（食品科學(xué)專業(yè)論文）色譜技術(shù)和伏安法在竹葉提取物成分分析中的應(yīng)用研究.pdf

浙江人學(xué)碩士學(xué)位論文 徐維婭 色譜技術(shù)和伏安法在竹葉提取物成分分析巾的應(yīng)用研究 摘要 蛔前竹葉提取物 e b l 9 7 1 的主要質(zhì)控指標(biāo)足以硝酸鋁 業(yè)硝酸鈉比色法 測定的總黃酮糖營含量 以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn) 為了建立與國際接軌的高標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控體 系 必須運(yùn)用高效液相色譜 h p l c 技術(shù)對e b l 9 7 l 中主要的黃酮碳苷進(jìn)行定 量 首先面臨的是標(biāo)準(zhǔn)品的分離 純化和結(jié)構(gòu)鑒定 本研究采用高速逆流色譜 h s c c c 對e b l 9 7 j 中的黃酮進(jìn)行組分分離 接著用制備型高效液相色譜 p h p l c 純化黃酮單體 然后用液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用 l c m s 技術(shù)對單體進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒 定 同時采用溶出伏安法對e b l l 中的微量元素進(jìn)行檢測 f 研究結(jié)果分述如下 1 經(jīng)過對6 組兩相溶劑系統(tǒng)的分析測試 選擇以石油醚 正j 醇 水 1 4 5 作為h s c c c 的溶劑系統(tǒng) 其分層時間為2 5 s 上卜相體積比為o 9 6 兩種 主要竹葉碳苷黃酮在該溶劑系統(tǒng)上 卜相中的分配系數(shù)分別為3 8 0 和4 4 4 2 以此溶劑系統(tǒng)的 卜相為固定相 下相為流動相 當(dāng)h s c c c 儀轉(zhuǎn)速為 8 0 0 r p m 流動相流速為2 2 5 m l m i n e b l 9 7 l 進(jìn)樣量為1 0 3m g 時 3 小時內(nèi)就可 有效地將試樣中的黃酮類化合物分成六個餾分 其中最主要的餾分一5 號峰經(jīng) h p l c 檢測 發(fā)現(xiàn)含兩種主要的竹葉碳苷黃酮 3 利用制備型反相高效液相色譜 對5 號峰進(jìn)一步分離純化 色譜條件 為 b e c k m a nu l t r a s p h e r et mo d s 柱 1 0 m mi d 2 5 0 m m 5 1 m 柱溫 3 0 流速 1 0m l m i n 進(jìn)樣量 1 0 0u l u v 檢測波長 3 3 0 n t o p d a 掃描 波長范圍 1 9 0 6 0 0 n m 制備得到兩個單體 其紫外光譜圖都具有黃酮類化合 物所特有的吸收帶i 3 0 0 4 0 0 n m 和帶i i 2 4 0 2 8 5 n m 且兩吸收峰的相對 強(qiáng)度也符合黃酮類化合物特征 4 利用l c m s 聯(lián)用技術(shù)對所得的兩個黃酮申體進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定 測得其分 子量均為4 4 8 帶i 的紫外吸收相同 帶i i 有顯著差異 經(jīng)與美國 l n d o f i n e c h e m i c a l 公司的h p l c 級標(biāo)準(zhǔn)鼎對照 證實分別是葒草苷 8 c 葡萄糖 木犀草素 和異葒草苷 6 c 葡萄糖 木犀草素 5 經(jīng)多次探索發(fā)現(xiàn) 運(yùn)用1 5 次微分的溶出伏安法 在o 0 1 m o l l 醋酸鈉 o 0 4 5 m o l l 酒石酸氫鉀介質(zhì) p h 5 7 8 中 鎘 鉛 鋅和銅離子都能產(chǎn)生靈敏 的氧化波 四種離子在1 0 一1 0 4m o l l 之間均具有良好的線性關(guān)系 將此法戍 塑婆叁蘭堡圭蘭堡堡奎堡絲塑 魚堂墊查塑叢室鯊壟笪墮堡墼塑些坌坌要 塑壁里墮塞 用于e b l 9 7 l 中微量元素的分析測定 得干基含量為 鉛 1 6 9 0 0 5 7 p g g 鋅 6 0 9 0 5 6 7 g g 變異系數(shù)分別為3 3 8 和9 3 1 l 旦l 收率分別為 8 4 7 1 0 8 鋅8 5 2 1 0 5 而e b l 9 7 1 中的鎘和銅離子幾乎測不 h 研究表明 將h s c c c 和p h p l c 有機(jī)組合 可以從e b l 9 7 l 中快速 高效地 分離純化黃酮單體 且能達(dá)到百毫克級的水平 為竹葉黃酮標(biāo)準(zhǔn)品舶制備開拓 了一條有效途徑 并為竹葉提取物高標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控體系的建立奠定了馨 同時 本研究得出的溶出伏安法測定竹葉提取物中的微量元素 具有樣品處理簡單 靈敏度高 快速簡便 干擾小 設(shè)備投資省等優(yōu)點 適宜在生產(chǎn)實蘄中推廣使 用 氣 l 7 關(guān)鍵詞 竹口l 提取物j 碳苷黃酮i 微量元素 高速逆流色譜 h s c y 制備型高效液相色譜印h p l c x 液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)甩9 c m s 溶出伏安法 浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文徐維婭 色譜技術(shù)和伏安法在竹葉提取物成分分析中的應(yīng)用研究 a p p l i c a t i o ns t u d i e so fc h r o m a t o g r a p h y a n d v o l t r a m m e t r y o n e f f e c t i v ec o m p o n e n t a n a l y s i so f b a m b o o l e a f e x t r a c t a b s t r a c t a tp r e s e n t t h em a j o rq u a l i t yc o n t r o li n d e xo ft h ee x t r a c to fb a m b o ol e a v e s e b l i st h e t o t a lf l a v o n eg l y c o s i d ec o n t e n t t f d e t e r m i n e db ya 1 f n 0 3 3 n a n 0 3s p e c t r o p h o t o m e t r yt a k i n gr u t i n a sas t a n d a r d i no r d e rt os e t u p a h i g h s t a n d a r dq u a l i t ya s s u r a n c es y s t e m w h i c hc a nb ea c c e p t e db yi n t e r n a t i o n a l s o c i e t y t h eq u a n t i t a t i v ea n a l y s i sm e t h o do f t f u s i n gb yh i g hp e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h y h p l c s h o u l d b ei n d u c e da se a r l ya sp o s s i b l e i ti sf i r s t l yf a c e d w i t ht h es e p a r a t i o n p u r i f i c a t i o n p r e p a r a t i o na n ds t r u c t u r a li d e n t i f i c a t i o no fm a i n f l a v o n o i d si ne b l i nt h i s s t u d i e s u s i n gh i g h s p e e d c o u n t e r c u r r e n t c h r o m a t o g r a p h y h s c c c t op r e p u r i f yf l a v o n o i d s i n e b l 9 7 1 p r e p a r a t i v eh i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y p h p l c t op r e p a r em o n o m e r s a n d h p l c m st oi d e n t i f ys t r u c t u r e w eg a i n e dt w op u r ec h e m i c a l so fc g l y c o s y l f l a v o n o i d so fb a m b o o a tt h es a l r l et i m e t h em e a s u r e m e n to ft r a c ee l e m e n t si n e b l 9 7 1w a sa l s oc o n d u c t e du s i n gb y1 5 t hd i f f e r e n t i a ls t r i p p i n gv o l t a m m e t r y r e s u l t sw e r e r e p o r t e d a sf o l l o w s r e s p e c t i v e l y 1 t h r o u g hi n v e s t i g a t i n gt h ed i s t r i b u t i o nc o e f f i c i e n t d e l a m i n a t i o nt i m e a n dv o l u m e r a t i ob e t w e e nt w op h a s e so fs i xs o l v e n ts y s t e m s o n em i x s o l v e n t st h a tc o n s i s t so f p e t r o l e u m n b u t a n o l a n d w a t e r 1 4 5 v v w a s s e l e c t e df o rh s c c c i t s d e l a m i n a t i o nt i m ei s2 5 s v o l u m er a t i ob e t w e e nu p p e ra n dn e t h e rp h a s e sw a s0 9 6 a n dt h ed i s t r i b u t i o nc o e f f i c i e n t so ft w om a i n c g l y c o s y lf l a v o n e so f b a m b o oi nt h e m i x s o l v e n t sw e r e3 8 0a n d 4 4 4 r e s p e c t i v e l y 2 t a k i n g t h eu p p e ro f t h em i x s o l v e n t sa ss t a t i o n a r yp h a s ea n dt h en e t h e ra sm o b i l e i i 浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文徐維婭 色譜技術(shù)和伏安法在竹葉提取物成分分析中的應(yīng)用研究 p h a s e s i xe l u t e df r a c t i o n s w h i c hi n c l u d eap a r ts t a y e di ns t a t i o n a r yp h a s e w e r e o b t a i n e db yh s c c ci n 3h o u r s t h es e p a r a t i n gc o n d i t i o n sw e r e8 0 0 r p mr o t a t e s p e e d 2 2 5 m l m i nf l o wr a t e a n d1 0 3m gi n j e c t i o na m o u n to fe b l 9 7 1s a m p l e t w o m a i nc g l y c o s y lf l a v o n e sw e r ed e t e c t e db yh p l ci nt h ef i f t hf r a c i t i o n fe t h e b i g g e s tp e a k 3 t h e f i f t hf r a c t i o nw a sp u r i f i e db yp h p l cu n d e r f o l l o w i n gc o n d i t i o n c o l u m n t e m p e r a t u r e3 0 f l o wr a t e 1 0m l m i n i n j e c t i o nv o l u m e1 0 0 此 u vd e t e c t i o n w a v e l e n g t h3 3 0 n m a n dp d a d e t e c t i o nw a v e l e n g t h1 9 0 6 0 0 n m t w of l a v o n o i d m o n o m e r sw e r ep r e p a r e da n db o t hh a v et h ec h a r a c t e ru va b s o r b a n c e t h e i rb a n d ia n db a n d1 1w e r el o c a t e di nt h er a n g e so f3 0 0 4 0 0 n r na n d2 4 0 2 8 5 n m a n d a b s o r b a n t ei n t e n s i o na l s oa c c o r d sw i t ht h ec h a r a c t e r i s t i co ff i a v o n o i d s 4 t h ec h e m i c a lc o n f i g u r a t i o no f t w om o n o m e r sw a si d e n t i f i e d b yh p l c m s t e c h n o l o g y r e s u l t ss h o w e dt h a tt h e ya l lh a v et h es a m em o l e c u l a rw e i g h to f4 4 8 w i t hs a m eb a n dia n dd i f f e r e n tb a n di ia b s o r b a n c e c o m p a r i n gw i t ht h es t a n d a r d s a m p l e sb o u g h t f r o mo fa m e r i c ai n d o f i n e c h e m i c a lc o m p a n y a n dt e s t i n gb y s t a n d a r da d d i t i o nm e t h o do fh p l c t w om o n o m e r sw e r ea p p r o v e da so r i e n t i n 8 c g l u c o s y l l u t e o t i n a n di s o o r i e n t i n 6 c g l u c o s y l l u t e o l i n i n d i v i d u a l l y 5 1d e t e r m i n a t i o no ft r a c ee l e m e n t so fc d p b z n c ub yt h e1 5 t hd i f f e r e n t i a l a n o d e s t r i p p i n gv o l t a m m e t r y w e r ec o n d u c t e dt o o i nt h es o l v e n tm e d i u mo f 0 0 1 m o i lp o t a s s i u m h y d r o g e nt a r t r a t ea n d0 0 4 5 m o i ln a a cw i t h 岬5 7 8 a l lo f f o u ri r o n sc a n p r o d u c ev e r ys e n s i t i v eo x i d a t i o nw a v e s t h ep e a kh e i g h ti sr e l a t e d l i n e a r l yw i t hi r o nc o n c e n t r a t i o ni nt h er a n g eo f1 0 81 0 一m o i l t h i sm e t h o dh a s b e e ns u c c e s s f u l l yu s e dt oi n s p e c tt h ec o n t e n to f c d p b z na n dc uo f e b l 9 7 1 a n d r e s u l t ss h o w e dp b a t 1 6 9 0 0 6 t g ga n d z na t 6 0 9 4 0 5 7 p g i nd r yb a s e m e t h o d sv a r i a t i o nc o e f f i c i e n t sw e r e3 3 8 a n d9 3l a n dt h er f i c o v e r yr a t e s w e r e8 4 7 1 0 8 a n d8 5 2 1 0 5 r e s p e c t i v e l y h o w e v e r c da n dc ui ne b l 9 7 1c o u l d n o tb ed e t e r m i n e dh e r e d u et ot h e i rc o n t e n t so v e rt h ei n s p e c t i n gl i m i to ft h i s i v 浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文徐維婭 色譜技術(shù)和伏安法在竹葉提取物成分分析中的應(yīng)用研究 m e t h o d t h e s es t u d i e sr e v e a l e dt h a tt h ef l a v o n eg l y c o s i d e si ne b lc o u l db es e p a r a t e da n d p u r i f i e da b o v e0 1 9s c a l e sb yh s c c cp l u sh p l c f a s ta n de f f e c t i v e 虹i te x p l o r e d a ne f f e c t i v er o u t et op r e p a r eb a m b o o l e a f f l a v o n o i ds t a n d a r d sa n ds c r l e dd o w na f o u n d a t i o nf o r s e t t i n gu pah i g h s t a n d a r dq u a l i t ya s s u r a n c es y s l l e mo fe b l m e a n w h i l e t h em e t h o da p p l i c a t i o no ft h ea n o d e s t r i p p i n gv o l t a m m e t r y i n c o n t i n u o u sd e t e r m i n a t i o no ft r a c ea m o u n t si ne b l 9 7 1w a ss i m p l e s e n s r i v e f a s t a n dd i s t u r b l e s sa n d c o s t l e s s s ov e r ys u i t a b l ef o rm a n u f a c t u r e r sa p p l i c a t i o n k e y w o r d s e x t r a c to fb a m b o ol e a v e s e b l c g l y c o s y lf l a v o n e t r a c ee l e m e n t h i g hs p e e d c o u n t e r c u r r e n t c h r o m a t o g r a p h y h s c c c p r e p a r a t i v eh i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h p h p l c h p l c m s a n o d e s t r i p p i n g v o l t a m m e t r y v 致謝 本論文是在二位導(dǎo)師一一張英教授和吳曉琴劓赦授的悉心拍導(dǎo)下 莧成的 導(dǎo)師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度 對事 皇的執(zhí)石追求 高尚的人格魅力 和藹可親的工作作風(fēng) 時制威染和鼓舞著學(xué)t 使我受蓋睡淺 這一切 對我的一生都埒產(chǎn)生t 要的影響 在即將牛業(yè)之際 謹(jǐn)向?qū)熤乱猿绺?的鞋意和衷心的感豫 在本論文的設(shè)計 試驗和論文撰寫過程中 高速逆流色譜部分得到 了機(jī)州育學(xué)院的杜珙珍高極研究炙 夏明碩士的史力協(xié)助 高故液相色 譜實玲部分還得到了浙江省疾病控瑚和防疫站的任一平高級工程師 鐵 曉威工程師的竭誠帶助 溶出伏安法的條件摸索得到了鈍請筑教投 李 秀玲射教棱的悉心拍點 謹(jǐn)在此向他們表示衷心的感謝 格簧值博士和碩士同學(xué)沈海濤 王啟軍 潘向榮 王樂芬 俞卓裕 姚曉寶等為本論文曲研究工作提供了煎情的幫助 特別值得一提的是 我的師妹 師弟們 鄭t 鶯 胡曉結(jié) 陸帕重等 在本文的試玲部分 做了太量的工作 在此一弄表示誠摯的謝意 我還要感鏘農(nóng)業(yè)工程與食品科學(xué)學(xué)院和食品系的領(lǐng)導(dǎo)和其他老師 在我求學(xué)期間說恰予的關(guān)心和幫助 羹后 要特別或鴿 在我 年求學(xué)生髓中 一直關(guān)心我 支持我的家 人 是他f 她 們給了我一往直前的勇氣和充鞭國難的決心 謹(jǐn)將此文獻(xiàn)恰我所蠡愛均人們 徐維婭 0 0 0 2 年羅恿于晰大畢家池 浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文徐維婭 色譜技術(shù)和伏安法在竹葉提取物成分分析中的應(yīng)用研究 前言 黃酮類化合物 f l a v o n o i d s 簡稱類黃酮 廣泛分布于植物界 是許多中 草藥和食物的有效成分 為當(dāng)今國內(nèi)外的醫(yī)藥保健品行業(yè)和功能性食品領(lǐng)域 所矚目 類黃酮類具有c 6 c 3 c 6 的基本結(jié)構(gòu) 主要包括黃酮 黃酮醇 雙氫 黃酮 醇 異黃酮 黃烷酮 查爾酮等十幾個大類 l 近2 0 年來 類黃酮日 益引起人們的重視 迄今自然界中發(fā)現(xiàn)的已達(dá)數(shù)千種 大多具有顯著的生理 和藥理活性 對一些常見病 多發(fā)病 慢性病有良好的防治作用 隨著對類 黃酮研究的不斷深入 分析 測試和制備手段也得到了迅速發(fā)展 2 1 0 1 高速逆流色法 h s c c c 在天然產(chǎn)物研究中的應(yīng)用 逆流色譜 c o u n t e r e u r r e n tc h r o m a t o g r a p h y c c c 是近4 0 年發(fā)展起 來的一種新型的色譜技術(shù) 但在發(fā)展過程中遇到了許多挫折 3 直至上世紀(jì) 8 0 s 初期 高速逆流色譜 h i g hs p e e d c o u n t e r c u r r e n t c h r o m a t o g r a p h y h s c c c l 的出現(xiàn) 才使得c c c 技術(shù)取得了突破性的進(jìn)展 h s c c c 利用流體在聚四氟 乙烯螺旋管內(nèi)的方向性與高速行星式運(yùn)動結(jié)合 產(chǎn)生 種獨(dú)特的流體動力學(xué) 現(xiàn)象 使互不相溶的兩相溶液在螺旋管中充分混合 順序傳遞 導(dǎo)致樣品中 各個組分由于分配系數(shù)的差別而有效地分離 目前 h s c c c 在天然產(chǎn)物的研究 中已有廣泛的應(yīng)用 0 1 1h s c c c 在類黃酮中的應(yīng)用 有文獻(xiàn)報道 用氯仿 甲醇 水 4 3 2 體系 從芫花總黃酮中一次進(jìn)樣 l o o m g 分離得到了3 羥基蕪花素 洋芹素和木犀草素 4 用氯仿 甲醇 水 6 3 2 體系 以1 8 0 0 r p m 的轉(zhuǎn)速在1 5 r a i n 內(nèi)從大黃根莖提取物中分離出大黃素 甲醚 蘆薈大黃素 大黃酸 大黃酚和大黃素 5 以氯仿 甲醇 水 3 3 4 0 2 7 體系和7 0 0 r p m 的轉(zhuǎn)速 在7 0 m i n 內(nèi)從黃酮混合物中分離出橙皮素 4 羥基 黃 酮和槲皮素 并有效地利用了梯度洗脫技術(shù) 6 v a n h a e l e n 等將h s c c c 與h p l c 相結(jié)合 從5 0 0 m g 的銀杏葉萃取物中一次分離出了7 個黃酮糖苷 其方法是 以水為固定相 開始以乙酸乙醣為流動相 然后在流動相中逐漸添加異丁醇 到分離結(jié)束時乙酸乙酯與異丁醇之比為6 4 1 7 j o k a 等以氯仿 甲醇 水 4 3 2 體系 在3 5 0 0 r p m 下 8 m i n 內(nèi)從s e eb u c k t h o m 的果實萃取物中分離得到了5 浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文徐維婭 色譜技術(shù)和伏安法在竹葉提取物成分分析中的應(yīng)用研究 個主成分 其分離速度完全可與h p l c 相比較睥 還有報道從大黃羥基蒽醌總 苷元中分離了大黃酸 蘆薈大黃素 大黃素 大黃素甲醚 大黃酚等f 9 用正 己烷 乙酸乙酯 甲醇 水 9 1 5 5 在1 8 0 0 r p m 的轉(zhuǎn)速下 7 0 m i 1 1 內(nèi)從掌葉大 黃的根莖提取物中分離出大黃素甲醚 蘆薈大黃酸 大黃酸 大黃酚和大黃索 d o 將e p i l o b i u mp a r v i f l o r u m 柳葉菜屬 的甲醇萃取物進(jìn)樣2 毒分離得到了 槲皮苷 楊梅苷 異楊梅苷和沒食子酸 兩相溶劑系統(tǒng)為氯仿 甲醇 水 7 1 3 8 w 1 9 9 2 年c h e n 利用氯仿 甲醇 水 4 3 2 的兩相系統(tǒng)對5 個類黃酮進(jìn)行 了分離 并作了定量分析 1 2 1 1 9 9 4 年k a p a d i a 利用正己烷 乙酸乙醣甲醇 水 1 4 2 5 2 5 從g a r c i n i a k o l a 藤黃屬 種子中分離出了多個雙黃酮 1 3 0 1 2h s c c c 在生物堿中的應(yīng)用 生物堿是植物中一類重要的化學(xué)組分 分布非常廣泛 至少有5 0 多科1 2 0 屬以上的植物中證明有生物堿存在 已知的種類在2 0 0 0 種以上 到目前為止 用h s c c c 研究天然產(chǎn)物化學(xué)成分的也以生物堿的報道為多 正丁醇 丙酮 水 8 1 1 0 體系曾用于從委內(nèi)瑞拉的箭毒中分離馬枯素和 p a n a r i n e 樣品進(jìn)樣達(dá)7 0 0 m g t 正丁醇一氯化鈉 0 1 m 0 1 l 1 1 體系用于從 s t r y c h n o su s a m b a r e n s i sf 馬錢科 的樹干和樹皮中分離1 0 羥基 n k 甲基一柯楠醇 1 5 用四氯化碳 甲醇 水 2 0 2 0 2 從a n i s o c y c l ac y m o s a 的根中分離得到了 一個季銨鹽生物堿和5 個叔芐基異奎寧生物堿 l 用正己院一乙酸乙酯一甲醇 水 3 7 5 5 在7 0 r a i n 內(nèi)以1 8 0 0 r p m 的轉(zhuǎn)速從粉防已干根的提取物中分離了 粉防己堿 去甲粉防己堿和輪環(huán)藤酚堿 17 1 從唐古特山莨菪粗提物中 用氯仿 磷酸鹽 o 0 7 m o f l p h6 4 1 1 系統(tǒng)分離出了4 個生物堿 l s l 從小蔓長春花 植物的葉子中用正己烷 乙醇 水 6 5 5 體系分離了長春胺和長春辛 l 將 h s c c c 與m s 聯(lián)用分析長春胺和長春辛堿1 2 0 分別用正己烷 乙酸乙酯一乙醇一 水 6 3 2 5 和正已烷 乙酸乙酯 甲醇 水 1 1 l 1 從紅豆杉的粗提物中 分離純化了紫杉醇 c e p h a l o m a r m i n e 巴卡掣2 l 以石油醚 乙酸己酯 甲醇一水 5 0 7 0 8 0 6 5 從紫杉醇的混合物中分離得到了純的紫杉醇和 c e p h a l o m a n n i n e 2 2 1 0 1 3h s c c c 在木脂素中的應(yīng)用 木脂素一般存在于植物的木質(zhì)部和樹脂中 所以稱為木脂素類 l e e 等以 正己烷 甲醇 水 6 5 5 以1 5 0 0 r p m 的轉(zhuǎn)速在8 0 m i n 內(nèi)從江花五味子果實核 浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文徐維婭 色譜技術(shù)和伏安法在竹葉提取物成分分析中的應(yīng)用研究 的乙醇萃取物中分離了2 個結(jié)構(gòu)十分相似的木脂素的成分一s c h i s a i i l l e n d 和它的 乙酸化物 2 引 以氯仿 甲醇 水的溶劑系統(tǒng)從西伯利亞人參的根中分離得到了純 的e l e u t h e r o s i d e 2 4 1 n i t a o 等t 2 5 1 于1 9 9 1 年主張用正己烷 乙腈 乙酸乙酯 水 8 7 5 1 的兩相系統(tǒng)從m a g n o l i av i r g i n i a n 中進(jìn)行n e e l i g n a n s 的最初純化 它比 傳統(tǒng)的柱色譜更快 更有效 更經(jīng)濟(jì) 0 1 4 h s c c c 在香豆素類中的應(yīng)用 香豆素及其衍生物廣泛分布于植物界 曾用氯仿 甲醇 水 1 3 2 3 1 6 的兩相系統(tǒng) 一次進(jìn)樣4 4 0 m g 來自于l o m a t i m md i s s e c t u m 的樣品 得到了3 個香豆素的糖苷和1 個黃酮糖苷 2 6 用氯仿 甲醇 水 1 3 7 8 的兩相體系分離 并分析了香豆素混合物中的甲醚散形酮 7 甲氧基 香豆素 7 羥基 6 甲氧基 香豆素和7 羥基 香豆素 2 7 俞維樂等1 2 8 1 1 9 9 5 年從a r t e m i s i ad a l a i l a n a a ek a r a s c h e n 中以氯仿 甲醇 水 2 l 1 分離出了純的7 羥基 6 甲氧基 香豆素以及 i s o f r a x d i n 和t a x a x e r y l a c e t a t e 達(dá)到了很好的分離效果 綜上所述 h s c c c 在天然產(chǎn)物中的分離制備是很成功的 進(jìn)樣量可從毫克 級到克級 進(jìn)樣體積可從幾毫升到幾十毫升 不但適用于非極性化合物 而且 適用于極性化合物的分離 它可用于天然產(chǎn)物粗提物的去雜 也可用于精制 甚至直接從粗提物一步純化到達(dá)純品 o 2 高效液相色譜法 h p l c 高效液相色譜 h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y h p l c 是2 0 世紀(jì)6 0 s 末 7 0 s 初發(fā)展起來的一種分離分析技術(shù) 它是在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ) 上 引入氣相色譜的理論 在硬件上采用了高壓泵 高效固定相和高靈敏度檢 測器等 因而具備速度快 效率高 靈敏度高 操作自動化的特點 尤其適合 于揮發(fā)性低 熱穩(wěn)定性差 分子量大及離子型化合物的分析 2 9 1 根據(jù)h p l c 在 植物化學(xué)研究中的樣品處理量和工作目的 可分為分析型和制備型兩類 0 2 1 分析型高效液相色譜 分析型h p l c 以分離和定性為目的 所使用的色譜柱內(nèi)徑一般為2 i 5 r a m 柱長l o 3 0 c m 最大進(jìn)樣量小于l m g 進(jìn)樣體積為5 p l 左右 流動相流 速為0 8 1 2m l m i n 分析型h p l c 已廣泛用于天然產(chǎn)物的分析 成為中草藥 有效成分 食品化學(xué)成分和保健功能因子含量測定 純度鑒定以及質(zhì)量監(jiān)控的 浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文 徐維婭 色譜技術(shù)和伏安法在竹葉提取物成分分析中的應(yīng)用研究 常用手段 2 j 0 2 1 1 分析型h p l c 在類黃酮中的應(yīng)用 類黃酮的h p l c 分析通常用反相c 1 8 色譜柱 由于黃酮分子中存在酚羥基 流動相中加入少量的酸可改善峰形 陳曉嵐等 3 0 使用o d sc 1 8 柱 4 6 2 5 0 r a m 5 岬 流動相為甲醇 0 1 的磷酸二氫鈉水溶液 6 5 3 5 檢測波長3 6 0 n m 測定銀杏黃酮浸膏中槲皮素和總黃酮的含量 周欣等 3 1 悃甲醇溶解 加鹽酸水 浴回流水解銀杏葉提取物 用t w gc 1 8 4 6 1 5 0 m m 柱 流動相為甲醇 水 磷 酸 5 0 4 9 8 0 2 檢測波長3 6 0 n m 分離銀杏葉提取物中類黃酮 并測定其中 槲皮素的含量 鄔建敏等 3 2 用甲醇浸提 用w y gc 1 8 色譜柱 以甲醇 水 磷酸 6 0 4 0 o 5 為流動相 以2 5 4 n m 為檢測波長 測定了1 0 種竹子的葉 枝中 的黃酮化合物總量蘆丁含量 測得竹葉中黃酮總量在5 9 1 3 1 m 毫 g 竹枝在 1 3 4 3 m g 幢 張廷之等 3 副用z o r b a xc 1 8 柱 4 6 2 5 0 r a m 流動相為甲醇 水 冰乙酸 4 0 6 0 2 檢測波長2 8 0 n m 以蘆丁為參照物 輔以二極管陣列檢 測技術(shù) 測定了毛竹葉中總黃酮的含量 王萍等p 4 j 用y w g c l 8 柱 4 6 1 0 0 m m 1 0 岫 流動相為甲醇 水 o 2 m o l 幾 h 3 p 0 4 o 5m o l lkh 2 p 0 4 8 0 1 2 0 l 8 的溶劑系統(tǒng) 檢測波長2 8 0 n m 采用梯度淋洗法 使水飛薊素中的7 種主要成分得到完全分離 胡敏掣 1 用 r p h p l c 等梯度洗脫的方式成功地分辨出銀杏葉1 7 個黃酮糖苷 并定量分析 了7 個主要糖苷 含4 個獨(dú)特結(jié)構(gòu)和活性的桂皮酰黃酮糖苷 的相對含量 陳發(fā)奎掣 傭三維h p l c 法測定了牛黃解毒片中黃芩苷的含量 在i n t e r t s i l o d s 柱上 以含醋酸的乙睛 水系統(tǒng)線性梯度洗脫 繪制三維譜圖 由峰形 峰位確定圖譜中指標(biāo)成分的吸收峰 按標(biāo)準(zhǔn)曲線 由峰面積計算含量 p i e t t a 等口7 在n u c l e o s i l1 0 0c 1 8 柱上 以o 5 h 3 p 0 4 m e o h t h f 梯度洗脫 5 0 m i n 分 離了1 5 個銀杏黃酮化合物 6 個化合物由標(biāo)準(zhǔn)品對照確認(rèn) 其他由u v 或可見 分光光度計及二級管陣列檢測器 p d a 確定 0 2 1 2 分析型h p l c 在其它天然產(chǎn)物的應(yīng)用 有關(guān)h p l c 分析其它天然產(chǎn)物的文獻(xiàn)報道非常多 如劉巍等 3 3 塒苔素內(nèi)酯 及其有關(guān)甾族化合物進(jìn)行衍生后 分別用紫外 熒光 電化學(xué)檢測器進(jìn)行檢測 的h p l c 分析法 呂光華 等用i i p l c 法測定了十大功勞屬植物中豹7 種生物 堿成分 原源掣4 0 用h p l c 法測定酸模屬植物根中活性成分一酸橫素的含量 塑鋈奎蘭嬰主堂些堡蘭堡絲絲 魚堂墊查塑垡窒鱉壟笪生塑墼塑壁坌坌塑 竺壁旦里窒 李蔚等 4 用h p l c 對以白芍為主要原料的保健食品中芍藥苷的含量測定 楊楓 等f 4 2 用h p l c 法測定西洋參蜂王漿口服液中的人參皂苷與癸烯酸等 o 2 2 制備型高效液相色譜 制備型高效液相色譜 p r e p a r a t i v eh i g h p e r f o r l l a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y p h p l c 是在傳統(tǒng)分析型h p l c 的基礎(chǔ)上發(fā)展起來 以分離 獲取大量的單組分為目的的一種高效分離純化技術(shù) 根據(jù)制備量的大小又可以 分為兩種類型 一種是將分析型h p l c 按比例放大 操作參數(shù)與分析型大致相 同的半制備型h p l c 其所用色譜柱內(nèi)徑為8 1 0 m m 柱長2 0 5 0 c m 進(jìn)樣 體積o 2 2 m l 流動相流速為3 5m l m i n 一次制備量在毫克數(shù)量級 另一 種是專用制備型h p l c 其色譜系統(tǒng)及操作參數(shù)與分析型h p l c 有較大的差別 所用色譜柱內(nèi)徑在l o m m 以上 流動相流速在5 5 0 m l m i n 左右 一次制備量可 高達(dá)1 0 0 0 m g 4 3 1 由于技術(shù)上的原因 長期以來p h p l c 的進(jìn)展比較緩慢 隨著 理論研究的深入 新穎的填料 新的填充方法以及在儀器和流程上的進(jìn)展 近 年來p h p l c 獲得迅速發(fā)展 從直徑1 0 m m 的實驗室半制備到直徑5 0 0 m m 的工 業(yè)制備柱及其相應(yīng)的設(shè)備相繼商品化 解決了多方面的分離純化問題 4 4 1 作為 一種制備手段 它具有分離條件溫和 分離檢測過程中一般沒有樣品損壞 易 于原物回收 且裝置簡單有效等優(yōu)點 天然產(chǎn)物研究中面臨的一個主要方面就是從天然植物中分離純化鑒定化合 物 p h p l c 在天然產(chǎn)物研究領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的原因 4 4 1 化合物結(jié)構(gòu)鑒定儀器 的發(fā)展 使結(jié)構(gòu)鑒定所需的樣品量越來越少 一般只需幾到幾十毫克就可解決 由p h p l c 得到毫克級的樣品是非常容易的 2 天然產(chǎn)物化學(xué)經(jīng)過多年的研究 各種藥用動植物中含量較高的成分大多已被分離和研究 而含量較少的成分由 于分離方法的限制不易獲得 而p h p l c 方法則非常適合于分離純化含量較低 的成分 3 p h p l c 在分離純化水溶性成分時有較大優(yōu)勢 0 2 2 ip h p l c 在類黃酮中的應(yīng)用 h p l c 在不同植物黃酮分析中的應(yīng)用已相當(dāng)成熟 而用其來制備類黃酮雖 有一定的研究 但仍不成熟 戴軍 王洪新等 4 5 應(yīng)用s p h e r i s o r b c 6 h 5 色譜柱 8 3 0 0 m m i o m 流動相為甲醇 水 1 4 8 6 v v 檢測波長5 4 0 n m 成功地 分離和制備了蘆葦葉中的類黃酮 并進(jìn)行了定性和定量分析 h u c hc h r i s t i a w 等 4 6 用p h p l c 從櫻草花中分離了單 雙 三 五 4 種甲氧基黃酮 制備量 塑堅奎蘭墮主蘭垡笙苧堡堡絲 魚塑墊查塑垡壅鯊壟笪 堡里塑壁坌坌蛭 塑窒里墮壅 分別達(dá)到了8 9 8 1 2 m g 鄒耀洪等1 47 j 用l i c h r o s o r br p 1 8 色譜柱f 8 0 3 0 0 m m 1 0 m 流動相為c h 3 0 h h 2 0 h c o o h 7 5 2 5 0 8 v v 檢測波長 3 3 0 n m 從楊梅葉中分離和制備了4 種黃酮醇苷和1 種黃酮醇 用 s p h e r i s o r b c 6 h 5 色譜柱 8 3 0 0 m m 1 0 p r o 流動相為甲醇 水 1 4 8 6 進(jìn)行制備 定時收集檢測器出口組分 并用p d a 檢驗收集液純度 從甘薯葉黃酮中分離 純化制備了4 種黃酮單體 4 8 同時用流動相為甲醇 水 1 5 8 5 v 檢測波長 3 4 0 n m 光譜采集 1 9 0 6 0 0 n m 從箬竹葉中分離制備了8 種黃酮類化合物 4 9 1 0 2 2 2p h p l c 在其它天然產(chǎn)物制備研究中的應(yīng)用 徐光國1 5 0 運(yùn)用國產(chǎn)y z s 3 型液相制備色譜儀分離制備了抗癌藥葫蘆素b 標(biāo)準(zhǔn)品 茯苓三萜酸成分和金銀花中的主要成分綠原酸 陳若蕓等1 5 1 用 p h p l c 制備了靈芝中的三萜類化合物 張仁斌等吲用p h p l c 對青藩素異構(gòu)體 進(jìn)行了分離制備 賀賢國等 5 3 用p h p l c 制備了芫花甲酯 陳波等 蚓用p h p l c 制備分離純化菊苣酸標(biāo)準(zhǔn)對照品 于志強(qiáng)等1 5 5 利用正相高效液相半制備色譜制 備了新地質(zhì)卟啉化合物 雷歷等 5 6 利用反相制備高效液相色譜結(jié)合溶劑萃取 大孔吸附樹脂柱色譜和葡聚糖凝膠l h 2 0 柱色譜方法 從管花肉蓯蓉的乙醇提 取物中純化制備了苯乙醇苷類化合物 松果菊苷的標(biāo)準(zhǔn)品 純度可達(dá)9 8 以 上 近幾年來 p h p l c 技術(shù)在制備高純度生物活性物質(zhì)的方面有了長足的發(fā) 展 有關(guān)報道不斷出現(xiàn) 如h a t c h 等 5 7 1 對牛血清蛋白 鐵蛋白等進(jìn)行了制備分 離 制備量達(dá)數(shù)百毫克 c i l d e n a s tt h o m a s 掣5 8 悃p h p l c 和半制備h p l c 從 人角質(zhì)層脂肪中分離出神經(jīng)酰胺單體 王學(xué)彤等 5 9 用反相高效液相色譜法分離 制備了魚油中的e p a 和d h a 周海歐等 6 0 用美國b e c k m a n3 4 4 m h p l c 進(jìn)行 了鹿茸中多肽的分離制備 0 3 極譜和伏安法 極譜法是上世紀(jì)二十年代j 海洛夫斯基 h e y r o v s k y 6 l j 所創(chuàng)立的一種電 化學(xué)分析方法 基于可還原或可氧化物質(zhì)在滴汞電極上進(jìn)行電解的過程中 由于濃差極化而形成電流一電壓極化曲線 根據(jù)此曲線進(jìn)行定性 定量 后 來 柯爾蜀夫 1 o 慫o 等1 6 2 把凡是使用微電極以電流一電壓曲線為基礎(chǔ)來研 究溶液組成的電化學(xué)分析方法統(tǒng)稱為 伏安法 6 塑堊奎蘭堡主蘭堡堡苧 笙絲絲 魚塑墊查塑堡塞鎏堡笪生堡壁塑盛坌坌塹 塑查旦翌壅 隨著當(dāng)今世界科學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展 對分析化學(xué)的靈敏度和分辨率提出 了更高的要求 各種儀器分析技術(shù)都得到了長足的發(fā)展 電化學(xué)方法也是如 此 近年來迅速發(fā)展 著廣為應(yīng)用的極譜和伏安法新技術(shù)有 溶出伏安法 催化極譜法 交流極譜法 脈沖極譜法 半微分半積分極譜法 放射極譜法 等等 6 3 0 3 1 極譜和伏安法在微量元素分析測定中的應(yīng)用 極譜和伏安法在微量元素分析測定中應(yīng)用較多 1 9 8 9 年 李啟隆等 6 4 蝽0 用鉛 二甲酚橙絡(luò)合物的極譜行為對食糖中的鉛進(jìn)行測定 發(fā)現(xiàn)在鉛濃度2 0 x 1 0 4 6 0 1 0 擊m o f l 范圍內(nèi) 電流與濃度成線性關(guān)系 萬渝平 6 5 用示波極 譜法測定6 個不同茶葉樣品中的鉛含量 并與國標(biāo)方法一雙硫腙比色法進(jìn)行 對比實驗 結(jié)果表明該法準(zhǔn)確可靠 與國標(biāo)法相比無顯著差異 謝媚等 6 6 在 h c i 酒石酸 抗壞血酸體系中 用催化示波極譜法測定了皮蛋中微量鉛 在 此體系中 p b i i 于 0 5 4v 處產(chǎn)生一個非常靈敏的吸附催化波 鉛含量在 o 0 2 5 3 1 t g m l 范圍內(nèi)波高與濃度呈良好的線性關(guān)系 相關(guān)系數(shù) 幻為0 9 9 7 6 檢測限為o 0 2 5 1 1 9 m l 費(fèi)俊杰等 6 7 建立了用槲皮索修飾碳糊電極測定痕量鉛 的新方法 在0 1 0 m o l l 的甲酸鹽緩沖液 p h4 3 中 于 0 1 0 v v s s c e 攪拌 富集 再在 0 7 0v 靜止還原4 0 s 后 陽極化掃描 于 0 4 2 v 左右獲得一靈敏 的鉛陽極溶出峰 最佳條件下 富集不同時間 其二次導(dǎo)數(shù)峰電流與p b 2 在 1 0 x 1 0 8 8 0 1 0 7 m o l l 和2 0 l f f 9 6 o 1 0 8 m o l l 兩個濃度范圍內(nèi)呈線 性關(guān)系 檢出限為8 0 1 0 o m o l l 徐澤民等 郁 采用示差脈沖陽極溶