吉林大學(xué)《有機化學(xué)實驗》氨基酸紙層析、糖旋光度的測定

1、氨基酸的紙層析糖旋光度的測定,1.學(xué)習紙層析分離技術(shù)。 2.學(xué)習旋光度測定技術(shù)。,實驗?zāi)康模?一、氨基酸的紙色譜,紙色譜：（紙上層析）屬于分配色譜的一種。主要用于多功能團或高極性化合物如糖、氨基酸等的分析分離。,濾紙為載體，固定相為濾紙上的水分，流動相（展開劑）為用水飽和過的有機溶劑。 操作技術(shù)：上行法、下行法、環(huán)行法,紙色譜、薄層色譜的一般操作步驟,將一個1.5cm 長、1cm 寬的濾紙，剪成扇子狀，并卷起來,濾紙芯兒的制作,在濾紙中央，用鉛筆畫一個半徑0.5cm的圓圈（直徑一角硬幣大?。?。 在圓圈中心扎一個孔，插入準備好的濾紙芯兒。 插入時，濾紙芯的扇花部分插進濾紙孔一小部分，以蓋到培養(yǎng)皿

2、上方時不碰到液體為準。,2.點樣,毛細管點樣：毛細管與板（紙）垂直， 點樣位置、點樣距離：不被展開劑浸泡、以顯色后點之間易分開為準。 點樣量、樣品濃度：輕輕點一次即可。 本次實驗：點三個樣品兩個標準樣品，一個混合樣品,3.展開,將薄層板斜放入層析缸中（或?qū)V紙掛在層析缸中），層析缸中流動相（展開劑）的量以不浸泡樣點為宜。有些層析缸如下圖，易進行先飽和后展開操作，提高重現(xiàn)性和避免邊緣現(xiàn)象。,邊緣現(xiàn)象：兩邊高,本次紙色譜實驗展開步驟： 1.在培養(yǎng)皿中加入適量展開劑 2.把點好樣的濾紙放到培養(yǎng)皿上，注意濾紙芯兒不能碰展開劑。蓋上培養(yǎng)皿飽和510分鐘。 3.把濾紙芯兒壓下去，使濾紙芯兒的另一端稍微扇開

3、，并接觸展開劑，開始展開。 4.當流動相（展開劑）的前沿到達濾紙邊1cm左右時，停止展開，立即取出濾紙，用鉛筆畫出展開劑前沿線。 5.去溶劑：烘干,展開劑前沿線,飽和,展開,畫出展開劑前沿,4.顯色,可見光下觀察 紫外燈下觀察 顯色劑顯色： 通用：10% 硫酸乙醇溶液；碘蒸氣； 大部分有機樣品：磷鉬酸/乙醇溶液 專用： 碘化鉍鉀 生物堿； 三氯化鐵 黃酮； 茚三酮 氨基酸 顯色操作：將茚三酮噴至濾紙潤濕，不易流淌,5.計算比移值,Rf 值的意義： 定性分析的指標 評價展開劑選擇是否合適、評價分離效果 薄層層析：Rf 0.300.80， Rf 0.05 紙 層 析：Rf 0.050.85， Rf

4、 0.05,2、影響旋光度的因素 測定波長、濃度、測定管長度、溶劑、溫度,比旋光度,：旋光管長度，dm,1）按通電源，預(yù)熱約5min 2）零點誤差校正 選定并清洗測定管：用水洗（留意密封墊和玻璃透光片，不要寧得太緊，否則讀數(shù)不準） 裝入水：排氣泡，旋上螺蓋（不易過緊） 放入樣品管槽：玻璃泡部位在上部 調(diào)零點視野確定零點誤差：數(shù)值與誤差方向 檢查旋光儀零位是否準確，即在旋光儀未放試管或放進充滿蒸餾水的試管時，觀察零度時視場亮度是否一致。如不一致，說明有零位誤差，應(yīng)在測量讀數(shù)中減去或加上該偏差值。,4、旋光儀的使用和旋光度的測定方法,測定旋光讀數(shù)：轉(zhuǎn)動度盤、檢偏鏡、在視場中覓得亮度一致且暗的位置，再從度盤上讀數(shù)。讀數(shù)是正（順時針方向旋轉(zhuǎn)）的為右旋物質(zhì)，讀數(shù)是負（逆時針方向旋轉(zhuǎn)）的為左旋物質(zhì)。,讀數(shù)方法： 主尺分180格，每格1；游標尺分10格，每大格0.1 ，每小格0.05 。 1.先看游標尺0刻度線指向主尺的哪兩個數(shù)之間：圖中9和10 之間 則旋光度為9.x 2.看游標尺刻度線與主尺刻度線重合的位置：圖中游標尺的3 則代表0.30 因此該物質(zhì)旋光度為 右旋9.30 ,（3）已知濃度的葡萄糖的測定： 試樣管潤洗、裝入10%葡萄糖溶液（0.1g/ml)，調(diào)零點視場并讀數(shù)。 （4）未知濃度的葡萄糖的測定： 取出樣品管，加入不知濃