GB 5009.245-2016 食品安全國家標準 食品中聚葡萄糖的測定

0161 食品安全國家標準食品中聚葡萄糖的測定1 范圍本標準規(guī)定了食品中聚葡萄糖的測定方法。本標準適用于食品中添加的聚葡萄糖的測定。2 術語和定義下列術語和定義適用于本文件。葡萄糖(n由葡萄糖、山梨糖醇和檸檬酸(或磷酸)按一定比例混合,在高溫下加熱聚合并精制、干燥而成的多聚體,平均聚合度12。屬于可溶性膳食纖維。3 原理食品中聚葡萄糖經(jīng)熱水浸提、超濾離心后,濾液經(jīng)酶解去除淀粉、果聚糖等干擾物后,再用離子色譜 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級水。氧化鈉溶液(50%):色譜純,離子色譜專用。乙酸(水合乙酸鈉(水乙酸鈉(聚糖酶(2000U/ 淀粉葡糖苷酶(3260U/溶性淀粉);200U/硝基酚淀粉酶(1000U/酸溶液():水稀釋至100 乙酸鈉溶液():水溶解并稀釋至100 乙酸鹽緩沖液(將28)與22)0162 合,用水稀釋至100 混合酶液:分別吸取68047乙酸鹽緩沖液稀釋至20合酶液臨用現(xiàn)配。動相A(氫氧化鈉):0%),用預先脫氣的水稀釋2L,惰性氣體保護。動相B(氫氧化鈉,乙酸鈉):準確稱量4168用流動相勻,氣。注:配制流動相時,容后的流動相混勻時倒置混勻56次,不可劇烈振搖。配好的流動相沿儲液瓶壁緩緩倒入,考物質(zhì)聚葡萄糖(n:純度大于90%,8424:為保證結果的準確性,如能確定添加的聚葡萄糖來源,應選用食品中添加的聚葡聚糖同源的參考物質(zhì),并達到考物質(zhì)儲備液(g):已預先稱重的100加入約100去離子水,擰緊螺口塞,渦旋振蕩30s,將試樣瓶置于80水浴10隔5使聚葡萄糖充分溶解,取出試樣瓶,冷卻至室溫,稱重(參考物質(zhì)儲備液于4保存,有效期1個月?？嘉镔|(zhì)中間液:g、g、g、g、g、 參考物質(zhì)工作液:取2量(移至已稱重的離心管中,量(振蕩混合均勻,于50水浴60水浴10出,冰浴510000r/樣分析,得到濃度分別為200g/g、150g/g、100g/g、g、g、樣分析。以此6點參考物質(zhì)工作液上機獲得工作曲線,其回歸方程的決定系數(shù)( 析天平:感量分別為1溫水浴箱:控溫精度1。速離心機:轉(zhuǎn)速10000r/旋振蕩器。量可調(diào)移液器:20L200L、200L1000L。筒式過濾器:濾離心設備:100000醚砜膜,力攪拌器:帶攪拌子。子色譜儀:配備脈沖安培檢測器、梯度泵。0163 6 體試樣:研磨、粉碎,分析前密閉保存,避免水分變化。體試樣:測定前需混合搖勻。體試樣:取100入1粒磁力攪拌子,蓋上螺口塞,稱量(記為確稱取一定量試樣(為試樣瓶中,加100水,磁力攪拌30s,80水浴105出試樣瓶冷卻至室溫后稱量(記為 液體試樣(飲料、液態(tài)奶等):取100量(記為確吸取一定量試樣(為試樣瓶中,加100蕩混合均勻,稱量(記為 0000r/10000r/意觀察是否離心完全及離心液的澄清度,如截留膜上方留有樣液或離心液混濁,可加大轉(zhuǎn)速、延長離心時間,或增加稀釋倍數(shù)(F)。2量(記為 量(記為量(記為蕩混合均勻,于50水浴60水浴10出,冰浴510000r/樣分析。上清液需在72譜參考條件檢測條件見附錄B。析結果的表述試樣中聚葡萄糖含量按式(1)計算:X=Fc00106(1)式中:X 試樣中聚葡萄糖的含量,單位為克每百克(g/100g);由標準曲線計算得到的聚葡萄糖的濃度,單位為微克每克(g/g);F稀釋倍數(shù);c聚葡萄糖參考物質(zhì)的純度,%;離心管、酶解樣液、混合酶液的總質(zhì)量,單位為克(g);空離心管質(zhì)量,單位為克(g);離心管、用于酶解樣液總質(zhì)量,單位為克(g);加水后試樣瓶總質(zhì)量,單位為克(g);試樣瓶總質(zhì)量,單位為克(g);0164 試樣質(zhì)量,單位為克(g);100將結果表示為百分含量的系數(shù);106微克(g)與克(g)的轉(zhuǎn)換系數(shù)。以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,結果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。8 其他最小稱樣量為500g,00g;00g,00g。0165 附 錄 度40,底物(蔗果三糖)濃度為10的標準條件下,1 酸():準確吸取12水稀釋至1000酸鈉溶液():水溶解并稀釋至1000酸鹽緩沖液(將280)與220)混合,用水稀釋至1000氧化鈉溶液(2):準確稱取80水溶解并稀釋至1000,5到500加5拌溶解,冷卻后加蒸餾水定容至1000于棕色瓶中備用。糖標準液(1mg/準確稱取80烘至恒重的分析純果糖100于小燒杯中,加少量乙酸鹽緩沖液溶解后,轉(zhuǎn)移到100乙酸鹽緩沖液定容至100勻,4冰箱中保存?zhèn)溆?。果三糖溶?10):乙酸鹽緩沖液溶解并稀釋至1000 析天平。熱恒溫水浴鍋。見光分光光度計。時器。水浴加入5卻至室溫,用水定容至25成標準空白樣。乙酸鹽緩沖液定容至100別加入到25各管搖勻,在沸水浴中準確加熱5出,冷卻至室溫,加水定容至25塞后顛倒混勻,放置30標準空白液為對照調(diào)零,在540吸光度值為縱坐標,果糖含量(0166 為橫坐標,繪制標準曲線。測酶溶液的配制稱取測試酶樣品,用乙酸鹽緩沖液進行稀釋、定容(0平衡200平衡20入到25勻,0平衡30水浴加熱5卻至室溫,加水定容至25塞后顛倒混勻,放置30標準空白液為對照調(diào)零,在540入到25勻40平衡30勻以終止反應,沸水浴加熱5卻至室溫,用水定容至25塞后顛倒混勻,放置30標準空白液為對照調(diào)零,在540 酶活力計算果聚糖酶的酶活力按式(算:(K+t1000(中:待測酶液的果聚糖酶活力,單位為活力單位每毫升(U/酶反應液的吸光度;酶空白液的吸光度;K標準曲線的斜率;標準曲線的截距;M果糖的摩爾質(zhì)量,M(t酶解反應的時間,單位為分(1000換算系數(shù)。度40,底物(牡蠣糖,度為10mg/葡萄糖計)所需要的酶量為1U。酸鹽緩沖液(溶于水,加92醋酸),稀釋至1000氧化鈉溶液(2):準確稱取80水溶解并稀釋至1000,5到500加5拌溶解,0167 餾水定容至1000于棕色瓶中備用。萄糖標準液(1mg/稱取無水葡萄糖100乙酸鹽緩沖液溶解,定容至100蠣糖溶液(10mg/乙酸鹽緩沖液溶解并稀釋至100 析天平。熱恒溫水浴鍋。光光度計。時器。水浴加入5卻至室溫,用水定容至25成標準空白樣。乙酸鹽緩沖液定容至100別加入到25各管搖勻,在沸水浴中準確加熱5出,冷卻至室溫,加水定容至25塞后顛倒混勻,放置30標準空白液為對照調(diào)零,在540吸光度值為縱坐標,葡萄糖含量(橫坐標,繪制標準曲線。測酶溶液的配制稱取測試酶樣品,用乙酸鹽緩沖液進行稀釋、定容(0平衡200平衡20入到25勻,0平衡30水浴加熱5卻至室溫,加水定容至25塞后顛倒混勻,放置30標準空白液為對照調(diào)零,在540入到25勻40平衡30勻以終止反應,沸水浴加熱5卻至室溫,加水定容至25塞后顛倒混勻,放置30標準空白液為對照調(diào)零,在540 酶活力計算異淀粉酶的酶活力按式(算:(K+t1000(0168 式中:待測酶液的異淀粉酶活力,單位為活力單位每毫升(U/酶反應液的吸光度;酶空白液的吸光度;K標準曲線的斜率;標準曲線的截距;M葡萄糖的摩爾質(zhì)量,M(t酶解反應的時間,單位為分(1000換算系數(shù)?？扇苄缘矸蹫榈孜锏拿富盍σ钥扇苄缘矸蹫榈孜锏拿富盍y定參照009酶活力的測定方法。度為40,底物(對硝基酚度為10,有過量分鐘從對硝基酚需要的酶量為1U。酸():準確吸取12水稀釋至1000 乙酸鈉溶液():水溶解并稀釋至1000 乙酸鹽緩沖液(將280)與220)混合,用水稀釋至1000 碳酸鈉溶液(1):水溶解并稀釋至1000 對硝基酚標準液(1mg/稱取對硝基酚100乙酸鹽緩沖液溶解,定容至100 乙酸鹽緩沖液進行稀釋、定容(稀釋后的酶液中U/硝基酚0析天平。熱恒溫水浴鍋。光光度計。時器。勻,制成標準空白樣。0169 用乙酸鹽緩沖液定容至100取對硝基酚標準使用液各1別加入到5標準空白液為對照調(diào)零,在400吸光度值為縱坐標,對硝基酚含量(橫坐標,繪制標準曲線。測酶溶液的配制稱取測試酶樣品,用乙酸鹽緩沖液進行稀釋、定容(稀釋后的酶液中U/0平衡200平衡20入到5勻,0平衡10溫放置5標準空白液為對照調(diào)零,在400入到5勻,40平衡10溫放置5標準空白液為對照調(diào)零,在400活力計算葡糖苷酶的酶活力按式(算:(K+t1000(中:待測酶液的淀粉葡糖苷酶活力,單位為活力單位每毫升(U/酶反應液的吸光度;酶空白液的吸光度;K標準曲線的斜率;標準曲線的截距;M對硝基酚的摩爾質(zhì)量,M(t酶解反應的時間,單位為分(1000換算系數(shù)。01610 附 錄 子色譜條件分析柱:徑10m,250保護柱:徑10m,50或等效柱。進樣量:20L;柱溫:30。注:給出分析柱信息是為了方便本標準的使用者,并不表示對該產(chǎn)品的認可,如果其他等效產(chǎn)品具有相同的效果,則可使用這些等效的產(chǎn)品。動相注:配好的流動相需脫氣,并用惰性氣體保護。氫氧化鈉;氫氧化鈉,乙酸鈉;流速: 度淋洗程序時間/流動相B/%測器采用四電位波形,測器的波形設置時間/01611 )時間/00子色譜條件分析