血管緊張素轉(zhuǎn)化酶.ppt

1、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的測(cè)定及其臨床意義 檢驗(yàn)科,概述,血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）又稱激肽酶或肽基-羧基肽酶，系統(tǒng)命名為肽基-二肽水解酶。屬血管內(nèi)皮細(xì)胞膜結(jié)合酶，由肽的C端將氨基酸切為兩段變換而來(lái)，可使肽鏈C端二肽殘基水解。ACE可催化血管緊張素（十肽）水解成八肽的血管緊張素，使血管進(jìn)一步收縮，血壓升高。也可作用于腎上腺皮質(zhì)，促進(jìn)醛固酮的分泌。因此，ACE是腎素-血管緊張素-醛固酮的重要成分。,概述,ACE還催化具有降壓作用的緩激肽水解而失去活性。ACE廣泛分布于人體各組織，以附睪、睪丸及肺的含量較豐富，其中肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞ACE活性最高。腎、腦垂體等組織酶活性較低。ACE測(cè)定方法主要有比色法、酶

2、偶聯(lián)法等。 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的別名：血管緊張素轉(zhuǎn)化酶,轉(zhuǎn)換酶的測(cè)定原理血管緊張素,. （1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法：底物馬尿酰-甘氨酰-甘氨酸（Hip-Gly-Gly）在ACE作用下，釋放出甘氨酰-甘氨酸（Gly-Gly），后者與三硝基苯磺酸（TNBS）作用，生成黃色的三硝基苯-甘氨酰-甘氨酸（TNP-Gly-Gly），其含量與ACE活性呈正相關(guān)。,（2）酶偶聯(lián)法：ACE使底物馬尿酸雙甘肽 （Hip-Gly-Gly）水解成馬尿酸（Hip）和雙 甘肽（Gly-Gly），后者與L-谷氨酰-3-羧 基-4-硝基苯胺（GGCN）和-谷氨?；D(zhuǎn)移 酶（GGT）偶聯(lián)，形成3-羧基-4-硝基苯胺，

3、 在340nm處測(cè)其吸光度，以反映ACE活性。,試劑,（1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法： 底物液：用5mmol/L的Tris溶液配制30mmol/L HGG溶液，此液中含 0.4mol/LNa2SO4、0.3mol/L NaCl，調(diào)pH7.3。 0.1mol/L硼酸鹽緩沖液（pH9.0）。 100g/L鎢酸鈉（含2個(gè)水）溶液。 0.33mol/L NaSO4。 60mmol/L TNBS溶液,（2）酶偶聯(lián)法： 50mmol/L HEPES緩沖液：稱羥、乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）1.191g，加雙蒸餾水100ml溶解，用于配制GGT、CGCN和基質(zhì)緩沖液。 20kU/L GGT貯存液：取

4、HEPES緩沖液5ml，加入GGT 100U，混勻后分裝小瓶，20。保存。 6.7kU/L GGT應(yīng)用液：將上述貯存液用二倍量的HEPES稀釋配制。 0.1mmol/L GGCN溶液：稱GGCN 20mg，加入50mmol/L HEPES 60ml，溶解后4保存。,基質(zhì)緩沖液：稱HEPES 1.191g，NaCl 1.755g，Na2SO45.68g，用雙蒸餾水溶解后，用NaOH調(diào)pH至8.0，再補(bǔ)充雙蒸餾水至100ml，4保存。 基質(zhì)液：由Hip-Gly-Gly 89.5mg加基質(zhì)緩沖液10ml溶解混合而成。此液各試劑終濃度為：HEPES 50mmol/L，NaCl 30mmol/L，Na2

5、SO4400mmol/L，Hip-Gly-Gly 30mmol/L。 10mmol/L雙甘肽標(biāo)準(zhǔn)液：稱Gly-Gly 52.9mg加雙蒸餾水溶解，并稀釋至100ml，此為貯存液（40mmol/L）。1份貯存液和3份雙蒸餾水混合即為應(yīng)用液。,正常值,（1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法：26.156.7kU/L。 （2）酶偶聯(lián)法：12-68U/L。,化驗(yàn)結(jié)果臨床意義,血清ACE測(cè)定主要同于肺部疾病的診斷，對(duì)其他系統(tǒng)疾病的診療也有一定價(jià)值。 (1)肺部疾?。航^大多數(shù)結(jié)節(jié)病患者血清ACE活力升高，其陽(yáng)性率及幅度與病 活動(dòng)與否和病變累及的范圍有關(guān)。肺結(jié)核也可升高，而哮喘發(fā)作、急性心 原性肺水腫、慢性

6、阻塞性肺疾患、自發(fā)性氣胸、肺纖維化、成人呼吸窘迫綜 合征等血清ACE均有不同程度下降。 （2）肝臟疾?。憾鄶?shù)肝臟病患者ACE活性升高，升高幅度依次為肝硬化、急 性肝炎、慢性肝炎。脂肪肝則正常。,（3）甲狀腺疾病：甲亢患者ACE活性明顯高于其他甲狀腺疾病，且酶活力高 低與T3、T4含量呈正相關(guān)。 （4）其他：糖尿病、虹膜炎、免疫母細(xì)胞肉瘤等，血清ACE升高；高血壓、 結(jié)腸炎等則降低。,附注,（1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法： 標(biāo)本在室溫或冰箱存放1周，酶活力無(wú)明顯變化，15保存3周酶活性穩(wěn)定。 膽紅素對(duì)ACE有明顯抑制作用，故重度黃疸可使測(cè)定結(jié)果偏低。EDTA是ACE的強(qiáng)抑制劑，NaCl和

7、Na2SO4對(duì)ACE有明顯的活化作用，溶血、脂血對(duì)結(jié)果無(wú)影響。 本法與紫外分光光度法酶活力單位一致，但其測(cè)得值為紫外法的9倍。,（2）酶偶聯(lián)法： 當(dāng)?shù)孜飌H 8.0，GGCN 1.0mmol/L，GGT6.7ku/L時(shí)，ACE活性與吸光度值有良好線性。線性范圍大，即使ACE在1500U/L，不用稀釋也可獲得理想結(jié)果。 GGCN濃度選擇：本反應(yīng)體系中GGCN既是測(cè)定酶ACE的受體，又是指示酶GGT的供體。以1.0mmol/L的GGCN最理想，在此濃度下GGCN與吸光度保持良好的線性。 GGT對(duì)測(cè)定的影響：本反應(yīng)利用GGT將雙甘肽與GGCN偶聯(lián)，生成黃色的3-羧基-4-硝基苯胺，其加入量可直接影響測(cè)定結(jié)果。GGT高濃度可使底物過(guò)度消耗，使吸光度偏離曲線；低濃度GGT又使吸光