國家自然科學基金研究方案撰寫技巧課件

1、國家自然科學基金 研究方案撰寫技巧,1,學習交流PPT,NSFC項目申請書內(nèi)容,簡表、摘要 立項依據(jù) 研究方案 研究條件與基礎(chǔ) 經(jīng)費預算,2,學習交流PPT,NSFC研究方案: 330分,1. 研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題（80分） 范圍合適：3-5個內(nèi)容：n重點突出：1-2個重點：關(guān)鍵問題選擇準確： 2. 技術(shù)路線（90分） 設(shè)計合理：方法可行：成熟可靠; 可重復性強 3. 研究方法及手段（90分） 方法先進：技術(shù)成熟可靠：有創(chuàng)新： 4. 研究的預期目標（70分）：可以達到，留有余地。 發(fā)表論文：申請專利：可應(yīng)用產(chǎn)品的開發(fā)：,3,學習交流PPT,摘要的主要內(nèi)容是研究方案,如：“用方法進行研究，

2、探索/證明問題，對闡明機制 揭示規(guī)律有重要意義，為奠定基礎(chǔ)提供思路 ”,4,學習交流PPT,立論依據(jù)、研究方案與研究基礎(chǔ)的系 立論依據(jù)：闡述背景和理由，回答“為什么” 研究方案：是申請書的核心，回答“怎么做” 研究基礎(chǔ)：展示積累和實力，建立“信任感”,5,學習交流PPT,研究方案,研究目標、研究內(nèi)容和擬解決關(guān)鍵問題 研究方法、技術(shù)路線 年度研究計劃及預期進展,6,學習交流PPT,1. 研究目標,撰寫要求： 有限目標，與研究內(nèi)容相呼應(yīng) 如：探索問題，明確關(guān)系，揭示規(guī)律， 闡明原理（機制），建立方法等,7,學習交流PPT,【研究目標】,篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確 部分基因在白內(nèi)障形成中的

3、作用，從晶狀體上 皮變化的角度闡明白內(nèi)障的發(fā)生機理，為防治白內(nèi)障提供線索。,8,學習交流PPT,研究目標,1個目標: 解決科學問題和學術(shù)性問題 關(guān)鍵問題12個，并與目標一致 問題：目標“大、平、淺” 沒有做到“專、精、深” 應(yīng)提倡“小題大做”,9,學習交流PPT,2、研究內(nèi)容,存在問題：內(nèi)容過多，一個研究周期難以完成；內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標。 撰寫要求：內(nèi)容要適當，確保研究周期內(nèi)完成； 與目標相輔相成，為研究目標服務(wù)。篇幅要適度，注意與技術(shù)路線區(qū)別。,10,學習交流PPT,研究內(nèi)容: 相對集中的有限目標 和研究目的要一致，要有能支持新思路相應(yīng)的新內(nèi)容，體現(xiàn)出創(chuàng)新點和特色。 深入的文獻調(diào)

4、研：凝煉出的科學問題是什么？ 采用什么創(chuàng)新的方法、途徑、思路解決這個科學問題？ 解決這個科學問題對學術(shù)界和臨床有什么意義？ 對社會經(jīng)濟的發(fā)展有何潛在的指導價值？,11,學習交流PPT,3. 研究方法,（1）病例納入與排除方法 （2）（臨床）檢測指標與標本采集 （2）基本研究方法 （3）特殊研究方法 （4）統(tǒng)計學處理,12,學習交流PPT,材料或研究對象 模型與目標及內(nèi)容相吻合；材料 可靠，對象可控制；自擬處方 要論證。 分 組(方 案) 設(shè)計和樣本量要符合統(tǒng)計學要求， 對照要嚴格。 方 法 在保證準確、可靠的前提下，盡 可能要有創(chuàng)新。 指 標 針對性強是第一位。盡量采用最 新的專一性強的指標并

5、要論證其 可行性和適用性。,13,學習交流PPT,介紹技術(shù)方法的技巧 成熟的方法要簡要介紹，重點闡明應(yīng)用于本研究的依據(jù) 新方法要詳細介紹其原理，并闡明可以應(yīng)用于本研究 的理論依據(jù)和實驗依據(jù)。 注意：必須對所運用的技術(shù)方法原理、流程及在實際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚。,14,學習交流PPT,研究方法常見問題 過于簡單：在實驗方案中只有方法名稱而無具體步驟。 過于繁雜：大量羅列一些常規(guī)的實驗方法。 撰寫要求：以研究項目的需求為前提，盡量采用目前 最先進的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體 現(xiàn)在技術(shù)路線當中。,15,學習交流PPT,4、擬解決的關(guān)鍵問題 什么是關(guān)鍵問題 ？ -研究過程中對達預

6、期目標有重要影響的 某些研究內(nèi)容或因素。 -為達預期目標所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或 研究手段。 撰寫要求：找出關(guān)鍵問題，寫出解決辦法。,16,學習交流PPT,技術(shù)路線：路線圖，簡單明了,17,學習交流PPT,5、技術(shù)路線 存在問題： 不清楚，不詳細，不可行。 撰寫要求： 清晰、詳細、注意邏輯性。 撰寫方法： 以時間順序為主線設(shè)計技術(shù)路線 以研究內(nèi)容為主線設(shè)計技術(shù)路線 分大小標題，突出邏輯關(guān)系。 詳細地寫清楚每個具體步驟。,18,學習交流PPT,研究目標、研究內(nèi)容、研究方法、 技術(shù)路線及其關(guān)系 1、首先要確定研究目標：國內(nèi)外現(xiàn)狀分析中提出的 具體科學問題就是項目的研究目標2、依據(jù)目標確定研究內(nèi)容，根

7、據(jù)內(nèi)容選擇研究方法3、研究內(nèi)容與技術(shù)路線的區(qū)別： 研究內(nèi)容：重點回答觀察什么指標、階段目標。 技術(shù)路線：重點回答怎么做的操作流程。,19,學習交流PPT,6、可行性分析 理論分析：學術(shù)可行性 研究手段、方法分析：技術(shù)可行性 預實驗結(jié)果分析：前期基礎(chǔ) 對所具備的實驗條件進行分析 對項目組成員搭配及其運用技術(shù)方法的能力分析,20,學習交流PPT,7、創(chuàng)新性 對創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進性是有根本區(qū)別的。 原始創(chuàng)新： 填補空白或修改傳統(tǒng)的理論； 新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。 跟蹤創(chuàng)新： 在前人工作基礎(chǔ)上補充、完善現(xiàn)有理論； 對原有技術(shù)方法修改后產(chǎn)生112的效果。,21,學習交流PPT,8、年度研究計劃及

8、預期研究結(jié)果 年度研究計劃： 按年度列出：研究內(nèi)容及其階段目標；擬組織 的重要學術(shù)交流活動、國際合作與交流計劃等。 預期研究結(jié)果： 理論成果：建立/豐富/補充/填補 . 技術(shù)方法：建立/完善 . 專 利：可望獲得 論 文：國際、國內(nèi) 人才培養(yǎng)：青年科技骨干、博碩研究生,22,學習交流PPT,研究方案寫作要點,條理清楚 邏輯性 目標明確 重要性 論據(jù)充分 科學性 方法可行 可行性 基礎(chǔ)良好 優(yōu)越性,23,學習交流PPT,案例分享,題目： 溫腎健脾針法對脾腎兩虛型肥胖腸道脂代謝核心菌群的調(diào)控機理,24,學習交流PPT,【摘 要】,腸道菌群不僅轉(zhuǎn)化膽汁酸影響脂肪吸收，而且與體重及肥胖關(guān)系密切。中醫(yī)將

9、單純性肥胖分為脾虛濕阻、脾腎兩虛等型，針藥均有肯定療效，但缺乏諸如調(diào)節(jié)腸道菌群等微觀機理研究。本課題擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50例，比較其腸道菌群構(gòu)成與脂代謝特征、大便膽酸鹽譜及短鏈脂肪酸譜、大便能量與膳食纖維殘存量、血液脂代謝關(guān)鍵激素(Leptin,insulin, Cholecystokinin)及FIAF酶含量，以期揭示脾腎兩虛型肥胖證之能量收獲及脂代謝核心菌群，及其導致機體脂質(zhì)異常和肥胖的關(guān)聯(lián)機制。以溫腎健脾針法治療至肥胖癥狀及BMI指標明顯改善；采用前述方法檢測療效前30名每2周收集的血清與大便樣本，獲得溫針法對腸道菌群及其脂代謝的動態(tài)調(diào)控模式。本項目可望揭示脾腎

10、兩虛型肥胖與腸道菌群之能量與脂代謝異常亢進的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)溫腎健脾針法的全新治療機理，拓展中醫(yī)藥肥胖治療理論，并為多學科攻克肥胖作出奠基性貢獻。,25,學習交流PPT,研究意義,腸道菌群與機體能量及脂質(zhì)代謝關(guān)系密切，肥胖患者腸道含有促進能量收獲與脂肪貯存的核心菌群。但不同證型肥胖患者是否有特定的核心菌群？脾腎兩虛型肥胖相關(guān)核心菌群有何特征？針刺減肥作用機理之中，是否包括并如何調(diào)整腸道菌群？本課題擬完成這些十分重要的探索性研究。具體研究意義有三： （1）揭示脾腎兩虛型肥胖證能量及脂代謝核心菌群，開啟針刺減肥研究新領(lǐng)域； （2）建立溫腎健脾針法經(jīng)由調(diào)整腸道脂代謝相關(guān)的核心菌群而減肥的新學說； （3）

11、構(gòu)建針藥減肥與腸道菌群研究新平臺，促進肥胖機理研究與藥物研發(fā)。,26,學習交流PPT,研究目標,揭示脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進能量收獲與脂代謝的腸道核心菌群，闡明溫腎健脾針法通過調(diào)整脂代謝菌群而治療肥胖的新機制，建立證候與腸道菌群研究平臺。,27,學習交流PPT,2.1 研究內(nèi)容,基于上述目標，本項目擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50名，以及療效評分前30名患者治療中采集樣本，完成下述研究： 2.2.1篩查促進脂肪代謝的腸道核心菌群。篩查對脂肪代謝起促進、抑制或雙向作用的代表性菌屬，然后采用自動菌種鑒定儀進一步鑒定到種。這三方面代表性細菌，組成與脂代謝直接相關(guān)的腸道核心菌群。

12、2.2.2分析膽汁酸譜、短鏈脂肪酸譜等大便脂代謝相關(guān)分子種類與含量。 2.2.3 檢測單位大便卡路里殘存率、膳食纖維含量。 2.2.4測試肥胖相關(guān)激素(leptin,insulin, Cholecystokinin)與FIAF酶含量。 2.2.5體外試驗該核心菌群的能量收獲效率。 2.2.6整合研究，揭示患者能量與脂代謝核心菌群特征，以及針刺減肥新機理。,28,學習交流PPT,2.3 擬解決的關(guān)鍵問題,宿主的生存環(huán)境、生活方式、遺傳背景、生理病理狀態(tài)、免疫功能、疾病史與用藥史等多種因素，都可影響特定個體的腸道菌群。如何排除眾多干擾因素，獲得脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進能量收獲與脂肪代謝的腸道核

13、心菌群，是本項目擬解決的關(guān)鍵問題。本項目擬采取下述四種方法，針對性地排除干擾因素，解決此關(guān)鍵問題 （1）嚴格病例納入。采用中西醫(yī)肥胖診斷權(quán)威標準，病證結(jié)合納入病例。 （2）巧妙設(shè)計對照。 （3）強化檢測指標的互補性、相互驗證性。 （4）設(shè)計體外驗證實驗。,29,學習交流PPT,圖2. 實驗技術(shù)路線流程簡圖,30,學習交流PPT,3.2 研究方法和技術(shù)要點簡述,3.2.1 典型脾腎兩虛型肥胖證患者的納入、治療與療效判斷標準 為保障試驗結(jié)果具有統(tǒng)計意義，同時考慮不超過20%的退出率，確定樣本量為50例。由經(jīng)過培訓的中醫(yī)與西醫(yī)診斷學專家，納入符合脾腎兩虛型肥胖證患者，以及年齡、性別、生活狀況等相匹配

14、的健康對照。,31,學習交流PPT,3.2.1.2治療方法,脾腎兩虛型肥胖針灸治療上，以溫腎健脾為主。故多選用脾經(jīng)、腎經(jīng)、任脈和背部膀胱經(jīng)的腧穴。因為臨床顯著的個體差異，本項目僅在此提出治則，具體的治療方案隨臨臨床癥狀體征而靈活應(yīng)用（胡玲香等，2007）。但一般遵循如下基本原則： 腧穴選擇：主穴之體穴主要取天樞、神闕、中極、關(guān)元、足三里、太溪、豐隆、三陰交、脾俞、腎俞等，均取雙側(cè)；耳穴：內(nèi)分泌、大腸、三焦、腦點等。脾腎兩虛型配穴常取脾俞、腎俞、太白，等。 針法選擇：選用溫針或溫補法為主。 操作方法：在本校附屬醫(yī)院針灸科診斷室以常規(guī)方法，完成操作。隔日針灸1次，10次為一療程，20天后觀察療效。

15、休息3日，繼續(xù)第2療程治療。針刺治療時間選擇在飯后1小時后進行。,32,學習交流PPT,3.2.2 實驗方法簡介,3.2.2.1 核心菌群的篩查 采用選擇性培養(yǎng)基，從待測大便樣品中篩選出與脂代謝密切相關(guān)的菌屬。擬采用下述培養(yǎng)基（丁維俊等,2007）：雙歧桿菌屬：BS培養(yǎng)基(但用申請者改進的以新鮮番茄汁代替多種維生素)。乳桿菌屬：LBS培養(yǎng)基;按標準配方自制。類桿菌屬：KV培養(yǎng)基;將購自上海生物制品所的厭氧菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基(NO：98404)滅菌后冷卻至55，加入兔血(5)、卡那霉素(100g/m1)、硫酸鏈霉素(5g/m1)及Vk1(0.1)，傾注平皿。柔嫩梭菌屬：MRS培養(yǎng)基; M. Smith

16、ii菌:MBC培養(yǎng)基（補充3g/L formate,3g/L acetate, 0.006% Na2S)；B.thetaiotaomicron菌：Shaedler培養(yǎng)基；均按Martin等（2007）介紹的腸道菌選擇培養(yǎng)基配方自制。實驗時，用無菌稱量紙取糞便0.1g放入0.9ml稀釋液，使之稀釋10倍。然后用一系列無菌稀釋管作對數(shù)稀釋至10-8。依據(jù)申請者前期研究經(jīng)驗及相關(guān)文獻報道，選擇不同培養(yǎng)基的接種稀釋度。用微量移液器取20l滴于培養(yǎng)基表面。每個稀釋度滴三滴，同一培養(yǎng)皿上滴種三個稀釋度。然后迅速置于DY-II型厭氧培養(yǎng)箱中，37培養(yǎng)48h。計數(shù)培養(yǎng)皿表面的菌落形成單位數(shù)量，乘以稀釋倍數(shù)，即

17、得到每克糞便標本的菌落形成單位數(shù)（CFU）。采用PEMS 3.0統(tǒng)計軟件包，用t檢驗分析不同組別的統(tǒng)計學差異顯著性。,33,學習交流PPT,3.2.2.2 UPLCMS法分析大便膽汁酸及其代謝中產(chǎn)物譜,擬使用由四川大學華西醫(yī)學研究中心開放實驗室提供的Waters公司ACQUITY UPLC檢測系統(tǒng)，參照Martin等(2007)建立的方法，完成大便檢測。標準品由Sigma公司購買。質(zhì)譜檢測在Waters公司產(chǎn)品TOF LCT-Premier (Waters MS Technologies, Manchester, UK)完成。其操作過程如下。取低溫保存的大便浸出液，用1:1甲基氰:水混合液調(diào)整

18、濃度至1mg/ml，上ACQUITY BEH C18 1.7m柱，以500 ul/min流速洗脫12min，洗脫液組成由甲基氰：水40:60比例逐漸調(diào)整為60:40(pH4.0)。將分批收集的洗脫樣品上Q-TOF質(zhì)譜分析系統(tǒng)，以亮氨酸腦啡肽為參照，采用W-optic通路、毛細管電壓2.6 kV、錐體電壓50 V、噴霧氣流600ul/h等條件，完成檢測。每個樣品重復掃描10次，得其平均值。,34,學習交流PPT,3.2.2.8核心菌群能量收獲與脂代謝效率的體外試驗,采用Kihara等(2002)建立的微量培養(yǎng)法，檢測待測樣本對大豆寡聚糖(soybean oligosacchride),乳果糖(l

19、actulose),棉子糖(raffinose), 蔗果三糖(kestose)等四種代表性膳食纖維成分的分解與利用效率。其基本操作程序如下。將上述四種膳食纖維分別加到牛心腦浸出液（BHI）培養(yǎng)基中（終濃度為20g/L），按0.5ml/孔接種于24孔培養(yǎng)板。將待測大便樣本作10-2,10-3,10-4,10-5稀釋，然后接種于培養(yǎng)板(每個濃度梯度設(shè)置3個重復樣)。放入細菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h后，應(yīng)用前述“酶-重量法” 測定培養(yǎng)液中膳食纖維殘留量、GCFID 法分析新合成短鏈脂肪酸（SCFA）種類與數(shù)量（樣本中原先含有的SCFA，但經(jīng)102至105倍稀釋后，可忽略不計），從而確認腸道菌群樣本的能量收獲與脂代謝功能。,35,學習交流PPT