《活性測定》PPT課件.ppt

1、實驗八,血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性測定 改良賴氏法,【實驗?zāi)康摹?掌握改良賴氏法測定ALT的原理、注意事項和臨床意義，熟悉標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。,【實驗原理】,1、催化反應(yīng) ALT催化谷氨酸與丙酮酸間的氨基移換反應(yīng)：,2、顯色反應(yīng),草黃色,棕紅色,注意：-酮戊二酸也與2，4-二硝基苯肼反應(yīng)產(chǎn)生苯腙，但兩種苯腙的吸收光譜曲線有差別，在500520nm差異最大，以等摩爾濃度計算，丙酮酸苯腙的呈色強(qiáng)度約為-酮戊二酸苯腙的3倍。據(jù)此特點，可計算出丙酮酸的生成量。,【操作步驟】,（一）樣品準(zhǔn)備： 樣品為空腹血清、血漿（肝素抗凝，0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液；EDTA抗凝，1.8mgEDTA可抗凝

2、1.0ml血液）。樣品應(yīng)在低溫條件下運(yùn)輸保存，樣品中ALT在28可穩(wěn)定7天。,（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：,混勻，置37恒溫20分鐘,混勻后，室溫10分鐘， 505nm波長，以蒸餾水校正零點， 讀取各管的吸光度值，制作工作曲線。,（三）血清酶活性測定 取2支試管，按下表操作,混勻，置37恒溫30分鐘,混勻，置37恒溫20分鐘,混勻后，室溫10分鐘，505nm波長，以蒸餾水調(diào)零點， 讀取測定管的吸光度值。,【實驗結(jié)果】,（一）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖 以A為縱坐標(biāo)，以相當(dāng)于酶活力（KarU）為橫坐標(biāo)，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的數(shù)值在坐標(biāo)紙上制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 先描散點圖，然后用光滑的細(xì)線連接各點。,（二）待測血清結(jié)果讀取 1

3、、求AU值：AU=AU-AB 2、結(jié)果讀?。?在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找到相應(yīng)的點，讀取橫坐標(biāo)的數(shù)值，即為待測血清ALT酶活性。,（三）卡門氏單位（KarU）定義：KarU單位為分光光度單位，lml血清在25、反應(yīng)液總體積3ml、波長340 nm、光徑1.0cm時，每分鐘吸光度下降0.001A為1個單位。,【參考值】,025 KarU或040UL（37）,【注意事項】 1酶活力大于150KarU或406UL(37)，應(yīng)將樣品用蒸餾水 適當(dāng)稀釋后測定，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。 2反應(yīng)溫度和時間必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行控制。 3如遇黃疸、溶血或乳糜標(biāo)本時應(yīng)作樣品空白。 4試劑變混濁或空白吸光度值超出0.2200.290范圍應(yīng)棄去。 5試劑在28密閉避光貯存可穩(wěn)定12個月。 6. 加入2，4 二硝基苯肼溶液的作用： 終止酶促反應(yīng)。 顯色反應(yīng)。,【臨床意義】,1ALT活性在下列疾病可見增高： （1）肝膽疾病：傳染性肝炎、肝癌、肝硬變活動期、中毒性肝炎、脂肪肝、膽管炎和膽囊炎等。 （2）心血管疾病：心肌梗塞、心肌炎、心力衰竭時的肝臟淤血、腦出血等。 （3）骨骼疾病、多發(fā)性肌炎、肌營養(yǎng)不良等。 2一些藥物和毒物可引起ALT活性升高：如氯丙嗪、異菸肼、奎寧、水揚(yáng)酸制劑及酒精、鉛、汞、四氯化碳或