shí)驗(yàn)時，用無菌稱量紙取糞便0.1g放入0.9ml稀釋液，使之稀釋10倍。然后用一系列無菌稀釋管作對數(shù)稀釋至10-8。依據(jù)申請者前期研究經(jīng)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，選擇不同培養(yǎng)基的接種稀釋度。用微量移液器取20l滴于培養(yǎng)基表面。每個稀釋度滴三滴，同一培養(yǎng)皿上滴種三個稀釋度。然后迅速置于DY-II型厭氧培養(yǎng)箱中，37培養(yǎng)48h。計(jì)數(shù)培養(yǎng)皿表面的菌落形成單位數(shù)量，乘以稀釋倍數(shù)，即

17、得到每克糞便標(biāo)本的菌落形成單位數(shù)（CFU）。采用PEMS 3.0統(tǒng)計(jì)軟件包，用t檢驗(yàn)分析不同組別的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著性。,33,學(xué)習(xí)交流PPT,3.2.2.2 UPLCMS法分析大便膽汁酸及其代謝中產(chǎn)物譜,擬使用由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)研究中心開放實(shí)驗(yàn)室提供的Waters公司ACQUITY UPLC檢測系統(tǒng)，參照Martin等(2007)建立的方法，完成大便檢測。標(biāo)準(zhǔn)品由Sigma公司購買。質(zhì)譜檢測在Waters公司產(chǎn)品TOF LCT-Premier (Waters MS Technologies, Manchester, UK)完成。其操作過程如下。取低溫保存的大便浸出液，用1:1甲基氰:水混合液調(diào)整

18、濃度至1mg/ml，上ACQUITY BEH C18 1.7m柱，以500 ul/min流速洗脫12min，洗脫液組成由甲基氰：水40:60比例逐漸調(diào)整為60:40(pH4.0)。將分批收集的洗脫樣品上Q-TOF質(zhì)譜分析系統(tǒng)，以亮氨酸腦啡肽為參照，采用W-optic通路、毛細(xì)管電壓2.6 kV、錐體電壓50 V、噴霧氣流600ul/h等條件，完成檢測。每個樣品重復(fù)掃描10次，得其平均值。,34,學(xué)習(xí)交流PPT,3.2.2.8核心菌群能量收獲與脂代謝效率的體外試驗(yàn),采用Kihara等(2002)建立的微量培養(yǎng)法，檢測待測樣本對大豆寡聚糖(soybean oligosacchride),乳果糖(l

19、actulose),棉子糖(raffinose), 蔗果三糖(kestose)等四種代表性膳食纖維成分的分解與利用效率。其基本操作程序如下。將上述四種膳食纖維分別加到牛心腦浸出液（BHI）培養(yǎng)基中（終濃度為20g/L），按0.5ml/孔接種于24孔培養(yǎng)板。將待測大便樣本作10-2,10-3,10-4,10-5稀釋，然后接種于培養(yǎng)板(每個濃度梯度設(shè)置3個重復(fù)樣)。放入細(xì)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h后，應(yīng)用前述“酶-重量法” 測定培養(yǎng)液中膳食纖維殘留量、GCFID 法分析新合成短鏈脂肪酸（SCFA）種類與數(shù)量（樣本中原先含有的SCFA，但經(jīng)102至105倍稀釋后，可忽略不計(jì)），從而確認(rèn)腸道菌群樣本的能量收獲與脂代謝功能。,35,學(xué)習(xí)交流PPT