ABO、Rh(D)血型鑒定.ppt

1、ABO血型、Rh（D）抗原鑒定,遵醫(yī)附院輸血科 陳月寬8608288,ABO血型正、反定型 目的：用于ABO血型鑒定，確保鑒定結(jié)果正確 適用范圍：受血者、獻血者ABO血型鑒定 使用器材和材料：離心機、標(biāo)準(zhǔn)血清、標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞、吸管、玻片等,方法：正定型和反定型 原理：正定型是檢測紅細(xì)胞表面的抗原，用標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B分型血清測定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原或（和）B抗原；反定型是檢測血清（漿）中的抗體，用標(biāo)準(zhǔn)A型細(xì)胞和B型細(xì)胞測定血清中有無相應(yīng)的抗A和（或）抗B抗體。,Rh(D)血型定型 目的：鑒定紅細(xì)胞表面是否含有D抗原。 適用范圍：受血者、獻血者Rh(D)血型鑒定 使用器材和

2、材料：Rh抗(-D)標(biāo)準(zhǔn)血清、吸管、玻片等,方法：玻片法 原理：根據(jù)抗D抗體與對應(yīng)紅細(xì)胞抗原的凝集反應(yīng)，區(qū)分Rh(D)陽性和Rh(D)陰性。,ABO正定型及Rh（D）定型操作程序（玻片法） 取玻片1張，用紅筆將其劃分為左、中、右三段，首先左端加入A型（抗-B）血清1滴，中端加入B型（抗-A)血清1滴，右端加入抗（-D）血清1滴，然后在左、中、右三段同時加入受檢者35%紅細(xì)胞懸液1滴，并分別混勻，放置一段時間后觀察結(jié)果。注:紅細(xì)胞懸液的制備:,A型標(biāo)準(zhǔn)血清（抗-B）,B型標(biāo)準(zhǔn)血清 （抗-A）,左、中端紅細(xì)胞凝集說明此紅細(xì)胞上含有A、B兩種抗原，此血型為AB型 抗（-D）血清與紅細(xì)胞發(fā)生凝集，Rh

3、（D）陽性，反之陰性。,抗（-D）標(biāo)準(zhǔn)血清,受檢者35%紅細(xì)胞懸液,左端,中端,右端,抗(-A)、抗(-B)、抗(-D)標(biāo)準(zhǔn)血清與紅細(xì)胞懸液分別混勻放置一段時間后，標(biāo)準(zhǔn)血清與紅細(xì)胞表面是否含有相應(yīng)的抗原而產(chǎn)生不同的凝集現(xiàn)象，將ABO血型分為四種（即A、B、O、AB型），Rh(D)血型分為陽性、陰性二種。,血型凝集示意圖,抗-B,抗-A,抗（-D）,血型：AB型 Rh(D)：陽性,抗-B,抗-A,抗（-D）,血型：B型 Rh(D)：陰性,抗-B,抗-B,抗-A,抗-A,抗（-D）,抗（-D）,血型：A型 Rh(D)：陽性,血型：O型 Rh(D)：陽性,反定法（試管法） 取小試管2支，分別標(biāo)明A、

4、B，并同時加入受檢者血清各2滴，在A管加入3%5%A型紅細(xì)胞懸液1滴；B管加入3%5%B紅細(xì)胞懸液1滴，混勻，1000r/min離心1min或3000r/min，離心15秒，取出觀察凝集情況。,Ac,Bc,首先在A、B管中加入受檢者血清各2滴,加入Ac1滴,加入Bc1滴,混勻后離心觀察結(jié)果,離心機,反定型 （試管法）,Ac,Bc,無凝集,凝集,血型：A型,ABO正反定型結(jié)果判斷,交叉配血試驗,鹽水配血法 目的：檢測獻血者與受血者之間血液是否相配，確保輸血安全。 適用范圍：適用于血清完全抗體（IgM)的檢測。 使用儀器和材料：離心機、試管、試管架、生理鹽水、顯微鏡等。,原理：在電解質(zhì)（生理鹽水）

5、溶液中，帶正電荷的Na能降低紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減少了紅細(xì)胞的排斥力而發(fā)生抗原抗體結(jié)合使紅細(xì)胞凝集，從而發(fā)現(xiàn)配血不合。,聚凝胺配血法 目的：與鹽水法相同 適用范圍：適用于血清中不完全抗體(IgG)的檢測 儀器與材料：離心機、試管、試管架、聚凝胺試劑、吸管等。,原理：聚凝胺是一種高價陽離子聚合物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，能中和紅細(xì)胞表面帶有的負(fù)電荷，降低紅細(xì)胞Zeta電位，并縮短紅細(xì)胞之間的距離，使紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性凝集，這種凝集是可逆的。最后加入懸浮液，它具有中和凝聚胺陽離子的作用，使正常的紅細(xì)胞非特異性凝集散開，試驗結(jié)果陰性；如果紅細(xì)胞被相應(yīng)的抗體致敏，則會被凝聚胺凝結(jié)，凝集不會散開，試驗結(jié)

6、果為陽性。,鹽水法操作程序： 1、取小試管2支，標(biāo)明主、次側(cè)。主側(cè)：受血者血清2滴加供血者35%生理鹽水紅細(xì)胞懸液1滴；次側(cè)：供血者血清2滴加受血者35%生理鹽水紅細(xì)胞懸液1滴。 2、混勻，以1000r/min，離心1min，取出，先目測上層液體是否溶血，再輕輕搖動試管，檢查紅細(xì)胞是否凝集。 3、結(jié)果判斷：主、次兩側(cè)無凝集、無溶血，表示配血相合，可以輸血；主、次側(cè)有一側(cè)凝集或溶血，表示配血不相合，不能輸血。,缺點： 1、只能檢測出完全抗體（抗-A、抗-B）引起的血型不合，對免疫性抗體引起的血型不合不能檢出，有輸血史或不明輸血史及妊娠史不能用該法。 2、本實驗中的生理鹽水對血清（漿）中的抗體有稀

7、釋作用，易導(dǎo)致配血結(jié)果假陰性。 3、易受冷凝集素的干擾。,聚凝胺配血法 1、在鹽水配血法操作完后，主、次側(cè)加入低離子強度溶液（LISS）0.6ml，混勻，置室溫1min。 2、主、次兩側(cè)加聚凝胺2d，混勻，置室溫15s，3400r/min，離心10s，棄上清液后留0.1ml液體,輕搖試管,目測紅細(xì)胞是否凝集，如不凝集必須重做。如果凝集，再加重懸液2滴，輕搖試管，仔細(xì)觀察有無凝集，如有懷疑應(yīng)在顯微鏡下觀察結(jié)果。 結(jié)果判斷：與鹽水法相同。,注意事項： 1、用EDTA抗凝血漿代替血清配血，但不能用肝素抗凝血配血，因為肝素對聚凝胺有中和作用。 2、病人使用肝素后要加雙倍量聚凝胺。 3、聚凝胺試劑使用前

8、應(yīng)恢復(fù)至室溫。 4、和試劑比例要恰當(dāng)，增加血清（漿）和紅細(xì)胞量時，LISS及聚凝胺、重懸液的量也要增加，否則，靈敏度會降低48倍。,5、病人使用止血敏藥物后干擾聚凝胺配血，該干擾是不能排出的。克服辦法：不用酚磺乙胺后，重抽血液再配。 6、血清蛋白、高球蛋白血癥可降低聚凝胺的靈敏度引起凝集不穩(wěn)定。 7、聚凝胺配血最適溫度22,溫度降低靈敏度下降。,鹽水配血法：,主側(cè),次側(cè),主側(cè)加患者血清2滴、次側(cè)加供血者血清2滴,主側(cè),次側(cè),主側(cè)加供者紅細(xì)胞1滴、次側(cè)加患者紅細(xì)胞1滴，再各加生理鹽水1滴。,混勻離心后觀察結(jié)果,主側(cè),次側(cè),溶血,無凝集,患者血清,供者血清,患者紅細(xì)胞,供者紅細(xì)胞,配血不合,凝集,聚凝胺配血法操作示意圖:,主側(cè),次側(cè),主側(cè)加患者血清2滴、次側(cè)加供血者血清2滴,主側(cè),次側(cè),主側(cè)加供者紅細(xì)胞1滴、次側(cè)加受血者紅細(xì)胞1滴