化工實驗hplcgpc講義

1、用反相高效液相色譜法分離芳烴與氣相色譜法的比較：流動相：由氣相液相氣相色譜只適合分析較易揮發(fā)、且化學性質穩(wěn)定的有機化合物，而HPLC則適合于分析那些用氣相色譜難以分析的物質，如揮發(fā)性差、極性強、具有生物活性、熱穩(wěn)定性差的物質。與經(jīng)典的液相色譜法的比較：在經(jīng)典的液相色譜法的基礎上，引入了氣相色譜法的理論，采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測器，實現(xiàn)了分析速度快，分離效率高和操作自動化，這種色譜技術稱作高效液相色譜法。實驗目的1. 學習高效液相色譜儀的操作2. 了解反相液相色譜法分離非極性化合物的基本原理3. 掌握用反相液相色譜法分離芳香烴類化合物方法原理選用顆粒很細的高效固定相，采用高壓泵輸送

2、流動相， 分離、定性及定量全部分析過程都通過儀器來完成。除了 有快速、高效的特點外，它能分離沸點高、分子量大、熱 穩(wěn)定性差的試樣。根據(jù)使用的固定相及分離原理不同，一般將高效液相色譜法分為分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜和空間排斥色譜等。在分配色譜中，組分在色譜柱上的保留程度取決于它們在固定相和流動相之間的分配系數(shù)K：K = 組分在固定相中物質的濃度= Cs組分在流動相中物質的濃度Cm流動相為非極性而固定相為極性物質的色譜稱正相液相色譜法，以流動相為極性而固定相為非極性的色譜稱反相液相色譜法。將固定液鍵合到硅膠表面上，即所謂的鍵合固定相。若將正構烷烴等非極性物質（如n-C18烷）鍵合到硅膠基質上

3、，以極性溶劑（如甲醇和水）為流動相，則可分離非極性或弱極性的化合物。據(jù)此，采用反相液相色譜法可分離烷基苯類化合物。本實驗：固定相：ODS-C18流動相：甲醇水（v/v:90%/10%)混合溶液分離組分：甲苯，聯(lián)苯，萘，菲(250g/ml)PUMPDetectorWor CollectionData station (Recorder)液相色譜流程圖儲液瓶高壓泵 （核心） 過濾器壓力脈動阻力器高壓輸液系統(tǒng)恒壓泵：輸出壓力恒定，但流速隨系統(tǒng)阻力變化恒流泵：流速恒定，壓力隨阻力變化要求：流量穩(wěn)定精度在12%之間壓力平穩(wěn)無脈動往復泵壓力有波動，所以柱前設緩沖裝置（壓力脈動阻力器）流速可調(diào)一般分析儀器：

4、12mL/min 制備儀器：1020mL/min進樣系統(tǒng)1. 注射器進樣（隔膜進樣）帶壓進樣停流進樣2. 高壓定量進樣閥（常用）泵泵柱柱排放排放進樣進樣圖六通進樣閥色譜柱標準柱型：f 4.6mm或 3.9mmL: 15-30cm填料粒度：5-10mm發(fā)展趨勢： 填料粒度小柱徑小裝柱技術：干法：填料粒度大于20mm時可用。濕法（勻漿法）：配成懸浮液。高壓泵壓入色譜柱，洗凈備用檢測系統(tǒng)要求：靈敏度高噪音低線性范圍寬響應快死體積小，對溫度和流速變化不敏感紫外熒 光 電化學示差折光介電常數(shù)激光散射對組分的物理或物理化學特性有響應溶質型分類對試樣和洗脫液總的物理或物理化學特性有響應總體型通用型本實驗采用紫外光度檢測器凝膠滲透色譜(Gel Permeation Chromatography，GPC)用化學惰性的多孔凝膠或材料為固定相，按組分分子體積差異，即分子在固定性孔穴中體積排阻作用差異實現(xiàn)組分分離。分離原理凝膠滲透色譜是按分子大小順序進行分離的一種色譜方法。其固定相為化學情性多孔物質凝膠，它類似于分子篩，但孔徑比分子篩大。凝膠內(nèi)具有一定大小的孔穴，體積大的分子不能滲透到孔穴中去而被排阻，較早地被淋洗出來；中等體積的分子部分滲透；小分子可完全滲透入內(nèi)，最后洗出色譜柱。這樣，樣品分子基本上按其分子大小先后由柱中流出，這種現(xiàn)象就