實(shí)驗(yàn)四 滅活疫苗的制備及其應(yīng)用

1、1,如何有效預(yù)防疾病的發(fā)生？,疫苗,2,什么是疫苗？,疫苗是將病原微生物（如細(xì)菌、立克次氏體、病毒等）及其代謝產(chǎn)物，經(jīng)過人工減毒、滅活或利用轉(zhuǎn)基因等方法制成的用于預(yù)防傳染病的自動(dòng)免疫制劑。 疫苗保留了病原菌刺激動(dòng)物體免疫系統(tǒng)的特性。當(dāng)動(dòng)物體接觸到這種不具傷害力的病原菌后，免疫系統(tǒng)便會(huì)產(chǎn)生一定的保護(hù)物質(zhì)，如免疫激素、活性生理物質(zhì)、特殊抗體等；當(dāng)動(dòng)物再次接觸到這種病原菌時(shí)，動(dòng)物體的免疫系統(tǒng)便會(huì)依循其原有的記憶，制造更多的保護(hù)物質(zhì)來阻止病原菌的傷害。,3,疫苗的種類有哪些？,一、人工主動(dòng)免疫 1. 滅活疫苗 病原細(xì)菌、病毒、立克次體等，經(jīng)人工培養(yǎng)，再用物理或化學(xué)方法將其殺滅制成疫苗疫苗。此種疫苗失去

2、繁殖能力，但保留免疫原性。 2.減毒活疫苗 用人工定向變異方法或從自然界篩選出毒力減弱或基本無毒的活微生物制成減毒活疫苗。接種后在體內(nèi)有生長繁殖能力，可激發(fā)機(jī)體對(duì)病原的持久免疫力。 3.類毒素 細(xì)胞外毒素經(jīng)甲醛處理后失去毒性，仍保留免疫原性，為類毒素。,4,5,二、人工被動(dòng)免疫 1.抗毒素 2.人免疫球蛋白制劑 3.細(xì)胞因子制劑 4.單克隆抗體制劑,人工主動(dòng)免疫和人工被動(dòng)免疫均能使機(jī)體增加抗病能力，但后者的持續(xù)時(shí)間短，主要用治療和緊急預(yù)防。,6,三、新型疫苗 1.亞單位疫苗 通過蛋白質(zhì)水解方法，提取細(xì)菌、病毒的特殊蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，篩選出的具有免疫活性的片段制成的疫苗，稱為亞單位疫苗。 2.結(jié)合疫苗

3、 指采用化學(xué)方法將多糖共價(jià)結(jié)合在蛋白載體上所制備成的多糖-蛋白結(jié)合疫苗，用于提高細(xì)菌疫苗多糖抗原的免疫原性，如b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗。 3.合成肽疫苗 合成肽疫苗是一種僅含免疫決定簇組分的小肽, 即用人工方法按天然蛋白質(zhì)的氨基酸順序合成保護(hù)性短肽, 與載體連接后加佐劑所制成的疫苗,是最為理想的安全新型疫苗。 4.基因工程疫苗 使用DNA重組生物技術(shù)，把天然的或人工合成的遺傳物質(zhì)定向插入細(xì)菌、酵母菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，使之充分表達(dá)，經(jīng)純化后而制得的疫苗。,7,8,疫苗有哪些接種方式？,注射、口服、浸泡、噴霧,草魚注射疫苗現(xiàn)場,1,2,3,10,實(shí)驗(yàn)四 滅活疫苗的制備及其應(yīng)用,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1了解

4、疫苗的種類和免疫途徑； 2掌握組織漿疫苗的制備方法。,11,二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,1魚病檢測（為后續(xù)實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備） 2組織漿疫苗的制備 3滅活疫苗的安全性評(píng)價(jià)（了解）,12,三、主要儀器及試材,解剖用具，包括解剖盤、解剖刀、解剖針、大小手術(shù)剪、大小鑷子，培養(yǎng)皿，載玻片，蓋玻片、紗布等。 離心機(jī)、注射器等。 實(shí)驗(yàn)魚。,13,四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟,（一）組織漿疫苗的制備 1活苗的制備：取有典型癥狀的魚，先用酒精或碘制劑消毒魚體表，解剖后取肝、脾、腎組織，并稱重。然后讓在研缽中磨成糊狀，加入5倍生理鹽水，用雙層紗布過濾，去除沉淀，即成原毒組織漿（活苗）。 2滅活：取上述活苗，于60-65水浴鍋中孵育2h。 3防

5、腐保存：對(duì)已滅活的疫苗加入福爾馬林，使成1%的濃度，4保存。,14,四、實(shí)驗(yàn)方法與步驟,（二）安全性實(shí)驗(yàn) 1滅活效果的評(píng)價(jià) （1）細(xì)菌性滅活疫苗：涂布于瓊脂平板上，放入28溫箱24 h，生長緩慢的細(xì)菌培養(yǎng)48h。 （2）病毒性滅活疫苗：接種至合適細(xì)胞系，觀察細(xì)胞病變。 2魚體安全性實(shí)驗(yàn) 取滅活的疫苗，加入同體積的生理鹽水，注射10cm規(guī)格的鯽30尾，每尾0.2ml，正常飼養(yǎng)，5d內(nèi)無死亡，可用于后續(xù)的免疫保護(hù)評(píng)價(jià)。,15,五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng),操作用的全部工具消毒后方可使用。 制備組織漿疫苗，與所取病魚材料直接有關(guān)，因此必須選擇典型的傳染性病魚。,16,六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告,1某養(yǎng)殖場在疾病高發(fā)期緊急啟用滅活疫苗的免疫程序，結(jié)果導(dǎo)致大量免疫個(gè)體的死亡，假如你是漁病學(xué)專家，請分析其中的原因（50分）。 2假如你是魚類免疫學(xué)家，能否設(shè)計(jì)合適的魚類疫苗免疫途徑，提高現(xiàn)有的免疫效率？簡要闡述其依據(jù)