制作石蠟切片的常見問題及處理

1、制作石蠟切片的常見問題及處理石蠟切片是組織學(xué)和病理學(xué)的主要實(shí)驗(yàn)方法,也是臨床中觀察病理變化的重要手段,為教學(xué)、科研和臨床診斷做出了卓越貢獻(xiàn)。實(shí)踐發(fā)現(xiàn),切片制作過程中常常由于多方面的原因遇到困難,甚至導(dǎo)致制片失敗。本文將對制作石蠟切片過程中的常見問題和處理方法作重點(diǎn)介紹。1切片不成帶1常見原因:切片刀不夠鋒利。切片刀與蠟塊的角度不當(dāng)。蠟塊四周留蠟邊太少。石蠟硬度過大,黏度不夠。解決方法:重新磨刀。調(diào)整切片刀的角度?？芍匦掳窕?qū)⑾瀴K四周熔化,再放入包埋框中補(bǔ)蠟,修理蠟塊時(shí)組織塊周圍保留的石蠟以2mm左右為宜。蠟塊過硬可適當(dāng)加些蜂蠟,或更換熔點(diǎn)較低的石蠟重新包埋。將蠟塊放入冰箱內(nèi)延長冰凍時(shí)間,然后

2、迅速切片。2切片彎曲常見原因:組織成分及形狀不規(guī)則。蠟塊上下或左右兩邊不平行。蠟塊與切片刀刀口不平行。切片刀各處的鋒利程度不一致。解決方法:修整組織塊時(shí),注意修切整齊,切成方形或矩形,盡量不要切成三角形2。將蠟塊四邊反復(fù)修平對稱。調(diào)節(jié)蠟塊夾持器,使其與切片刀平行。移動切片刀,更換刀口位置。使用負(fù)離子發(fā)生器直吹切片處可防切片卷曲3。3切片上出現(xiàn)裂紋常見原因:切片刀上有小缺口,或刀口不平整。刀口上粘附有細(xì)微纖維(如毛發(fā)、紙或布絲等物。組織過硬變脆(如凝血塊、膠凍樣物質(zhì)、囊腺瘤、甲狀腺、腺瘤等4。組織中可能含有較硬之物質(zhì),如固定液之結(jié)晶石灰質(zhì)。裱片的水溫太高。包埋時(shí)石蠟凍結(jié)太慢。解決方法:切片刀某處

3、有缺口,可調(diào)換刀口部位或重新磨刀。刀口上缺口過多且不平整,可先將刀鋒垂直在磨刀石上輕輕磨數(shù)次,然后按常規(guī)磨刀。擦凈刀口。適當(dāng)減少脫水、透明、浸蠟時(shí)間。組織中硬性物質(zhì)太多,則不宜用。裱片的水溫以45左右為宜。包埋時(shí)待蠟塊周圍凝結(jié)一層,即放入冷水中。4切片厚薄不均常見原因:脫水、透明、浸蠟過度、時(shí)間過長、溫度過高4。蠟塊太大,過硬,轉(zhuǎn)動時(shí)刀刃受震動。切片微動部分失靈,齒輪跳格。解決方法:調(diào)整脫水、透明、浸蠟時(shí)間和溫度。如蠟塊過大,以后取材時(shí)注意取材的大小。蠟塊組織過硬,可返回水中浸泡,再重新脫水和包埋。修理切片機(jī)失靈的部分,調(diào)整螺旋,加機(jī)油潤滑零件,必要時(shí)需請專業(yè)技術(shù)人員調(diào)整切片機(jī)。5切片皺褶常見

4、原因:石蠟太軟或室溫過高。切片刀上粘有殘余的石蠟,刀口不干凈。組織浸蠟時(shí)間不夠,或脫水、透明不夠。切片刀不鋒利。裱片的水溫過高或過低。解決方法:可將蠟塊放入冰箱中冰凍后切片,并在切片時(shí)一邊切片一邊用冰塊冰凍或換蠟。如室溫過高,可開空調(diào)降低室溫。切片刀不干凈,可用棉花沾少許二甲苯將刀口拭干凈。重復(fù)浸蠟過程或延長脫水、透明時(shí)間。將切片刀磨銳利再行切片。裱片的水溫以45為宜。組織蠟帶先放入35%的漂片酒精中,再撈出放入溫水中可預(yù)防皺褶6。6切片粘刀常見原因:切片時(shí)有靜電作用,產(chǎn)生靜電吸引,在冬季或氣候干燥時(shí)常出現(xiàn)這種情況。解決方法:可用加濕器,以增加空氣中的水分,而減少靜電作用。把衛(wèi)生紙用涼水浸濕后

5、圍在切片機(jī)操作臺,可以在切片機(jī)臺周圍形成靜電屏蔽7。把展片時(shí)所用毛筆在濕紙上進(jìn)行蠟屑清理。7切片脫落常見原因:取材太厚或組織含血成分多、脂肪多8。組織固定不佳,脫水、透明不徹底,致使石蠟無法浸入組織內(nèi)。組織脫水透明過度,浸蠟時(shí)間過長或溫度過高,引起組織收縮硬脆。載玻片清洗得不潔凈。用急水沖洗或震蕩過于劇烈。染液或試劑的酸堿度不適宜或停留時(shí)間較久9?？酒瑫r(shí)間過短、溫度過低或時(shí)間長、溫度過高10。石蠟、二甲苯使用時(shí)間過久11。解決方法:取材不能太厚,載玻片下2/3處用右手的大魚際肌均勻涂擦蛋白甘油,厚薄適中。按組織大小厚薄選擇固定、脫水、透明時(shí)間?；蛘咴诓挥绊懺\斷的原則下將組織重新脫水,透明浸蠟,

6、包埋蠟熔度要比浸蠟熔點(diǎn)高35。先用溫水潤澤,再用冰硬化,然后再切片。徹底清潔載玻片,使之成中性。切片不能直接放于水流下沖洗或者改為浸泡12。同時(shí)經(jīng)過煮沸,再次凈化和蒸餾處理后的水可增加了蠟片與載玻片之間的吸引力,冷開水作為漂片用水既方便又經(jīng)濟(jì)應(yīng)首選13。染液或試劑的酸堿度適宜、停留時(shí)間合理。一般在60,2小時(shí)為宜。二次浸蠟、更換二甲苯。8切片灰染常見原因:固定液濃度太低14或者組織固定不及時(shí)、不徹底15。取材太厚。水洗不夠。脫蠟不充分16。解決方法:固定及時(shí)徹底。脫盡原染色,復(fù)染時(shí)延長蘇木精的染色時(shí)間來補(bǔ)救。取材不宜太厚。水洗充分。脫蠟徹底。石蠟切片是組織學(xué)和病理學(xué)的主要實(shí)驗(yàn)方法,也是臨床中觀

7、察病理變化的重要手段,為教學(xué)、科研和臨床診斷做出了卓越貢獻(xiàn)。實(shí)踐發(fā)現(xiàn),切片制作過程中常常由于多方面的原因遇到困難,甚至導(dǎo)致制片失敗。本文將對制作石蠟切片過程中的常見問題和處理方法作重點(diǎn)介紹。1切片不成帶1常見原因:切片刀不夠鋒利。切片刀與蠟塊的角度不當(dāng)。蠟塊四周留蠟邊太少。石蠟硬度過大,黏度不夠。解決方法:重新磨刀。調(diào)整切片刀的角度?？芍匦掳窕?qū)⑾瀴K四周熔化,再放入包埋框中補(bǔ)蠟,修理蠟塊時(shí)組織塊周圍保留的石蠟以2mm左右為宜。蠟塊過硬可適當(dāng)加些蜂蠟,或更換熔點(diǎn)較低的石蠟重新包埋。將蠟塊放入冰箱內(nèi)延長冰凍時(shí)間,然后迅速切片。2切片彎曲常見原因:組織成分及形狀不規(guī)則。蠟塊9染色淺、深、不均、色素

8、沉著常見原因:固定液久存或者脫蠟不干凈。蘇木精過染或伊紅過染。切片不均勻。封固時(shí)二甲苯已揮發(fā)完畢3。福爾馬林色素17。解決方法:在備用的甲醛中放入適量大理石或白色粉筆作為中和劑,或經(jīng)常更換脫蠟劑18。蘇木精過染使組織呈深紫色,可延長分化和返藍(lán)時(shí)間;伊紅過染可通過水洗減輕伊紅顏色19。切片均勻。封固前當(dāng)二甲苯揮發(fā)后應(yīng)重新放入到二甲苯中透明。在脫蠟水洗后可用10%飽和苦味酸無水乙醇溶液處理30min20。10切片褪色21-22常見原因:染色前脫蠟不徹底。染色過程中脫水不干凈。蘇木精染液PH值過小,或者伊紅染液加促染劑冰醋酸過多。載玻片和蓋玻片不呈中性。在潮濕多雨時(shí)封閉切片,導(dǎo)致濕氣進(jìn)入。二甲苯被氧化,生成苯甲酸和鄰苯二甲酸而成酸性,可使堿性燃料褪色。切片在陽光下爆曬。解決方法:染色前徹底脫蠟。染色過程中脫水時(shí)間要充足。徹底清洗載玻片和蓋玻片,使之呈中性。最好在干燥季節(jié)制作切片。切片復(fù)染。封固劑和切片避免陽光直射,以免氧化變酸。避光保存。11切片封固不良23-24常見原因:封固時(shí)二甲苯已揮發(fā)完畢。封固劑過稀或太稠。切片厚薄不勻。切片未展開。封固方法不當(dāng)。組織脫水不徹底。解決方法:封固前當(dāng)二甲苯揮發(fā)后應(yīng)重新放入到二甲苯中透明。封固劑濃度要適當(dāng)。切片完全展開,無皺褶、無氣泡。封固時(shí)先將蓋玻片一側(cè)放置于滴有樹膠的組織切片上,然后緩慢放下將空氣完全排除避免產(chǎn)生氣泡。徹