GB 29694-2013 食品安全國家標準 動物性食品中13種磺胺類藥物多殘留的測定 高效液相色譜法

  G 中華人民共和國 國 家標準  9694 2013 食品安全國家標準  動物性食品中 13 種磺胺類藥物 多殘留的測定  高效液相色譜法  in 013布  2014施  中華人民共和國農(nóng)業(yè)部  中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會  發(fā)布  I 目   次  目   次  . I 前   言  . 物性食品中 13 種磺胺類藥物多殘留的測定  高效液相色譜法  .  1 范圍  .  2 規(guī)范性引用文件  .  3 原理  .  4 試劑和材料  .  5 儀器和設備  .  6 試料的制備與保存  .  品的制備  .  品的保存  .  7  測定步驟  .  取  .  化  .  測定  .  白試驗  .  8  結(jié)果計算和表述  .  9  檢測方法靈敏度、準確度和精密度  .  敏度  .  確度  .  密度  .  附錄 A .     言  本標準的附錄 A 為資料性附錄。  本標準系國內(nèi)首次發(fā)布的國家標準。    動物性食品中 13 種磺胺類藥物多殘留的測定  高效液相色譜法  1 范圍  本標準規(guī)定了動物性食品中磺胺類藥物殘留量檢測的制樣和高效液相色譜測定方法。  本標準適用于豬 和雞的肌 肉 和肝臟組織 中的 磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、苯?；前贰⒒前烽g甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺二甲氧噠嗪和磺胺吡唑單個或多個藥物 殘留量的檢測。  2 規(guī)范性引用文件  下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否 可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。   準化工作導則  第 1 部分：標準的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則   6682  分析實驗室用水規(guī)則和試驗方法  3 原理  試料中 殘留 的磺胺類藥物 ，用 乙酸乙酯提取， 酸溶液轉(zhuǎn)換溶劑， 正己烷除脂， 凈化，高效液相色譜 定 ，外標法定量。  4 試劑和材料  以下所用試劑，除特殊注明外均為分析純試劑，水為符合  6682 規(guī)定的一級水。  磺胺醋酰 、 磺胺吡啶、磺胺甲氧噠嗪、苯?；前贰⒒前烽g甲氧 嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺二甲氧噠嗪、磺胺吡唑 對照品 ：含量 99 ； 磺胺噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶： 含量 98。  乙酸乙酯 ： 色譜純。  乙腈 ： 色譜純。  甲醇 ： 色譜純。    鹽酸  正己烷  甲酸 ： 色譜純。  氨水   ： 60 3 相當者。  酸溶液： 取甲酸 1 水溶解并稀釋至 1 000  酸乙腈溶液 ：取 酸 830 乙腈溶解 并稀釋至 1 000  洗脫液 ：取氨水 5 甲醇溶解并稀釋至 100  0.1  鹽酸溶液 ：取鹽酸 水溶解并稀釋至 100  50%甲醇乙腈 溶液：取甲醇 50 乙腈溶解并稀釋至 100  100 g/胺類藥物混合標準貯備液 ： 精密 稱取磺胺類藥物標準品各 10  100 瓶中，用乙腈溶解并 稀釋至刻度，配制成濃度為 100 g/磺胺類藥物混合標準貯備液 。 20 以下保存，有效期 6 個月。  10 g/胺類藥物混合標準工作液 ： 精密量 取 100 g/胺類藥物混合標準貯備液 5.0  50 瓶中，用乙腈稀釋 至刻度 ， 配制成濃度為 10 g/磺胺類藥物混合標準工作液。 20以下保存，有效期 6 個月。  5 儀器和設備  高效液相色譜儀 ： 配紫外檢測器或二極管陣列檢測器。  分析天平 ： 感量 1 g。  天平 ： 感量 g。  渦動儀  離心機  均質(zhì)機  旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀  氮吹儀  固相萃 取裝置  雞心瓶 ： 100  聚四氟乙烯離心管 ： 50    濾膜 ： 有機相， m。  6 試料的制備與保存  料 的制備  取適量新鮮或解凍的空白或供試組織，絞碎 ， 并使均質(zhì)。  取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。  取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。  取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標準 工作 液，作為空白添加試料。  料 的保存   20 以下 保存 。  7  測定步驟  取  稱取試料（ 5g， 于 50 加乙酸乙酯 20 動 2 4 000 r/ 上清液于 100 渣 中加 乙酸乙酯 20 重復提取一次，合并兩次提取液。  化  雞心瓶中加 0.1 鹽酸溶液 4  40 下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至少于 3 至 10  0.1 鹽酸溶液 2 至同一離心管中。再用正己烷 3 正己烷轉(zhuǎn)至同一離心管中，渦旋混和 30 s， 3 000 r/ 正己烷。再次用正己烷 3 至 同一離心管中，渦旋混和 30 s， 3 000 r/ 正己烷，取下層液備用。   鹽酸溶液 2 取備用液過柱 ，控制流速 1 mL/次用 鹽酸溶液 1 0%甲醇乙腈 溶液 2 用洗脫液 4 集洗脫液，于 40 氮氣吹干，加 酸乙腈 溶液 1.0 濾膜 過 濾 ，供 高效液相色譜測定 。  標準曲線制備  精密量取 取 10 g/胺類藥物 混合 標準 工作 液 適量 ，用 酸乙腈 溶液 稀釋 ， 配制 成 濃度  為 10、 50、 100、 250、 500、 2500 和 5000 g/L 的 系列 混合 標準 溶 液 ， 供 高效液相色譜測定 。 以 測 得峰面積為縱坐標，對應的標準溶液 濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 求回歸方程和相關系數(shù)。  定  液相色譜參考條件  色譜柱： 18（ 250 .5 徑 5 m） ，或相當者；  流動相： 酸 +乙腈，梯度洗脫見表 1；  流速： 1 mL/ 柱溫： 30 ；  檢測波長： 270  進樣體積： 100 L。  表 1   流動相梯度洗脫條件  時間  酸  % 乙腈  % 3 17 3 17 0 20 0 40 0 90 0 90 3 17 3 17 測定法  取試樣溶液和相應的對照溶液，作單點或多點校準，按外標法 ， 以峰面積計算 。 對照溶液及試樣溶液中磺胺類藥物響應值應在儀器檢測的線性范 圍之內(nèi)。在上述色譜條件下，對照溶液和試樣溶液的高效液相色譜圖 見附錄 A。  白試驗  除不加試料外，采用完全相同的步驟進行平行操作。  8  結(jié)果計算和表述  試料中 磺胺類藥物的殘留量 (g/ 按下式計算    X= CV m 式中：  X供試 試料中 相應的 磺胺類藥物的殘留量 ， g/ C試樣 溶 液中 相應的 磺胺類藥物 濃度， g/ V溶解殘 余 物所用 酸乙腈 溶液 體積，  m供試試料 質(zhì)量， g。  注：計算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定后的算術平均值表示，保留三位有效數(shù)字。  9  檢測方法靈敏度、準確度和精密度  敏度  本方法 豬 和雞的 肌肉 組織 的檢測限 為 5 g/定量限為 10 g/豬 和雞的肝臟組織 的檢測限 為12 g/量限 為 25 g/ 確度  本方法肌肉組織在 10 200 g/肝臟組織在 25 200 g/加水平上的回收率 為 60%120%。  密度  本方法的批內(nèi) 相對標準偏差 15%，批間 相對標準偏差 20%。    附錄 A （資料性附錄）  圖 A  磺胺類 藥物 標準溶液色譜圖（ 250 ng/ 圖 B  雞 肌肉組織 空白試樣色譜圖  圖 C  雞肌肉 組織 空白 添加磺胺類藥物試樣色譜圖（ 50 ng/g）  圖 D   雞肝臟空白試樣色譜圖；  圖 E  雞肝臟組織空白添加磺胺類藥物試樣色譜圖（ 50 ng/g）；  圖 F  豬肌肉組織空白試樣色譜圖；  圖 G  豬肌肉組織空白添加磺胺類藥物試樣色譜圖（ 50 ng/g）