課件：性病實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)及應(yīng)用.ppt

性傳播疾病實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)及應(yīng)用,常見性傳播疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”,淋病 淋球菌培養(yǎng) 梅毒 暗視野檢查+TPPA(FTA-ABS,WB) 沙眼衣原體 衣原體培養(yǎng)+核酸擴(kuò)增技術(shù) 支原體感染 支原體培養(yǎng) 生殖器皰疹 病毒培養(yǎng)+核酸擴(kuò)增技術(shù) 尖銳濕疣 核酸雜交和核酸擴(kuò)增技術(shù) HIV/艾滋病 蛋白印跡試驗(yàn)+HIV抗原檢測 滴蟲性陰道炎 濕片法+毛滴蟲培養(yǎng) 細(xì)菌性陰道病 G染色查線索細(xì)胞 軟下疳 細(xì)菌培養(yǎng)+核酸擴(kuò)增技術(shù) 性病性淋巴肉芽腫 衣原體培養(yǎng)+核酸擴(kuò)增技術(shù),一、梅毒的診斷標(biāo)準(zhǔn),1、 暗視野檢查/鍍銀染色法 2、非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn) 3、梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn),（一）實(shí)驗(yàn)室診斷方法的臨床意義,暗視野顯微鏡法直接鏡檢圖像（1000）,1、暗視野檢查臨床意義,當(dāng)標(biāo)本陽性時，可確診梅毒。 適宜于早期梅毒(一、二期)，特別是早期一期梅毒、早期先天梅毒 。 暗視野顯微鏡檢查法被WHO確定為性病實(shí)驗(yàn)室的必備方法 當(dāng)標(biāo)本陰性時，不能排除梅毒診斷 不適用于來至口腔的標(biāo)本 暗視野顯微鏡檢查法是能夠立即在獲得性或先天性梅毒的早期進(jìn)行直接診斷的唯一標(biāo)準(zhǔn),2、RPR類臨床意義,RPR等試驗(yàn)一般認(rèn)為是梅毒初篩試驗(yàn)?陽性者，均需作確證試驗(yàn)。 VDRL用于神經(jīng)梅毒診斷。 有些疾病可導(dǎo)致生物學(xué)假陽性。 復(fù)發(fā)或再感染可陽轉(zhuǎn)或滴度升高。 為療效觀察、判愈方法。 早期梅毒治療后血清滴度應(yīng)下降4倍認(rèn)為治療有效。,3、TPPA（TPHA）臨床意義,1、為梅毒確證試驗(yàn)， 其敏感性：一期梅毒76（6990） 二期梅毒為100 潛伏梅毒為97（97100） 晚期梅毒為94 其特異性：100 2、治療后可終生陽性，不能作為療效指標(biāo)。 3、IgM抗體可作為梅毒早期診斷或胎傳梅毒診斷。 4、可有1生物學(xué)假陽性存在，如，SLE。,兩類血清學(xué)方法臨床意義的比較,RPR類： RPR等試驗(yàn)可用于大標(biāo)本量的篩查？ RPR定量可排除生物學(xué)假陽性？ RPR是療效判定的指標(biāo) RPR是療后隨訪的指標(biāo) RPR用于判定是否血清復(fù)發(fā),TPPA類： 是金標(biāo)準(zhǔn) TPPA等試驗(yàn)是確診指標(biāo) 在HIV感染者中，血清學(xué)試驗(yàn)可發(fā)生難于解釋的現(xiàn)象，若懷疑梅毒感染應(yīng)作HIV檢查,（二）實(shí)驗(yàn)室診斷方法臨床應(yīng)用,1、適用對象 2、方法學(xué)的靈敏度 3、不同病期方法學(xué)選擇 4、血清學(xué)結(jié)果解釋 5、RPR滴度與治療效果 6、療后血清學(xué)隨訪 7、生物學(xué)假陽性 8、胎傳梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn) 9、神經(jīng)梅毒實(shí)驗(yàn)室診標(biāo)準(zhǔn),1、適用對象,皮膚、性病門診 輸血前檢查 手術(shù)前檢查 入院檢查 產(chǎn)前檢查 檢驗(yàn)檢疫,2、方法學(xué)的靈敏度,病原學(xué)檢查：PCR 鍍銀染色 暗視野 血清學(xué)方法：FTA-ABS TPPA RPR 抗體： IgM IgG,3、不同病期方法學(xué)選擇,一期 二期 三期,暗視野、鍍銀染色、PCR、 IgM FTA-ABS、TPPA、ELISA、CLIA、RT、WB、RPR、暗視野、鍍銀染色、PCR等 FTA-ABS、TPPA、ELISA、CLIA、RT、WB 、RPR、VDRL、病理等,4、血清學(xué)結(jié)果解釋,請?jiān)诖溯斎肽奈谋?。請?jiān)诖溯斎肽奈谋尽Ｕ堅(jiān)诖溯斎肽奈谋尽Ｕ堅(jiān)诖溯斎肽奈谋?。請?jiān)诖溯斎肽奈谋尽?TPPA為什么做滴度？經(jīng)常有人提問,夫、妻、子結(jié)果不一致情況？,5、RPR滴度與治療效果,1、治療成功：早期梅毒患者在治療后6個月內(nèi)癥狀消失，且RPR滴度有至少4倍的下降。晚期梅毒或隱性梅毒患者在治療后1224個月內(nèi)RPR滴度有至少4倍的下降。 2、治療失敗：治療后癥狀持續(xù)或重新出現(xiàn)；治療后RPR滴度反而上升了4倍或以上；RPR滴度較高（1:32或以上）但在六個月內(nèi)沒有達(dá)到4倍的下降?？姑范局委熓〉牟∪藨?yīng)考慮合并HIV感染及神經(jīng)梅毒的可能性。 3、血清固定：經(jīng)正規(guī)治療后，梅毒患者RPR一般都會轉(zhuǎn)為陰性，但有13%的病人即使經(jīng)足量抗梅治療，RPR滴度仍持續(xù)呈低滴度陽性，這種現(xiàn)象稱為血清固定，其原因尚不明了。血清固定患者的滴度重又上升則提示再次感染梅毒。,6、療后血清學(xué)隨訪,方法:RPR 時間： 第1年，每3個月檢查1次 第2年，每6個月檢查1次 第3年，最后1個月檢查,大家忘掉只有梅毒才能達(dá)到1:8？,RPR在妊娠患者中，有28%的假陽性發(fā)生,XX梅毒事件（華西都市報）,2012年8月，李冬梅（化名）懷孕。 2012年12月26日，初檢胎檢篩查疑患梅毒 。 2013年1月4日(另一家機(jī)構(gòu)），夫妻再檢均呈陰性。 2013年5月14日，待產(chǎn)，第2天產(chǎn)檢結(jié)果被告之有梅毒。 2013年5月16日，剖腹產(chǎn)。 2013年5月21日（另一家機(jī)構(gòu)），李冬梅RPR（-）TPPA（+），雙女與母一致。 2013年9月，前往重慶，RPR（-）TPPA（+）。,8、胎傳梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn),暗視野檢查陽性。 非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)持續(xù)陽性。 非梅毒螺旋體抗原血清抗體滴度是母親的4倍以上。 患兒19SIgM陽性。 隨訪18個月觀察。,9、神經(jīng)梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷,梅毒血清學(xué)試驗(yàn)（RPR、TPPA）陽性。 腦脊液異常（WBC計(jì)數(shù) 10*10 /L 蛋白量500mg/L） 3. 腦脊液VDRL試驗(yàn)陽性（可FTA-ABS陽性）。,6,梅毒血清學(xué)檢測-策略一,非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（RPR),陽性,陰性,報告：RPR陰性,梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（TPPA),RPR定量試驗(yàn),報告：RPR陰性滴度 TPPA陽性,陽性,陰性,報告：RPR陽性 TPPA陰性,？前帶、早期,第2次收費(fèi)？,1：8習(xí)慣？,孕產(chǎn)婦梅毒檢測及服務(wù)流程,接受初次產(chǎn)前保健的孕產(chǎn)婦,采用RPR或TRUST等篩查,采用TPPA等證實(shí),陽性,陰性,診斷梅毒感染,陽性,排除梅毒感染,陰性,繼續(xù)常規(guī)產(chǎn)前保健,2個療程治療，RPR定量檢測和隨放,？方法、前帶、早期,？真陽,？真能排除,？真梅毒,梅毒血清學(xué)檢測-策略二,梅毒螺旋體血清試驗(yàn)（ELISA),陽性,陰性,報告： ELISA陰性,推薦TPPA復(fù)檢,RPR定性、定量試驗(yàn),報告： ELISA陽性RPR陽性及滴度,陽性,陰性,報告： ELISA陽性,TPPA陰性,RPR陰性,報告： ELISA陽性 RPR陰性,陽性,陰性,報告： ELISA陽性,TPPA陽性,RPR陰性,？敏感性,第2次收費(fèi)？,？收費(fèi)不,？以誰為準(zhǔn),我室推薦的梅毒血清學(xué)試驗(yàn)-策略三,梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（TPPA等）,TPPA-,TPPA+,陰性報告,RPR-,RPR+,現(xiàn)癥梅毒抗梅治療療后觀察,既往感染隨訪或抗梅治療,第2次收費(fèi)？,我室推薦的梅毒血清學(xué)試驗(yàn)-策略四,梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（TPPA等） RPR滴度（1:32直到出現(xiàn)陰性）,TPPA- RPR-,陰性報告,TPPA- RPR+,生物學(xué)假陽性,TPPA+ RPR-,既往感染 或隨訪,TPPA+ RPR+,現(xiàn)癥病人 抗梅治療 療效隨訪,面對當(dāng)前梅毒血清學(xué)檢測存在的問題，即將有策略五,梅毒孕產(chǎn)婦所生兒童隨訪與先天梅毒感染狀態(tài)監(jiān)測流程,梅毒產(chǎn)婦所生新生兒,不能開展暗視野、IgM,采靜脈血、RPR定量,能開展暗視野、IgM,陰性,診斷先天梅毒感染,陽性,滴度母親4倍，無論有無癥狀,滴度母親4倍，有癥狀,滴度母親4倍，無癥狀,治療、隨訪,18月TPPA,陽性,預(yù)治療,每3個月RPR定量，觀察癥狀,陽性,陰性,RPR滴度不下降或上升，結(jié)合癥狀,6月后RPR未陰，滴度低水平,連續(xù)2次陰性,每3個月TPPA,18月TPPA+,連續(xù)2次陰性,排除先天梅毒感染,陰性,無此線？,歐盟梅毒指南（2008年版）,初篩試驗(yàn)： 選用EIA、TPPA/TPHA 如果懷疑早期梅毒最好用TP特異性IgM檢測，如果陰性，12周后重復(fù)檢測 RPR/VDRL不推薦作為初篩試驗(yàn)，但可作為有癥狀早期梅毒的快速檢測方法，需要同時檢測滴度。,確證試驗(yàn),初篩陽性，應(yīng)用另外一種TP特異性試驗(yàn)確證 EIA用TPPA/TPHA確證 TPPA/TPHA用EIA確證 然后再做滴度 如果初篩和確證結(jié)果不一致，則做重組抗原免疫印跡試驗(yàn) 初篩和確證試驗(yàn)陽性，而RPR/TRUST陰性，推薦做IgM檢測。 陽性結(jié)果需要對第二份血樣進(jìn)行重復(fù)檢測以確證。,判斷梅毒活動性,成功治療后，滴度32罕見。 IgM檢測，可以說明疾病的活動性，但是晚期梅毒IgM可能為陰性。 如果治療前RPR/TRUST為陰性，IgM檢測有助于判斷病情。,血清學(xué)試驗(yàn)選擇,篩選試驗(yàn): 1.EIA；2. TPPA; 3.TPPA/TPHA加VDRL/RPR。 疑似早期梅毒：EIA-IgM 初篩陽性，另一實(shí)驗(yàn)證實(shí) TPPA,EIA,RPR/VDRL EIA+:confirm with TPPA or TPHA。 2個試驗(yàn)不一致:免疫印跡。 VDRL/RPR滴度1:16、IgM陽性為梅毒活動的標(biāo)志之一。 治療當(dāng)天滴度為判斷療效的最佳依據(jù)。 梅毒早期VDRL/RPR 滴度可能較低。,二、淋病的實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn),淋病診斷標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室方法,1、顯微鏡檢查 涂片、革蘭染色 對男性病人有診斷價值（敏感性9095%， 特異性98100%） 對女性病人敏感性5070% 2、培養(yǎng) 敏感性：80100% 特異性：100% 3、核酸檢測：熒光PCR、NGCT核酸TMA雙檢、NGCTUu三檢等 敏感性：100%，死菌活菌、尿液分泌物均可 特異性：100%,有診斷意義的報告 報告方式，要包含4個因素 對男性單純性NG感染，敏感性可達(dá)95 對女性NG感染，敏感性只有50 不能作為診斷指標(biāo) 不能作為判愈指標(biāo),顯微鏡檢查臨床意義,淋菌培養(yǎng)臨床意義,是臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，是WHO推薦的淋病篩查的唯一方法 是判愈的指標(biāo) 可以對疑似（或非生殖器部位標(biāo)本）NG的菌株作進(jìn)一步的鑒定 可進(jìn)行NG耐藥監(jiān)測，PPNG、TRNG、QRNG 科研,三、生殖道沙眼衣原體感染的 診斷標(biāo)準(zhǔn),沙眼衣原體診斷標(biāo)準(zhǔn) 實(shí)驗(yàn)室檢查方法,1、培養(yǎng)法： McCoy細(xì)胞 特異性高：100% 敏感性低 價昂、費(fèi)時、費(fèi)力 設(shè)備,2、抗原檢測 、直接免疫熒光試驗(yàn)（DFA）：用種特異的沙眼衣原體主要外膜蛋白單克隆抗體用熒光素標(biāo)記染色。需熒光顯微鏡，檢查者要有經(jīng)驗(yàn)，區(qū)別非特異性熒光。 、酶免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：敏感性7197，特異性9799%，可成批檢測。 、快速免疫層析法：明窗試驗(yàn)等。,明窗試驗(yàn)（clear view chlamydia）,臨床意義 此法診斷女性宮頸沙眼衣原體感染的敏感性為87，特異性為98.8 簡便、快速，醫(yī)生和病人都容易接受 不是金標(biāo)準(zhǔn) 注意事項(xiàng) 標(biāo)本的量一定要夠、拭子要大一點(diǎn)、轉(zhuǎn)動一圈、停留時間要長一點(diǎn) 男性若分泌物少，可用首段尿液沉淀 注意Na離子或其它原因造成的假陽性,3、核酸擴(kuò)增試驗(yàn)（NAAT）,聚合酶鏈反應(yīng)與連接酶鏈反應(yīng)(PCR，LCR)、熒光定量PCR、NGCT核酸TMA雙檢、NGCTUu三檢等。 優(yōu)點(diǎn)：1、敏感性：9097%，特異性99100% 2、可以用尿液作檢查，非侵襲性方法 3、篩查，無癥狀病人 缺點(diǎn)：1、價格昂貴需要貴重儀器、設(shè)備 2、人員需要培訓(xùn),200份標(biāo)本同時用3種方法檢測Ct結(jié)果,明窗試驗(yàn) IDEIA PCE FQ-PCR 陽性 47 62 66 陰性 153 138 134 合計(jì) 200 200 200,四、生殖器皰疹實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn),生殖器皰疹診斷標(biāo)準(zhǔn) 實(shí)驗(yàn)室檢查方法,1、病毒抗原檢測： 單克隆抗體免疫熒光試驗(yàn)（IFA）或酶免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）來檢測抗原。 2、培養(yǎng)： 看特征性細(xì)胞病變，特異性100%，但敏感性不高。需設(shè)備條件、技術(shù)。,3、核酸檢測: 熒光PCR、雙檢、 三聯(lián)檢 4、抗體檢測： IgM,其它方法介紹復(fù)合PCR,請?jiān)诖溯斎肽奈谋?。請?jiān)诖溯斎肽奈谋?。請?jiān)诖溯斎肽奈谋?。請?jiān)诖溯斎肽奈谋?。請?jiān)诖溯斎肽奈谋尽?HSV快速檢查方法,HSV-IDEIA（酶免疫放大） 與金標(biāo)準(zhǔn)相比，其敏感性達(dá)93.6%,特異性達(dá)97.8 可同時檢測HSV-1和HSV-2型 文獻(xiàn)報道， HSV-1致GH的比例在上升 DAKO專利技術(shù) 可成批，可單人份做 2小時出結(jié)果 可目測，可上機(jī),M-PCR與IDEIA檢測HSV比較,HSV-IDEIA M-PCR IDEIA（）IDEIA（） Total 166 5 171 0 131 131 Total 166 136 302,五、尖