3.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法.ppt

1、實(shí)驗(yàn)三、微生物數(shù)量的測定,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?掌握使用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物顯微鏡直接計(jì)數(shù)的方法 了解微生物數(shù)量測量的幾種方法、原理及其應(yīng)用,二、實(shí)驗(yàn)原理,常用的微生物細(xì)胞數(shù)目的檢測法 血球計(jì)數(shù)板法 平板菌落計(jì)數(shù)法 干重法 比濁法等,干重法 將一定量的菌液中的菌體通過離心或過濾分離出來，然后烘干至恒重(干燥溫度可采用105、100或80)、稱重。一般干重為濕重的10%20%。 注：該法適合菌濃度較高的樣品。,比濁法,在一定范圍內(nèi)，菌懸液中的細(xì)胞濃度與混濁度成正比，即與吸光值成正比，菌數(shù)越多，吸光值越大。因此，借助于分光光度計(jì)，在一定波長下測定菌懸液的光密度，就可反應(yīng)出菌液的濃度。該法適合測定大量的細(xì)

2、胞。,顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)數(shù)是常用的一種微生物計(jì)數(shù)法 優(yōu)點(diǎn)：直觀、快速 缺點(diǎn)：誤差較大，不適合細(xì)菌計(jì)數(shù)（太小） 其原理與計(jì)數(shù)板的構(gòu)造有關(guān) 每塊計(jì)數(shù)板上有兩個(gè)計(jì)數(shù)室 （正方形），蓋上蓋玻片后容積是一定的（0.1mm3），深為0.1mm，邊長為1mm，其上面有精確的刻度。,其刻度一般有兩種規(guī)格,16個(gè)中方格，每個(gè)中方格分25個(gè)小格 1625,25個(gè)中方格，每個(gè)中方格分16個(gè)小格 2516,計(jì)數(shù)室,我們采用的是2516的，計(jì)數(shù)時(shí)查5個(gè)中方格的總菌數(shù)。如圖： 計(jì)算：1個(gè)計(jì)數(shù)室的總菌數(shù)=A/525B 1g（ml）樣品中的總菌數(shù)=A/525101000B =50,000AB個(gè),5個(gè)

3、方格的總菌數(shù),稀釋倍數(shù),三 實(shí)驗(yàn)器材,1.菌種 酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌懸液(已稀釋100倍) 2.器具 顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、吸管、蓋玻片。,四 實(shí)驗(yàn)方法,1.檢查計(jì)數(shù)板 檢查計(jì)數(shù)板是否有破損。 2.鏡檢計(jì)數(shù)室 在加樣前，先對計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。,3加樣品 將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用細(xì)口滴管將稀釋的釀酒酵母菌液由蓋玻片邊緣點(diǎn)一小滴（不宜過多），讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自行進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產(chǎn)生。,4.顯微鏡計(jì)數(shù) 靜置幾分鐘，將計(jì)數(shù)板放在顯微鏡下，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室，再換成高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù) 5.清洗血球計(jì)數(shù)板 計(jì)數(shù)完畢，將計(jì)數(shù)板在水龍頭下沖洗干凈后自行晾干，鏡檢觀察每小格內(nèi)無殘留物為止。,注意事項(xiàng) 1、加樣時(shí)先搖勻菌液，計(jì)數(shù)室中不可有氣泡產(chǎn)生； 2、菌液濃度以每小格有5-10個(gè)菌體為宜。 3、計(jì)數(shù)時(shí)，格線上的菌體只數(shù)上方和右邊線上的； 4、如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，作為兩個(gè)菌體計(jì)算； 5、清洗計(jì)數(shù)板時(shí)切勿用手或硬物刷洗。在水龍頭上用水柱清洗，直到洗凈為止。 6、一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均值來計(jì)算。,特別注意,血