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文檔簡介
1、用反相高效液相色譜法分離芳烴與氣相色譜法的比較:流動(dòng)相:由氣相液相氣相色譜只適合分析較易揮發(fā)、且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的有機(jī)化合物,而HPLC則適合于分析那些用氣相色譜難以分析的物質(zhì),如揮發(fā)性差、極性強(qiáng)、具有生物活性、熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)。與經(jīng)典的液相色譜法的比較:在經(jīng)典的液相色譜法的基礎(chǔ)上,引入了氣相色譜法的理論,采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測器,實(shí)現(xiàn)了分析速度快,分離效率高和操作自動(dòng)化,這種色譜技術(shù)稱作高效液相色譜法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 學(xué)習(xí)高效液相色譜儀的操作2. 了解反相液相色譜法分離非極性化合物的基本原理3. 掌握用反相液相色譜法分離芳香烴類化合物方法原理選用顆粒很細(xì)的高效固定相,采用高壓泵輸送
2、流動(dòng)相, 分離、定性及定量全部分析過程都通過儀器來完成。除了 有快速、高效的特點(diǎn)外,它能分離沸點(diǎn)高、分子量大、熱 穩(wěn)定性差的試樣。根據(jù)使用的固定相及分離原理不同,一般將高效液相色譜法分為分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜和空間排斥色譜等。在分配色譜中,組分在色譜柱上的保留程度取決于它們?cè)诠潭ㄏ嗪土鲃?dòng)相之間的分配系數(shù)K:K = 組分在固定相中物質(zhì)的濃度= Cs組分在流動(dòng)相中物質(zhì)的濃度Cm流動(dòng)相為非極性而固定相為極性物質(zhì)的色譜稱正相液相色譜法,以流動(dòng)相為極性而固定相為非極性的色譜稱反相液相色譜法。將固定液鍵合到硅膠表面上,即所謂的鍵合固定相。若將正構(gòu)烷烴等非極性物質(zhì)(如n-C18烷)鍵合到硅膠基質(zhì)上
3、,以極性溶劑(如甲醇和水)為流動(dòng)相,則可分離非極性或弱極性的化合物。據(jù)此,采用反相液相色譜法可分離烷基苯類化合物。本實(shí)驗(yàn):固定相:ODS-C18流動(dòng)相:甲醇水(v/v:90%/10%)混合溶液分離組分:甲苯,聯(lián)苯,萘,菲(250g/ml)PUMPDetectorWor CollectionData station (Recorder)液相色譜流程圖儲(chǔ)液瓶高壓泵 (核心) 過濾器壓力脈動(dòng)阻力器高壓輸液系統(tǒng)恒壓泵:輸出壓力恒定,但流速隨系統(tǒng)阻力變化恒流泵:流速恒定,壓力隨阻力變化要求:流量穩(wěn)定精度在12%之間壓力平穩(wěn)無脈動(dòng)往復(fù)泵壓力有波動(dòng),所以柱前設(shè)緩沖裝置(壓力脈動(dòng)阻力器)流速可調(diào)一般分析儀器:
4、12mL/min 制備儀器:1020mL/min進(jìn)樣系統(tǒng)1. 注射器進(jìn)樣(隔膜進(jìn)樣)帶壓進(jìn)樣停流進(jìn)樣2. 高壓定量進(jìn)樣閥(常用)泵泵柱柱排放排放進(jìn)樣進(jìn)樣圖六通進(jìn)樣閥色譜柱標(biāo)準(zhǔn)柱型:f 4.6mm或 3.9mmL: 15-30cm填料粒度:5-10mm發(fā)展趨勢: 填料粒度小柱徑小裝柱技術(shù):干法:填料粒度大于20mm時(shí)可用。濕法(勻漿法):配成懸浮液。高壓泵壓入色譜柱,洗凈備用檢測系統(tǒng)要求:靈敏度高噪音低線性范圍寬響應(yīng)快死體積小,對(duì)溫度和流速變化不敏感紫外熒 光 電化學(xué)示差折光介電常數(shù)激光散射對(duì)組分的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)溶質(zhì)型分類對(duì)試樣和洗脫液總的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)總體型通用型本實(shí)驗(yàn)采用紫外光度檢測器凝膠滲透色譜(Gel Permeation Chromatography,GPC)用化學(xué)惰性的多孔凝膠或材料為固定相,按組分分子體積差異,即分子在固定性孔穴中體積排阻作用差異實(shí)現(xiàn)組分分離。分離原理凝膠滲透色譜是按分子大小順序進(jìn)行分離的一種色譜方法。其固定相為化學(xué)情性多孔物質(zhì)凝膠,它類似于分子篩,但孔徑比分子篩大。凝膠內(nèi)具有一定大小的孔穴,體積大的分子不能滲透到孔穴中去而被排阻,較早地被淋洗出來;中等體積的分子部分滲透;小分子可完全滲透入內(nèi),最后洗出色譜柱。這樣,樣品分子基本上按其分子大小先后由柱中流出,這種現(xiàn)象就
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