DB37T 3990-2020 食品中四氯蟲酰胺殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法

1、ICS67.050X 04DB37山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB37/T 39902020食品中四氯蟲酰胺殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法Determination of tetrachlorantraniliprole residue in foodsLiquid chromatography - tandem mass spectrometry2020 - 06 - 08發(fā)布2020 - 07 - 08實施山東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB37/T 39902020前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由青島海關(guān)提出、歸口并組織實施。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：青島海關(guān)技術(shù)中心、黃島海關(guān)。本標(biāo)準(zhǔn)

2、主要起草人：崔淑華、郭慶龍、張謙、王宇、劉宏玉、劉成帥、崔偉佳、逄昔莎、裴萍。10食品中四氯蟲酰胺殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中四氯蟲酰胺殘留量的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于大米、玉米、甘藍(lán)、番茄、蘋果、干辣椒、豬肉、雞肝、牛奶、雞蛋中溴氰蟲酰胺殘留量的測定，其它食品可參照執(zhí)行。2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB 2763食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3

3、 原理試樣經(jīng)乙腈提取，分散固相萃取凈化（油脂含量高的樣品須先用乙腈飽和正己烷去脂和冷凍去脂）后，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。4 試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。4.1 試劑4.1.1 乙腈（CH3CN，75-05-8）：色譜純。4.1.2 甲醇（CH3OH，67-56-1）：色譜純。4.1.3 正己烷（C6H14，110-54-3）：色譜純。4.1.4 乙酸銨（C2H7NO2，631-61-8）：色譜純。4.1.5 氯化鈉（NaCl，7647-14-5）：用前在450 灼燒4 h，冷卻后密封備用。4.1.6 無水硫酸鎂（MgSO4，

4、7487-88-9）：用前在650 灼燒4 h，貯藏干燥器中，冷卻后備用。4.2 溶液配制4.2.1 乙腈飽和正己烷溶液：取適量乙腈加入正己烷中，劇烈振搖，靜置至出現(xiàn)明顯分層，棄去乙腈層備用。4.2.2 乙酸銨溶液（5 mmol/L）：稱取0.385 g乙酸銨用水溶解并定容至1 L。4.3 標(biāo)準(zhǔn)品四氯蟲酰胺（Tetrachlorantraniliprole，C17H10BrCl4N5O2，CAS號：1101384-14-6），純度95.5 %。4.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制4.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液準(zhǔn)確稱取適量的標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.1 mg），用乙腈溶解，配制成濃度為1 000 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，該儲

5、備溶液-18 保存，保存期為一年。4.4.2 標(biāo)準(zhǔn)中間溶液準(zhǔn)確吸取適量標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，用甲醇配制成濃度為10 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，該溶液4 保存，保存期為一個月。4.4.3 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液根據(jù)需要準(zhǔn)確吸取適量標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，用樣品空白基質(zhì)溶液配制成0.000 5、0.001、0.002、0.005、0.01、0.02 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。該溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。4.5 材料4.5.1 N-丙基乙二胺（Primary secondary amine，PSA）：粒度4060 m。4.5.2 十八烷基硅烷鍵合相（C18）：粒度4060 m。4.5.3 有機(jī)濾膜：0.22 m。5 儀器和設(shè)備5.1

6、 液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源（ESI）。5.2 高速組織搗碎機(jī)。5.3 高速粉碎機(jī)。5.4 勻漿機(jī)。5.5 天平：感量0.01 mg和0.01 g。5.6 振蕩器。5.7 超聲波儀。5.8 離心機(jī)，轉(zhuǎn)速不低于8 000 r/min。5.9 渦旋混合器。5.10 具塞離心管：50 mL，10 mL。6 試樣制備與保存6.1 大米、玉米、干辣椒取500 g代表性樣品，用高速粉碎機(jī)處理至粉狀，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識。于-18 以下保存。6.2 甘藍(lán)、番茄、蘋果取500 g代表性樣品，用勻漿機(jī)制成勻漿，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識

7、。于-18 以下保存。6.3 豬肉、雞肝取500 g代表性樣品，用高速組織搗碎機(jī)制成糊狀，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識。于-18 以下保存。6.4 牛奶、雞蛋取500 g代表性樣品，充分混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識。于-18 以下保存。7 分析步驟7.1 提取7.1.1 大米、玉米稱取4 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加5 mL水混勻，放置30 min。準(zhǔn)確加入20.0 mL乙腈振蕩提取30 min，超聲提取5 min后加入3 g無水硫酸鎂和2 g氯化鈉，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min后，待

8、凈化。7.1.2 甘藍(lán)、番茄、蘋果稱取10 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中。準(zhǔn)確加入20 mL乙腈振蕩提取30 min，超聲提取5 min后加入3 g無水硫酸鎂和2 g氯化鈉，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min后，待凈化。7.1.3 干辣椒稱取4 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加15 mL水混勻，放置30 min。準(zhǔn)確加入20.0 mL乙腈振蕩提取30 min，超聲提取5 min后加入3 g無水硫酸鎂和2 g氯化鈉，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min后，待凈化。7.1.4 豬肉、雞肝、牛奶、雞蛋稱取4 g

9、試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加5 mL水混勻（檢測牛奶時，不需加水），放置30 min。準(zhǔn)確加入20.0 mL乙腈振蕩提取30 min，超聲提取5 min后加入3 g無水硫酸鎂和2 g氯化鈉，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min后，待凈化。將10 mL上清液轉(zhuǎn)移至50 mL具塞離心管中，加入10 mL乙腈飽和正己烷，渦旋振蕩2 min，靜置分層，棄去正己烷層，再加入10 mL乙腈飽和正己烷重復(fù)操作一次，然后將離心管置于-18 冷凍30 min后，迅速取出2 mL提取液，待凈化。7.2 凈化稱取0.15 g無水硫酸鎂，0.10 g PSA和0.10 g

10、 C18置于10 mL離心管，吸取2 mL上述提取液至此離心管中，渦旋1 min，8 000 r/min離心5 min。取上清液過0.22 m有機(jī)微孔濾膜后，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定。7.3 測定7.3.1 液相色譜參考條件條件如下：a) 色譜柱：C18柱，柱長150 mm，內(nèi)徑2.1 mm，粒徑3 m，或等效柱；b) 流速：0.25 mL/min；c) 進(jìn)樣量：5 L；d) 柱溫：30 ；e) 流動相及梯度洗脫條件見表1。表1 流動相及梯度洗脫條件時間min甲醇%乙酸銨溶液%025750.525752.590106.090106.125751025757.3.2 質(zhì)譜參考條件條件如下：a)

11、 電離方式：電噴霧電離（ESI）；b) 毛細(xì)管電壓：3.5 kV；c) 干燥氣溫度：350 ；d) 輔助氣（鞘氣）溫度：350 ；e) 霧化氣、干燥氣、輔助氣（鞘氣）均為高純氮氣，使用前應(yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求；f) 掃描方式：負(fù)離子掃描；g) 檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測，參數(shù)見表2；h) 多反應(yīng)監(jiān)測條件。表2 多反應(yīng)監(jiān)測條件中文名稱英文名稱母離子m/z子離子m/z駐留時間/s裂解電壓/V碰撞能量/eV四氯蟲酰胺tetrachlorantraniliprole535.8499.70.21203201.9a0.21204a 為定量子離子7.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作按濃度由小到大的順序，

12、依次分析基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到相應(yīng)的峰面積。以基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.3.4 試樣溶液的測定將試樣溶液注入液相色譜-質(zhì)譜儀中，得到相應(yīng)的峰面積，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中四氯蟲酰胺的濃度。如果試樣溶液濃度超過標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，須用乙腈稀釋試樣溶液至線性范圍后再進(jìn)行測定。在上述儀器條件下，四氯蟲酰胺的參考保留時間為5.0 min。標(biāo)準(zhǔn)品的MRM總離子流圖和選擇離子流圖參見附錄A中圖A.1、圖A.2。7.3.5 定性如果樣品的質(zhì)量色譜峰保留時間與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液一致，定性離子對的相對豐度與濃度相當(dāng)?shù)幕|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表3的規(guī)定，則可判斷

13、樣品中存在相應(yīng)的被測物。表3 定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度50 %20 %50 %10 %20 %10 %允許的相對偏差20 %25 %30 %50 %7.4 空白試驗除不稱取試樣外，均按上述步驟進(jìn)行。8 分析結(jié)果的表述試樣中四氯蟲酰胺的含量按式（1）計算：(1)式中：X 試樣中四氯蟲酰胺的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；從基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣測定液中四氯蟲酰胺的濃度，單位為微克每毫升（g/mL）；V 試樣測定液的最終定容體積，單位為毫升（mL）；m 最終樣液所代表的試樣質(zhì)量，單位為克（g）。注： 計算結(jié)果應(yīng)扣除空白值，保留兩位有效數(shù)字。9 精密度9.1 在重復(fù)性條

14、件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值與其算術(shù)平均值的比值（百分率），應(yīng)符合附錄C的要求。9.2 在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值與其算術(shù)平均值的比值（百分率），應(yīng)符合附錄D的要求。10 定量限和回收率10.1 定量限大米、玉米、干辣椒、豬肉、雞肝、牛奶、雞蛋中四氯蟲酰胺定量限為0.005 mg/kg，甘藍(lán)、番茄、蘋果中四氯蟲酰胺定量限為0.002 mg/kg。10.2 回收率不同樣品中四氯蟲酰胺添加水平及回收率參見附錄B。AA附錄A （資料性附錄）四氯蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品譜圖四氯蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品MRM總離子流圖見圖A.1，選擇離子流圖見圖A.2。圖A.1 四氯蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品MRM總離子流圖圖A

15、.2 四氯蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品MRM選擇離子流圖BB附錄B （資料性附錄）樣品的添加濃度及回收率的實驗數(shù)據(jù)樣品的添加濃度及回收率的實驗數(shù)據(jù)見表B.1。表B.1 樣品的添加濃度及回收率的實驗數(shù)據(jù)樣品名稱添加濃度/（mg/kg）回收率范圍/%大米0.00583.4103.10.0487.6106.40.278.991.3玉米0.00584.7101.40.0181.297.90.0286.8108.5甘藍(lán)0.00290.7113.90.288.2104.3295.5112.8番茄0.00288.5107.30.282.497.6279.990.4蘋果0.00292.1113.20.889.4108.2293.6106.9干辣椒0.00587.3112.8579.6103.5781.798.9豬肉0.00585.9116.40.283.296.0280.3104.1雞肝0.00585.6116.80.0181.4100.50.1578.396.2牛奶0.00584.0111.10.0592.5106.30.680.9107.0雞