天然藥物化學(xué)顯色反應(yīng)

1、 許叢宇 2008/12/30生物堿 (1)Vitali反應(yīng) 紫色(2)DDL反應(yīng) 黃色（3）沉淀反應(yīng) 書本P155糖Molish 反應(yīng)（試劑：濃硫酸，-萘酚。常用色譜顯色劑：鄰苯二甲酸和苯胺）糠醛衍生物和許多芳胺、酚類及具有活性次甲基的基團(tuán)化合物縮合成有色的化合物香豆素：（1）異羥肟酸鐵反應(yīng)-內(nèi)酯的顯色反應(yīng)堿性條件下，香豆素內(nèi)酯開環(huán)，并與鹽酸羥胺縮合成異羥肟酸，再在酸性條件下與三價(jià)鐵離子絡(luò)合成鹽而顯紅色。（2）與酚類試劑的反應(yīng)具有酚羥基，可與FeCl3試劑產(chǎn)生顏色反應(yīng)；若酚羥基的對(duì)位未被取代，或6-位上沒有取代，其內(nèi)酯環(huán)堿化開環(huán)后，可與Gibbs試劑、Emerson試劑反應(yīng)。機(jī)制如下：Gib

2、bs反應(yīng)：符合以上條件的香豆素乙醇溶液在弱堿條件下，2,6-二氯(溴）醌氯亞胺試劑與酚羥基對(duì)位活潑氫縮合成藍(lán)色化合物。Emerson反應(yīng)：符合以上條件的香豆素的堿性溶液中，加入2%的4-氨替比林和8%的鐵氰化鉀試劑與酚羥基對(duì)位活潑氫縮合成紅色化合物。醌類顏色反應(yīng): 取決于其氧化還原性質(zhì)以及分子中的酚羥基的性質(zhì)。（1）Feigl反應(yīng)-醌的通性，所有具醌核的化合物均可反應(yīng)。（方法、機(jī)理：見書 312頁(yè)）醌類化合物在堿性條件下，經(jīng)加熱能迅速與醛類及鄰二硝基苯反應(yīng)，生成紫色化合物（2）無色亞甲藍(lán)顯色試驗(yàn)-可區(qū)別蒽醌與苯醌萘醌 苯醌和萘醌因醌核上有活潑質(zhì)子，可反應(yīng)，而蒽醌無。無色亞甲基藍(lán)溶液，樣品在白色

3、背景上作為藍(lán)色斑點(diǎn)出現(xiàn)。（3）與堿的反應(yīng)(Borntrger反應(yīng)-可區(qū)別含羥基的蒽醌與蒽酚衍生物反應(yīng)、機(jī)理、應(yīng)用：見書 313 頁(yè)。羥基醌類在堿性溶液中發(fā)生顏色變化，會(huì)使顏色加深。多呈橙、紅、紫紅色及藍(lán)色。例如羥基蒽醌類遇堿顯紅紫紅色的反應(yīng)稱Borntrger反應(yīng)（4）與活性次甲基試劑的反應(yīng)-可區(qū)別蒽醌與苯醌萘醌（Kesting-Craven法） 反應(yīng)、機(jī)理、應(yīng)用：見書 313 頁(yè)。苯醌及萘醌類化合物當(dāng)其醌環(huán)上有未被取代的位置時(shí)，可在氨堿性條件下與一些含有活性次甲基試劑（乙酰醋酸酯、丙二酸酯、丙二腈等）的醇溶液反應(yīng)，生成藍(lán)綠色或藍(lán)紫色（5）與金屬離子的反應(yīng)-可初步鑒定蒽醌的取代情況 機(jī)理：見書

4、 314 頁(yè) 常用0.5醋酸鎂的乙醇溶液，可根據(jù)結(jié)果初步判斷取代情況：A母核中只有一個(gè)-或-酚羥基，或有兩個(gè)-酚羥基但不在同一環(huán)上，呈黃橙色至橙色。B鄰位酚羥基的蒽醌，呈紫色藍(lán)紫色。C. 對(duì)位二酚羥基蒽醌，呈紫紅色紫色。D. 每個(gè)苯環(huán)上各有一個(gè)-酚羥基，或含有間位二羥基者，呈紅色至紅色。黃酮1）鹽酸-鎂粉（或鋅粉）反應(yīng)：多數(shù)黃酮、黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物顯橙紅紫紅色，少數(shù)顯紫藍(lán)色。查耳酮、橙酮、兒茶素類不顯色。異黃酮類一般不顯色。2） 四氫硼鈉（鉀）反應(yīng)：NaBH4是對(duì)二氫黃酮類化合物專屬性較高的一種還原劑。與二氫黃酮類化合物產(chǎn)生紅紫色。其它黃酮類化合物均不顯色。二氫黃酮與磷鉬酸試

5、劑顯棕褐色。3）鋁鹽：生成的絡(luò)合物多為黃色（lmax=415nm），并有熒光，可用于定性及定量分析。常用試劑為1%三氯化鋁或硝酸鋁溶液。4） 鉛鹽：常用1%醋酸鉛及堿式醋酸鉛水溶液，堿式醋酸鉛反應(yīng)能力更強(qiáng)，可生成黃紅色沉淀。5） 鋯鹽：多用2%二氯氧化鋯（ZrOCl2）甲醇溶液。黃酮類化合物分子中有游離的3-或5-OH存在時(shí)，均可反應(yīng)生成黃色的鋯絡(luò)合物。3-OH，4-酮基絡(luò)合物的穩(wěn)定性5-OH，4-酮基絡(luò)合物（僅二氫黃酮醇除外）。當(dāng)反應(yīng)液中接著加入枸櫞酸后，5-羥基黃酮的黃色溶液顯著褪色，而3-羥基黃酮溶液仍呈鮮黃色（鋯枸櫞酸反應(yīng)）。6）鎂鹽：二氫黃酮、二氫黃酮醇類與醋酸鎂的甲醇溶液，加熱可顯

6、天藍(lán)色熒光，若具有C5-OH，色澤更為明顯。而黃酮、黃酮醇及異黃酮類等則顯黃橙黃褐色。7）氯化鍶（SrCl2）：在氨性甲醇溶液中，可與分子中具有鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)的黃酮類化合物生成綠色棕色乃至黑色沉淀。8）三氯化鐵反應(yīng)：多數(shù)黃酮類化合物因分子中含有游離酚羥基，與三氯化鐵水溶液或醇溶液可產(chǎn)生正反應(yīng)，呈現(xiàn)顏色；當(dāng)含有氫鍵締合的酚羥基時(shí)，顏色更明顯。9）堿性試劑顯色：二氫黃酮類在堿液中開環(huán)，轉(zhuǎn)變成查爾酮類化合物，顯橙黃至黃色。黃酮醇類在堿液中先呈黃色，通入空氣后變?yōu)樽厣?，與其他黃酮類區(qū)別。黃酮類分子中有鄰二酚羥基取代或3，4-二羥基取代時(shí)，在堿液中不穩(wěn)定，易被氧化，產(chǎn)生黃色深紅色綠棕色沉淀卓酚酮能與多種

7、金屬離子形成絡(luò)合物結(jié)晶體，并顯示不同的顏色，可用于不同的顏色，可用于鑒別。如銅絡(luò)合物為綠色結(jié)晶，鐵絡(luò)合物為赤紅色結(jié)晶。環(huán)烯醚萜游離苷元遇酸、堿、羰基化合物和氨基酸等都能變色。如遇到氨基酸類加熱，即顯深紅色至深藍(lán)色，最后變成藍(lán)色沉淀。還有冰醋酸-銅離子反應(yīng)，shear試劑（1體積濃鹽酸與1.5體積苯胺混合）反應(yīng)(車前草苷：黃棕深綠)藇類揮發(fā)油分餾時(shí)，高沸點(diǎn)餾分如見美麗的藍(lán)色、紫色或綠色，表明可能有藇類三萜類三萜化合物（苷元和苷）在無水條件下，與強(qiáng)酸、三氯乙酸或Lewis酸（氯化鋅、三氯化鋁、三氯化銻）作用，會(huì)產(chǎn)生顏色變化或熒光。但全飽和、且3位又無羥基或羰基的化合物呈陰性反應(yīng)：*（1）醋酐-濃硫

8、酸反應(yīng)（Liebermann-Burchard反應(yīng)）將樣品溶于冰醋酸中，加硫酸-醋酐（1：20），可產(chǎn)生黃紅紫藍(lán)等顏色變化，最后褪色。（甾體皂苷也有此反應(yīng)，但顏色變化快，在顏色變化的最后出現(xiàn)污綠色；而三萜皂苷顏色變化稍慢，且不出現(xiàn)污綠色。）*（2）五氯化銻反應(yīng)（Kahlenberg反應(yīng)）將樣品氯仿或醇溶液點(diǎn)于濾紙上，噴以20%五氯化銻的氯仿溶液，干燥后6070加熱，顯藍(lán)色、灰藍(lán)色，灰紫色等多種顏色斑點(diǎn)。紫外燈下顯藍(lán)色熒光（甾體皂苷則顯黃色熒光）另：三氯化銻（Carr-Price反應(yīng)）薄層色譜顯色用。其余一樣。（3）三氯醋酸反應(yīng)（Rosen-Heimer反應(yīng)） 將樣品溶液滴在濾紙上，噴25%三氯

9、醋酸乙醇溶液，加熱至100，生成紅色漸變?yōu)樽仙?。（加熱?00度，甾體是60度。）（4）氯仿-濃硫酸反應(yīng)（Salkowski反應(yīng)） 樣品溶于氯仿，加入濃硫酸后，在氯仿層呈現(xiàn)紅色或藍(lán)色，氯仿層有綠色熒光出現(xiàn)。（甾體也有，一樣）（5）冰醋酸-乙酰氯反應(yīng)（Tschugaeff反應(yīng)） 樣品溶于冰醋酸中，加乙酰氯數(shù)滴及氯化鋅結(jié)晶數(shù)粒，稍加熱，則呈現(xiàn)淡紅色或紫紅色。（甾體也有，一樣）三萜化合物的沉淀反應(yīng)皂苷的水溶液可以和一些金屬鹽類如鉛鹽、鋇鹽、銅鹽等產(chǎn)生沉淀。三萜皂苷多含羧基，可用酸性醋酸鉛沉淀，而甾體皂苷則為中性皂苷，須用堿性醋酸鉛或者氧化鋇沉淀。揮發(fā)油官能團(tuán)鑒定：酚類：將少許溶于乙醇中，加三氯化鐵的

10、乙醇溶液，如產(chǎn)生藍(lán)色，藍(lán)紫或綠色反應(yīng)，表示揮發(fā)油中有酚類物質(zhì)存在。羰基化合物：銀鏡反應(yīng)（硝酸銀的氨溶液）醛類物質(zhì)。揮發(fā)油的乙醇液中加2，4-二硝基苯肼，氨基脲，羥胺等試劑，若產(chǎn)生晶形衍生物沉淀表明有醛或酮類化合物存在。不飽和化合物和藇類衍生物揮發(fā)油的三氯甲烷加溴的三氯甲烷液紅色褪去有不飽和化合物，繼續(xù)加溴的三氯甲烷，若產(chǎn)生藍(lán)色紫色或綠色，表明油中有藇類。此外在揮發(fā)油的無水乙醇液中加濃硫酸時(shí)，如有藇類衍生物應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)色或紫色反應(yīng)。內(nèi)酯類：揮發(fā)油吡啶溶液中加亞硝酰氰化鈉試劑及氫氧化鈉液，若出現(xiàn)紅色并逐漸消失，則表明有甾體1. Salkowski反應(yīng) 樣品溶于氯仿，沿試管壁滴加濃硫酸，氯仿層顯血紅色或

11、青色，硫酸層顯綠色熒光。2. 三氯乙酸-氯胺T反應(yīng) 25%三氯乙酸乙醇液和3%氯胺T水液4：1混合，噴在濾紙上與強(qiáng)心苷反應(yīng)，干后加90度加熱數(shù)分鐘紫外燈下觀察，顯黃綠色、藍(lán)色、灰藍(lán)色熒光，反應(yīng)較穩(wěn)定，用于毛地黃強(qiáng)心苷類的區(qū)別。3. ，不飽和內(nèi)酯環(huán)反應(yīng)（區(qū)別甲乙型強(qiáng)心苷）甲型強(qiáng)心苷：C17側(cè)鏈上有不飽和內(nèi)酯環(huán)，堿液中，雙鍵移位形成活性次甲基，與某些試劑反應(yīng)顯色。乙型無。Legal反應(yīng) 亞硝酰鐵氰化鈉 深紅或藍(lán) 【NaFe（NO）(CN)52H2O】Kedde反應(yīng) 3，5-二硝基苯甲酸乙醇液 紫紅或紅Raymond反應(yīng) 1%間-二硝基苯乙醇液 紫紅或藍(lán)Baljet反應(yīng) 苦味酸（2，4，6-三硝基甲

12、苯） 橙或橙紅4.去氧糖的反應(yīng)（1）占噸氫醇反應(yīng) 分子中有2-去氧糖能顯色（2）對(duì)二甲氨基苯甲醛反應(yīng) 灰紅色（3）KellerKiliani反應(yīng)（游離的2-去氧糖或者該條件下能水解得到2-去氧糖的強(qiáng)心苷） 強(qiáng)心苷溶于含少量Fe3+的冰醋酸中，沿管壁滴加濃硫酸，觀察界面和醋酸層的顏色變化，若有2-去氧糖，醋酸層漸呈藍(lán)色或藍(lán)綠色，但是對(duì)此反應(yīng)不顯色的，并非結(jié)構(gòu)中無2-去氧糖。（4）過碘酸對(duì)硝基苯胺反應(yīng) 黃色與強(qiáng)心苷有關(guān)的一些鑒別方法:1、甲型強(qiáng)心苷的不飽和五元內(nèi)酯環(huán)，在堿性溶液中，雙鍵轉(zhuǎn)位可產(chǎn)生活性次甲基，可與Legalsh試劑、Kedde試劑等發(fā)生顯色反應(yīng)；2、基于2去氧糖的顯色反應(yīng)：可用Keller-Kiliani試劑鑒別，顯藍(lán)綠色。3、UV法：不飽和五元內(nèi)酯環(huán)在220nm處不飽和六元內(nèi)酯環(huán)在300nm處有最大吸收；4、IR法：在17001800cm-1都有兩個(gè)強(qiáng)吸收峰，但不飽和六元內(nèi)酯環(huán)的，向低移40cm 1。鞣質(zhì)（還原性）極易被氧化，為強(qiáng)還原劑。與高價(jià)金屬離子和鹽，如Fe3+、Vd6+、Ce4+、重鉻酸鉀、高錳酸鉀、鎢酸鈉等發(fā)生氧化還原反應(yīng)，大部分產(chǎn)